STT Ký hiệu mẫu
Quận Cephalosporin
Thế hệ 1 Thế hệ 2 Thế hệ 3
CZ CXM FOX CRO CTX CAZ
1 M85 Cầu Giấy R R - - - - 2 M88 Thanh Xuân R - - - - - 3 M154 Cầu Giấy R R - R R R 4 M108 Thanh Xuân R - - - - - 5 M111 Thanh Xuân R - - - - - 6 M151 Cầu Giấy - - - - - R 7 M59 Cầu Giấy - - - - - R
4.3. XÁC ĐỊNH CHỦNG SALMONELLA SINH ENZYME Β-LACTAMASE PHỔ RỘNG PHỔ RỘNG
Ba chủng Salmonella M154, M151 và M59 kháng cephalosporin thế hệ 3 được tiến hành khẳng định sự có mặt của enzyme β-lactamase phổ rộng bằng thử nghiệm kháng sinh đồ trên 4 khoanh giấy kháng sinh là cefotaxime (CTX), cefotaxime kết hợp clavulanic axit (CTL), ceftazidime (CAZ) và ceftazidime kết
Quá trình thử nghiệm được tiến hành song song cùng với chủng dương Salmonella 572 (Hình 4.4).
Hình 4.4. Chủng Salmonella đối chứng kháng kháng sinh β-lactam phổ rộng
(A), chủng đối chứng 572; (B) chủng thu thập năm 2016
Kết quả cho thấy chủng Salmonella mã M154 cho kết quả kháng kháng sinh β-lactam phổ rộng với kích thước vịng kháng CTL và CAL lớn hơn 5mm so với vòng kháng CTX và CAZ.
Chủng M154 này cũng là chủng kháng với các cephalosporin thế hệ 1, 2 và 3; kháng kháng với cả 3 kháng sinh cephalosporin thế hệ 3 là ceftriaxone, cefotaxime, ceftazidime (Hình 4.5).
Hình 4.5. Chủng Salmonella sinh enzyme B-lactamse phổ rộng
Kháng sinh CAZ Kháng sinh CAZ + acid clavulanic Kháng sinh CAZ Kháng sinh CAZ + acid clavulanic Kháng sinh CTX Kháng sinh CTX + acid clavulanic
Kết quả trên cho thấy, chủng M154 sinh enzyme β-lactamase phổ rộng nên bị clavulanic axit ức chế. Cịn M151 và M59 khơng sinh enzyme β-lactamase phổ rộng nên không bị clavulanic axit ức chế nên khi bổ sung thêm clavulanic axit, hai chủng M151 và M59 vẫn biểu hiện kháng kháng sinh với vịng vơ khuẩn có đường kính < 5mm so với khoanh giấy khơng bổ sung clavulanic axit khi thử kháng sinh đồ.
4.4. XÁC ĐỊNH GEN MÃ HÓA ENZYME ΒETA-LACTAMESE
32 chủng Salmonella đã phân lập được tiến hành chạy phản ứng PCR, khuếch đại đoạn gen đích. 6 cặp mồi được sử dụng để phát hiện các gen mã hóa enzyme B-lactamse: bla TEM, bla PSE, bla DHA, bla OXA, bla CMY, bla SHV.
4.4.1. Xác định gen mã hóa enzyme bla TEM
Đoạn gen đích khuếch đại bởi trình tự mồi mã hóa enzyme bla TEM cho kích thước 661bp (Hình 4.6).
Trong số các chủng Salmonella phân lập được, sau khi chạy phản ứng PCR, cho kết quả có 10 chủng mang gen mã hóa enzyme bla-TEM.
Các chủng mang gen mã hóa enzyme bla-TEM có là những chủng có mã số: M9, M85, M67, M88, M154, M77, M71, M15, M108, M111. Trong đó có chủng mang mã số M85, M88, M108, M111 kháng kháng sinh thế hệ 1 (CZ); M85 và M154 kháng kháng sinh thế hệ 2 (CXM); M154 kháng cả kháng sinh thế hệ 1, 2 và 3 (trừ FOX).
Hình 4.6. Đoạn khuếch đại gen mã hóa enzyme bla TEM (661 bp, Ladder: 50 bp) TEM (661 bp, Ladder: 50 bp)
M10 M11 M40 M48 M59 M61 M96 M99 M15 MA M77 M85 M108 M111 M154 M160
661 bp 600 bp
4.4.2. Xác định gen mã hóa enzyme bla PSE
Đoạn gen đích khuếch đại bởi trình tự mồi mã hóa enzyme bla PSE cho kích thước 575 bp (Hình 4.7).
Kết quả cho thấy có 6 chủng mang gen mã hóa enzyme bla PSE trong số 32 chủng Salmonella phân lập được. Các chủng mang gen PSE có các mã số M48, MM59, M151, M61, M160; trong đó, chủng mang mã số M151 và M59 có biểu hiện kháng kháng sinh thế hệ 3 CAZ, khơng kháng các kháng sinh cịn lại. Các chủng M48, M61, M160 tuy mang gen mã hóa enzyme bla PSE nhưng không biểu hiện kháng kháng sinh cephalosporin.
Hình 4.7. Đoạn khuếch đại gen mã hóa enzyme bla PSE (575 bp, Ladder: 50 bp) (575 bp, Ladder: 50 bp)
4.4.3. Xác định gen mã hóa enzyme bla CMY-2
Đoạn gen đích khuếch đại bởi trình tự mồi mã hóa enzyme bla CMY-2 cho kích thước 856 bp (Hình 4.8).
Phát hiện được có 4 chủng Salmonella cho kết quả mang gen mã hóa enzyme bla CMY-2, đó là các chủng mang mã số M85, M40, M99, M108; trong đó, có chủng số M108 kháng với kháng sinh thế hệ 1 CZ, M85 kháng với kháng sinh thế hệ 1 CZ và thế hệ 2 CXM. Các chủng còn lại M99 và M40 tuy mang gen mã hóa enzyme β-lactamase nhưng khơng biểu hiện kháng cephalosporin.
Hình 4.8. Đoạn khuếch đại gen mã hóa enzyme bla CMY-2 (856 bp, Ladder: 50 bp) (856 bp, Ladder: 50 bp)
4.4.4. Xác định gen mã hóa enzyme bla OXA
Đoạn gen đích khuếch đại bởi trình tự mồi mã hóa enzyme bla CMY-2 cho kích thước 590 bp (Hình 4.9).
Phát hiện được 3 chủng trong số 32 chủng Samonella phân lập được mang gen mã hóa enzyme bla OXA. Các chủng đó mang mã số M85, M108, M111; trong đó cả 3 chủng trên đều kháng kháng sinh thế hệ 1 (CZ), M85 kháng cả kháng sinh thế hệ 2 (CXM).
Hình 4.9. Đoạn khuếch đại gen mã hóa enzyme bla OXA (590 bp, Ladder: 50 bp) (590 bp, Ladder: 50 bp) M15 M10 M40 M48 M61 M14 M151 M88 M108 MA M85 M69 M67 M77 M154 M160 856 bp 800 bp 600 bp 590 bp M15 M14 M40 M48 M11 M108 M9 M88 M59 MA M67 M85 M69 M77 M154 M160
Các chủng Salmonella mang gen mã hóa enzym β-lactamase
Kết quả cho thấy có 10 chủng sinh enzyme Bla TEM, 4 chủng sinh enzyme CMY-2, 6 chủng sinh enzyme bla PSE, 3 chủng sinh enzyme bla OXA, khơng có chủng nào sinh enzyme bla SHV và enzyme bla DHA (Bảng 4.8.)