Hoạt động Nhiệt độ Thời Gian Chu kì
Biến tính 950C 2 phút 1 Biến tính 950C 30 giây
40 Gắn mồi 550C 30 giây
Kéo dài 720C 60 giây
Hoàn thành 720C 5 phút 1 Giữ sản phẩm 40C ∞
Sản phẩm PCR sẽ được kiểm tra trên gel agarose 1,2%.
• Phương pháp điện di kiểm tra sản phẩm Các bước thực hiện:
Bước 1: Chuẩn bị dung dịch đệm và bản gel
Bản gel được chuẩn bị bằng dung dịch đệm TBE 1X hòa tan với 1,2 gram agarose đặt trong lò vi sóng ở 1000C trong vòng 5 phút, đổ vào khuôn các lược được cài sẵn để tạo bản gel với các giếng tra mẫu cần điện di. Khi bản gel đã đông cứng đặt bản gel vào bể điện di và bổ sung dung dịch đệm TBE ngập bản gel khoảng 3 – 5 mm.
Bước 2: Tra mẫu điện di
Thêm 2 µl loading dye vào 8 µl sản phẩm PCR, trộn đều hỗn dịch bằng pipet và chuyển vào các giếng trong bản thạch. Điện di đồng thời cả thang chuẩn DNA (marker), thường sử dụng 4-6 µl DNA Marker.
Bước 3: Chạy điện di
Nguồn điện trong điện di thường sử dụng ở hiệu điện thế 100V cường độ 100mA, thời gian chạy điện di trong 30 phút.
Bước 4: Nhuộm bản gel và đọc kết quả
Kết thúc điện di, bản gel được lấy ra nhuộm Redsafe trong khoảng 5-7 phút. Sau khi nhuộm bản gel được chuyển vào máy phát tia UV để quan sát kết quả điện di. Vị trí các đoạn DNA được phát hiện bằng những vệt sáng tương ứng của thuốc nhuộm, chụp ảnh và lưu kết quả.
3.5.4. Phương pháp làm tiêu bản vi thể
Quy trình làm tiêu bản vi thể bao gồm: Quy trình chuyển đúc mẫu:
Bước 1: Lấy mẫu và cố định
Mẫu bệnh phẩm sau khi lấy vào trong formol 10% trung tính trong ít nhất 24-48h ở nhiệt độ thường, yêu cầu mẫu bệnh phẩm cần được ngâm ngập trong dung dịch formol và thể tích dung dịch phải gấp dung tích mẫu từ 5-10lần. (chú ý: nếu lọ đựng mẫu nhỏ phải cắt mẫu nhỏ để dung dịch có thể thẩm thấu hết vào trong tổ chức mô bệnh phẩm).
Mẫu sau khi ngâm trong formol 10% từ 24-48h thì có thể cắt chuyển đúc. Cắt mẫu sao cho kích cỡ và hình dáng của mẫu vừa với cassettes.
Bước 3: Chuyển mẫu
Rửa nước: Dưới vòi nước máy, ngâm các cassettes mẫu trong bình nước máy để dưới vòi nước máy chảy trong 30 phút.
Để ngâm trong bình nước cất: chuyển mẫu sang bình nước cất ngâm 30 phút Chuyển ngâm cồn (quy trình bắt đầu từ 10h sáng). Mục đích để đẩy nước ra khỏi mô bào.
Mẫu lấy ra khỏi nước được thấm khô bằng giấy vệ sinh rồi được chuyển lần lượt qua:
Cồn 1: 800/1h, Cồn 2: 900/1h, Cồn 3: 950/2h, Cồn 4 : 950/2h, Cồn 5: 1000/13h;
Cồn 6 : 1000/1h, Cồn 7: 1000/1h, Cồn 8: 1000/1h;
Chuyển ngâm xylen. Mục đích để đẩy cồn ra khỏi mô bào.
Mẫu lấy ra khỏi cồn được thấm khô bằng giấy vệ sinh rồi được chuyển lần lượt qua:
Xylen 1: 1h, Xylen 2: 1h, Xylen 3: 1h;
Chuyển ngâm paraffin. Mục đích để thay thể và đẩy xylen ra khỏi mô bào. Mẫu lấy ra khỏi xylen thấm khô và cho vào lần lượt:
Paraffin 1 : 2h. Sau đó qua paraffin 2: 2h (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Bước 4: Đúc mẫu
Chuẩn bị dụng cụ, khuôn mẫu, paraffin. Khi đổ paraffin phải nóng cảy hoàn toàn nhưng nhiệt độ không vượt quá 560C tránh làm khô mẫu.
Cắt và dán mẫu: cắt block bằng máy Microctocom với độ dày 2 - 3µm sao cho mảnh cắt không rách, nát phần mô bào là được, cho vào nước để giãn bệnh phẩm rồi cho vào bể nước ấm 450C. Sau khi bệnh phẩm giãn dùng lam kính vớt bệnh phẩm, để tủ ấm 370C.
Quy trình nhuộm tiêu bản
Tiêu bản sau khi cắt để tủ ấm 370C ít nhất 2h đem đi nhuộm.
Ngâm giỏ tiêu bản lần lượt qua:Xylen 1: 5 phút, Xylen 2: 5 phút, Xylen 3: 5 phút
Bước 2: Khử xylen
Ngâm giỏ tiêu bản lần lượt qua các cốc cồn:
Cồn 1000: 5 phút, Cồn 1000: 5 phút, Cồn 900: 5 phút, Cồn 700: 5 phút
Bước 3: Khử cồn
Rửa nước thường: 5 phút. Ngâm nước cất: 5 phút
Lau khô từng tiêu bản, xếp ngửa lên giá chuẩn bị nhuộm.
Bước 4: Nhuộm Hematoxylin
Thời gian: 12 phút. Rửa nước thường: 3 phút. Ngâm nước cất: 3 phút
Bước 5: Nhuộm Eosin
Thời gian: 5 phút. Rửa nước thường: 2 – 3 phút. Ngâm nước cất: 2 phút
Bước 6: Đẩy nước, nhúng tiêu bản nhiều lần qua các cốc cồn sau nhuộm: Cồn 1: 900/5 phút, Cồn 2: 1000/5 phút, Cồn 3: 1000/5 phút
Bước 7:Khử cồn, nhúng tiêu bản qua các cốc xylen sau nhuộm: Xylen 1: 5 phút, Xylen 2: 5 phút
Bước 8: Gắn lamen
Nhỏ một giọt Baume canada lên lamen rồi gắn nhanh lên tiêu bản (chú y tránh tạo bọt khi gắn lamen), sau đó ghi nhãn lên tiêu bản.
3.5.5. Phương pháp sử lý số liệu
Các số liệu thu thập từ Phòng khám thú y Cộng Đồng được xử lý bằng phương pháp thống kê sinh học và phần mềm Excel 2010.
Xác định các chỉ tiêu theo dõi:
Tổng số con chết
Tỷ lệ chết (%) = x 100 Tổng số con theo dõi
PHẦN 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1. TÌNH HÌNH MẮC CÁC LOẠI BỆNH Ở CHÓ TẠI PHÒNG KHÁM 4.1.1. Phân loại nhóm bệnh của chó mang đến khám và điều trị 4.1.1. Phân loại nhóm bệnh của chó mang đến khám và điều trị
Trong thời gian thực hiện đề tài tại phòng khám thú y Cộng đồng – Khoa thú y, từ 10/2017 đến 10/2018có tổng cộng 220 ca bệnh được theo dõi và tiến hành điều trị. Kết quả phân loại các nhóm bệnh được trình bày ở bảng 4.1.
Bảng 4.1. Phân loại các nhóm bệnh ở chó được mang đến khám và điều trị tại phòng khám thú y Cộng đồng – Khoa thú y STT Nhóm bệnh Số ca mắc bệnh (con) Tỷ lệ mắc bệnh (%) 1 Bệnh truyền nhiễm 86 39,09 2 Bệnh nội khoa 49 22,27 3 Bệnh ký sinh trùng 21 9,54 4 Bệnh ngoại khoa 35 15,90 5 Bệnh sản khoa 29 13,18 Tổng 220 100 Trong đó :
Bệnh truyền nhiễm: thường gặp là các bệnh như viêm ruột tiêu chảy do (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Parvovirus, bệnh Care, bệnh xoắn khuẩn do Leptospira...
Bệnh nội khoa: điển hình các bệnh về đường tiêu hoá như viêm dạ dày ruột, rối loạn tiêu hoá...và các bệnh về đường hô hấp.
Bệnh ký sinh trùng: bao gồm nhóm nội ký sinh trùng (bệnh giun sán) và nhóm ngoại ký sinh trùng như ve, rận, ghẻ, mò bao lông hay nấm.
Bệnh ngoại khoa: như apse, chấn thương, triệt sản, tai nạn...
Bệnh sản khoa: bao gồm đẻ khó, viêm vú, viêm tử cung...
Kết quả bảng 4.1 cho thấy trong tổng số 220 trường hợp mắc bệnh được mang đến khám và điều trị, tỷ lệ chó mắc nhóm bệnh truyền nhiễm cao nhất (39,09%).Truyền nhiễm là nhóm bệnh nguy hiểm, lây lan nhanh. Có
nhiềunguyên nhân dẫn đến tỷ lệ mắc bệnh của nhóm bệnh truyền nhiễm cao, trong đó có chế độ nuôi dưỡng, chăm sóc, vệ sinh môi trường sống chưa hợp lý; việc tiêm phòng vacxin chưa được chú trọng và người nuôi chưa có ý thức về phòng bệnh cho vật nuôi. Đồng thời, nước ta có khí hậu nóng ẩm tạo điều kiện thuận lợi cho vi khuẩn, virus tồn tại và phát triển, gây bệnh cho vật nuôi. Bên cạnh đó là việc nhập lậu các giống chó từ nước ngoài về không qua kiểm dịch du nhập nhiều mầm bệnh truyền nhiễm mới từ nước ngoài vào.
Nhóm bệnh nội khoa chiếm tỷ lệ khá cao (22,27%). Nhóm bệnh nội khoa thường xuất hiện khi thời tiết bất lợi, con vật không được nuôi dưỡng chăm sóc hợp lý như nằm nơi gió lùa, ít được vận động, thức ăn không phù hợp...
Nhóm bệnh ký sinh trùng có tỷ lệ mắc là 9,54%. Nguyên nhân chính do môi trường sống không sạch sẽ, con vật ăn bẩn, không được tẩy giun sán thường xuyên và định kỳ. Chó là động vật máu nóng, tuyến mồ hôi dưới da không phát triển nên rất dễ bị viêm lỗ chân lông, viêm da. Hơn nữa, chó thường có mùi hôi đặc trưng, mùi này rất rõ khi chó dính phải nước mưa. Vì thế người nuôi chó thường hạn chế mùi này bằng cách tắm bằng dầu tắm, nhưng do thiếu hiểu biết nên cách dùng chưa phù hợp, da thường xuyên bị ẩm ướt, dễ mắc các bệnh ngoại ký sinh trùng.
Nhóm bệnh ngoại khoa và nhóm bệnh sản khoa chiếm tỷ lệ thấp hơn nhóm bệnh truyền nhiễm và nhóm bệnh nội khoa, lần lượt là 15,9% và 13,18%. Các ca bệnh ngoại khoa chủ yếu do tai nạn dẫn đến gãy xương, xây sát dẫn đến nhiễm trùng, apse, ổ mủ... Các bệnh sản khoa hay gặp là đẻ khó đặc biệt các giống chó nhỏ như Chihuahua, Fox hay tụt canxi huyết sau đẻ dẫn đến bại liệt, viêm nhiễm tử cung...
Tỷ lệ chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do Parvovirustype 2
Để đánh giá mức độ phổ biến của bệnh viêm ruột tiêu chảy do Parvovirus
type 2, tiến hành theo dõi và thống kê tỷ lệ các bệnh thường gặp trong nhóm bệnh truyền nhiễm như Care, viêm gan truyền nhiễm, bệnh do xoắn khuẩn
Leptospira. Tại phòng khám có sử dụng một số test thử nhanh đối với bệnh do
Parvovirus, Care; với các bệnh truyền nhiễm khác thì được gửi mẫu đi để chẩn đoán bệnh. Kết quả thống kê được trình bày ở bảng 4.2.