Phần 4 Kết quả và thảo luận
4.4. Xác định gen mã hóa enzyme βeta-lactamese
32 chủng Salmonella đã phân lập được tiến hành chạy phản ứng PCR, khuếch đại đoạn gen đích. 6 cặp mồi được sử dụng để phát hiện các gen mã hóa enzyme B-lactamse: bla TEM, bla PSE, bla DHA, bla OXA, bla CMY, bla SHV.
4.4.1. Xác định gen mã hóa enzyme bla TEM
Đoạn gen đích khuếch đại bởi trình tự mồi mã hóa enzyme bla TEM cho kích thước 661bp (Hình 4.6).
Trong số các chủng Salmonella phân lập được, sau khi chạy phản ứng PCR, cho kết quả có 10 chủng mang gen mã hóa enzyme bla-TEM.
Các chủng mang gen mã hóa enzyme bla-TEM có là những chủng có mã số: M9, M85, M67, M88, M154, M77, M71, M15, M108, M111. Trong đó có chủng mang mã số M85, M88, M108, M111 kháng kháng sinh thế hệ 1 (CZ); M85 và M154 kháng kháng sinh thế hệ 2 (CXM); M154 kháng cả kháng sinh thế hệ 1, 2 và 3 (trừ FOX).
Hình 4.6. Đoạn khuếch đại gen mã hóa enzyme bla TEM (661 bp, Ladder: 50 bp) TEM (661 bp, Ladder: 50 bp)
M10 M11 M40 M48 M59 M61 M96 M99 M15 MA M77 M85 M108 M111 M154 M160
661 bp 600 bp
4.4.2. Xác định gen mã hóa enzyme bla PSE
Đoạn gen đích khuếch đại bởi trình tự mồi mã hóa enzyme bla PSE cho kích thước 575 bp (Hình 4.7).
Kết quả cho thấy có 6 chủng mang gen mã hóa enzyme bla PSE trong số 32 chủng Salmonella phân lập được. Các chủng mang gen PSE có các mã số M48, MM59, M151, M61, M160; trong đó, chủng mang mã số M151 và M59 có biểu hiện kháng kháng sinh thế hệ 3 CAZ, khơng kháng các kháng sinh cịn lại. Các chủng M48, M61, M160 tuy mang gen mã hóa enzyme bla PSE nhưng không biểu hiện kháng kháng sinh cephalosporin.
Hình 4.7. Đoạn khuếch đại gen mã hóa enzyme bla PSE (575 bp, Ladder: 50 bp) (575 bp, Ladder: 50 bp)
4.4.3. Xác định gen mã hóa enzyme bla CMY-2
Đoạn gen đích khuếch đại bởi trình tự mồi mã hóa enzyme bla CMY-2 cho kích thước 856 bp (Hình 4.8).
Phát hiện được có 4 chủng Salmonella cho kết quả mang gen mã hóa enzyme bla CMY-2, đó là các chủng mang mã số M85, M40, M99, M108; trong đó, có chủng số M108 kháng với kháng sinh thế hệ 1 CZ, M85 kháng với kháng sinh thế hệ 1 CZ và thế hệ 2 CXM. Các chủng còn lại M99 và M40 tuy mang gen mã hóa enzyme β-lactamase nhưng khơng biểu hiện kháng cephalosporin.
Hình 4.8. Đoạn khuếch đại gen mã hóa enzyme bla CMY-2 (856 bp, Ladder: 50 bp) (856 bp, Ladder: 50 bp)
4.4.4. Xác định gen mã hóa enzyme bla OXA
Đoạn gen đích khuếch đại bởi trình tự mồi mã hóa enzyme bla CMY-2 cho kích thước 590 bp (Hình 4.9).
Phát hiện được 3 chủng trong số 32 chủng Samonella phân lập được mang gen mã hóa enzyme bla OXA. Các chủng đó mang mã số M85, M108, M111; trong đó cả 3 chủng trên đều kháng kháng sinh thế hệ 1 (CZ), M85 kháng cả kháng sinh thế hệ 2 (CXM).
Hình 4.9. Đoạn khuếch đại gen mã hóa enzyme bla OXA (590 bp, Ladder: 50 bp) (590 bp, Ladder: 50 bp) M15 M10 M40 M48 M61 M14 M151 M88 M108 MA M85 M69 M67 M77 M154 M160 856 bp 800 bp 600 bp 590 bp M15 M14 M40 M48 M11 M108 M9 M88 M59 MA M67 M85 M69 M77 M154 M160
Các chủng Salmonella mang gen mã hóa enzym β-lactamase
Kết quả cho thấy có 10 chủng sinh enzyme Bla TEM, 4 chủng sinh enzyme CMY-2, 6 chủng sinh enzyme bla PSE, 3 chủng sinh enzyme bla OXA, khơng có chủng nào sinh enzyme bla SHV và enzyme bla DHA (Bảng 4.8.)
Bảng 4.8. Các chủng Salmonella mang gen mã hóa enzyme β-lactamase
STT
Ký hiệu
mẫu Mang gen mã hóa
Bla TEM Bla
CMY-2 Bla PSE Bla OXA Bla SHV Bla DHA 1 M9 X O O O O O 2 M15 X O X O O O 3 M40 O X O O O O 4 M48 O O X O O O 5 M59 O O X O O O 6 M61 O O X O O O 7 M67 X O O O O O 8 M71 X O O O O O 9 M77 X O O O O O 10 M85 X X O X O O 11 M88 X O O O O O 12 M99 O X O O O O 13 M108 X X O X O O 14 M111 X O O X O O 15 M151 O O X O O O 16 M154 X O O O O O 17 M160 O O X O O O Ghi chú: X: dương tính O: âm tính