Trong tổng số 32 chủng Salmonella phân lập được, có 5 chủng cho kết quả kháng cephalosporin thế hệ 1 CZ với kích thước vòng vô khuẩn cụ thể như Bảng 4.3.
Trong 5 chủng kháng cephalosporin thế hệ 1 CZ có 3 chủng Salmonella thu thập từ quận Thanh Xuân, và 2 chủng Salmonella thu thập từ quận Cầu Giấy có khả năng kháng kháng sinh cephalosporin thế hệ 1 CZ.
Bảng 4.3. Kết quả kháng cephalosporin thế hệ 1 CZ STT Ký hiệu mẫu Quận CEFFAZOLIN (CZ) S I R Kích thước vòng vô khuẩn (mm) ≥15 - ≤14 1 M85 Cầu Giấy R 10 2 M88 Thanh Xuân R 0 3 M154 Cầu Giấy R 0 4 M108 Thanh Xuân R 8 5 M111 Thanh Xuân R 9
Hình 4.2. Chủng Salmonella kháng với cephalosporin thế hệ 1 CZ 4.2.2. Kháng kháng sinh cephalosporin thế hệ 2 CXM, FOX
Trong tổng số 32 chủng Salmonella phân lập được, có 2 chủng cho kết quả kháng cephalosporin thế hệ 2 CXM và không có chủng nào kháng FOX với kích thước vòng vô khuẩn như bảng 4.4.
CZ CXM
FOX CRO
Bảng 4.4. Kết quả kháng cephalosporin thế hệ 2 CXM STT Ký hiệu mẫu Quận CEFUROXIME (CXM) S I R Kích thước vòng kháng khuẩn (mm) ≥18 15-17 ≤14 1 M85 Cầu Giấy R 1 2 M154 Cầu Giấy R 0
Cụ thể có 2 chủng Salmonella phân lập từ 2 mẫu thu được tại quận Cầu Giấy cho kết quả kháng với CXM.
Hình 4.3. Chủng Salmonella kháng với cephalosporin thế hệ 1, 2 (CZ, CXM) 4.2.3. Kháng kháng sinh cephalosporin thế hệ 3 CRO, CTX, CAZ:
Kiểm tra các chủng Salmonella phân lập được kháng kháng sinh cephalosporin thế hệ 3 cho kích thước vòng vô khuẩn cụ thể như sau:
Bảng 4.5. Kết quả kháng cephalosporin thế hệ 3
STT Ký hiệu
mẫu
Quận CEFTRAEXONE (CRO)
S I R Kích thước vòng kháng khuẩn (mm) ≥23 20-22 ≤19 1 M154 Cầu Giấy R 0 STT Ký hiệu mẫu Quận CEFOTAXIME (CTX) S I R Kích thước vòng kháng khuẩn (mm) ≥23 20-22 ≤19 1 M154 Cầu Giấy R 0 CZ FOX CXM CRO
STT Ký hiệu mẫu
Quận CEFTAZIDIME (CAZ)
S I R Kích thước vòng kháng khuẩn (mm) ≥23 20-22 ≤19 1 M59 Cầu Giấy R 9 2 M151 Cầu Giấy R 9 3 M154 Cầu Giấy R 11
Trong đó, có 1 chủng trong số 32 chủng Salmonella phân lập được cho kết quả kháng kháng sinh CRO; có 1 trong số 32 chủng cho kết quả kháng kháng sinh CTX; và 3 trong số 32 chủng cho kết quả kháng kháng sinh CAZ. Tất cả các chủng trên đều được phân lập từ mẫu thịt gà thu thập từ quận Cầu Giấy.
Tỉ lệ kháng kháng sinh β-lactam cephalosporin
Sau khi tiến hành kháng sinh đồ bằng phương pháp khoanh giấy kháng sinh, chúng tôi thu thập và tổng hợp kết quả tỉ lệ kháng kháng sinh β-lactam cephalosporin được trình bày ở Bảng 4.6.
Bảng 4.6. Tỉ lệ kháng kháng sinh β-lactam cephalosporin
Kháng sinh Số chủng kháng Tỉ lệ kháng (%) Cephalosporin thế hệ 1 Cefazoline 5 15.63% Cephalosporin thế hệ 2 Cefuroxime Cefoxitin 2 0 6.25% 0% Cephalosporin thế hệ 3 Ceftriaxone Cefotaxime Ceftazidime 1 1 3 3.13% 3.13% 9.38%
Các chủng Salmonella được phát hiện kháng nhiều nhất với cefazoline với 15.63%, tiếp đến là ceftazidime với 9.38% và ceftriaxone với 6.25%, cuối cùng là cefoxitin và ceftazidime với 3.31%. Trong số 32 chủng Salmonella phân lập được, không có chủng nào kháng kháng sinh cefoxitin.
Trong số các chủng Salmonella kháng kháng sinh β-lactam cephalosporin đã được xác định trên, có chủng M88, M108, M111 chỉ kháng một loại kháng sinh cephalosporin thế hệ 1 (CZ); có chủng mã số M85 cho kết quả kháng cả cephalosporin thế hệ 1 (CZ) và 2 (CXM); chủng M151, M59 lại không kháng
kháng sinh thế hệ 1 và 2, mà kháng kháng sinh CAZ (thế hệ 3). Riêng có chủng mã số M154 kháng với cả 3 thế hệ kháng sinh cephalosporin (CZ, CXM, CRO, CTX, CAZ) trừ FOX (Bảng 4.7).
Có thể thấy, các chủng Salmonella kháng kháng sinh không theo quy luật từ thế hệ 1 đến thế hệ 2 rồi thế hệ 3, mà có thể chỉ kháng một loại kháng sinh thế hệ cao hay thấp độc lập. Lý do có thể do có những chủng Salmonella chưa được tiếp xúc với các kháng sinh thế hệ thấp (1, 2) hoặc tiếp xúc nhưng chưa có khả năng kháng kháng sinh đó, nhưng lại đã được tiếp xúc và có khả năng kháng với kháng sinh cephalosporin thế hệ 3. Điều này cho thấy, không phải lúc nào kháng sinh thế hệ mới cũng có thể điều trị bệnh, mà chỉ cần đến kháng sinh thế hệ 1, 2. Khuyến cáo cần làm kháng sinh đồ trong điều trị bệnh để có thể đưa ra phác đồ điều trị phù hợp.
Bảng 4.7. Các chủng Salmonella kháng kháng sinh cephalosporin
STT Ký hiệu mẫu
Quận Cephalosporin
Thế hệ 1 Thế hệ 2 Thế hệ 3
CZ CXM FOX CRO CTX CAZ
1 M85 Cầu Giấy R R - - - - 2 M88 Thanh Xuân R - - - - - 3 M154 Cầu Giấy R R - R R R 4 M108 Thanh Xuân R - - - - - 5 M111 Thanh Xuân R - - - - - 6 M151 Cầu Giấy - - - R 7 M59 Cầu Giấy - - - R
4.3.XÁCĐỊNHCHỦNGSALMONELLASINHENZYMEΒ-LACTAMASE
PHỔRỘNG
Ba chủng Salmonella M154, M151 và M59 kháng cephalosporin thế hệ 3 được tiến hành khẳng định sự có mặt của enzyme β-lactamase phổ rộng bằng thử nghiệm kháng sinh đồ trên 4 khoanh giấy kháng sinh là cefotaxime (CTX), cefotaxime kết hợp clavulanic axit (CTL), ceftazidime (CAZ) và ceftazidime kết
Quá trình thử nghiệm được tiến hành song song cùng với chủng dương
Salmonella 572 (Hình 4.4).
Hình 4.4. Chủng Salmonella đối chứng kháng kháng sinh β-lactam phổ rộng
(A), chủng đối chứng 572; (B) chủng thu thập năm 2016
Kết quả cho thấy chủng Salmonella mã M154 cho kết quả kháng kháng sinh β-lactam phổ rộng với kích thước vòng kháng CTL và CAL lớn hơn 5mm so với vòng kháng CTX và CAZ.
Chủng M154 này cũng là chủng kháng với các cephalosporin thế hệ 1, 2 và 3; kháng kháng với cả 3 kháng sinh cephalosporin thế hệ 3 là ceftriaxone, cefotaxime, ceftazidime (Hình 4.5).
Hình 4.5. Chủng Salmonella sinh enzyme B-lactamse phổ rộng
Kháng sinh CAZ Kháng sinh CAZ + acid clavulanic Kháng sinh CAZ Kháng sinh CAZ + acid clavulanic Kháng sinh CTX Kháng sinh CTX + acid clavulanic
Kết quả trên cho thấy, chủng M154 sinh enzyme β-lactamase phổ rộng nên bị clavulanic axit ức chế. Còn M151 và M59 không sinh enzyme β-lactamase phổ rộng nên không bị clavulanic axit ức chế nên khi bổ sung thêm clavulanic axit, hai chủng M151 và M59 vẫn biểu hiện kháng kháng sinh với vòng vô khuẩn có đường kính < 5mm so với khoanh giấy không bổ sung clavulanic axit khi thử kháng sinh đồ.
4.4.XÁCĐỊNHGENMÃHÓAENZYMEΒETA-LACTAMESE
32 chủng Salmonella đã phân lập được tiến hành chạy phản ứng PCR, khuếch đại đoạn gen đích. 6 cặp mồi được sử dụng để phát hiện các gen mã hóa enzyme B-lactamse: bla TEM, bla PSE, bla DHA, bla OXA, bla CMY, bla SHV.
4.4.1. Xác định gen mã hóa enzyme bla TEM
Đoạn gen đích khuếch đại bởi trình tự mồi mã hóa enzyme bla TEM cho kích thước 661bp (Hình 4.6).
Trong số các chủng Salmonella phân lập được, sau khi chạy phản ứng PCR, cho kết quả có 10 chủng mang gen mã hóa enzyme bla-TEM.
Các chủng mang gen mã hóa enzyme bla-TEM có là những chủng có mã số: M9, M85, M67, M88, M154, M77, M71, M15, M108, M111. Trong đó có chủng mang mã số M85, M88, M108, M111 kháng kháng sinh thế hệ 1 (CZ); M85 và M154 kháng kháng sinh thế hệ 2 (CXM); M154 kháng cả kháng sinh thế hệ 1, 2 và 3 (trừ FOX).
Hình 4.6. Đoạn khuếch đại gen mã hóa enzyme bla TEM (661 bp, Ladder: 50 bp)
M10 M11 M40 M48 M59 M61 M96 M99 M15 MA M77 M85 M108 M111 M154 M160
661 bp 600 bp
4.4.2. Xác định gen mã hóa enzyme bla PSE
Đoạn gen đích khuếch đại bởi trình tự mồi mã hóa enzyme bla PSE cho kích thước 575 bp (Hình 4.7).
Kết quả cho thấy có 6 chủng mang gen mã hóa enzyme bla PSE trong số 32 chủng Salmonella phân lập được. Các chủng mang gen PSE có các mã số M48, MM59, M151, M61, M160; trong đó, chủng mang mã số M151 và M59 có biểu hiện kháng kháng sinh thế hệ 3 CAZ, không kháng các kháng sinh còn lại. Các chủng M48, M61, M160 tuy mang gen mã hóa enzyme bla PSE nhưng không biểu hiện kháng kháng sinh cephalosporin.
Hình 4.7. Đoạn khuếch đại gen mã hóa enzyme bla PSE (575 bp, Ladder: 50 bp)
4.4.3. Xác định gen mã hóa enzyme bla CMY-2
Đoạn gen đích khuếch đại bởi trình tự mồi mã hóa enzyme bla CMY-2 cho kích thước 856 bp (Hình 4.8).
Phát hiện được có 4 chủng Salmonella cho kết quả mang gen mã hóa enzyme bla CMY-2, đó là các chủng mang mã số M85, M40, M99, M108; trong đó, có chủng số M108 kháng với kháng sinh thế hệ 1 CZ, M85 kháng với kháng sinh thế hệ 1 CZ và thế hệ 2 CXM. Các chủng còn lại M99 và M40 tuy mang gen mã hóa enzyme β-lactamase nhưng không biểu hiện kháng cephalosporin.
Hình 4.8. Đoạn khuếch đại gen mã hóa enzyme bla CMY-2 (856 bp, Ladder: 50 bp)
4.4.4. Xác định gen mã hóa enzyme bla OXA
Đoạn gen đích khuếch đại bởi trình tự mồi mã hóa enzyme bla CMY-2 cho kích thước 590 bp (Hình 4.9).
Phát hiện được 3 chủng trong số 32 chủng Samonella phân lập được mang gen mã hóa enzyme bla OXA. Các chủng đó mang mã số M85, M108, M111; trong đó cả 3 chủng trên đều kháng kháng sinh thế hệ 1 (CZ), M85 kháng cả kháng sinh thế hệ 2 (CXM).
Hình 4.9. Đoạn khuếch đại gen mã hóa enzyme bla OXA (590 bp, Ladder: 50 bp) M15 M10 M40 M48 M61 M14 M151 M88 M108 MA M85 M69 M67 M77 M154 M160 856 bp 800 bp 600 bp 590 bp M15 M14 M40 M48 M11 M108 M9 M88 M59 MA M67 M85 M69 M77 M154 M160
Các chủng Salmonella mang gen mã hóa enzym β-lactamase
Kết quả cho thấy có 10 chủng sinh enzyme Bla TEM, 4 chủng sinh enzyme CMY-2, 6 chủng sinh enzyme bla PSE, 3 chủng sinh enzyme bla OXA, không có chủng nào sinh enzyme bla SHV và enzyme bla DHA (Bảng 4.8.)
Bảng 4.8. Các chủng Salmonella mang gen mã hóa enzyme β-lactamase
STT
Ký hiệu
mẫu Mang gen mã hóa
Bla TEM Bla
CMY-2 Bla PSE Bla OXA Bla SHV Bla DHA 1 M9 X O O O O O 2 M15 X O X O O O 3 M40 O X O O O O 4 M48 O O X O O O 5 M59 O O X O O O 6 M61 O O X O O O 7 M67 X O O O O O 8 M71 X O O O O O 9 M77 X O O O O O 10 M85 X X O X O O 11 M88 X O O O O O 12 M99 O X O O O O 13 M108 X X O X O O 14 M111 X O O X O O 15 M151 O O X O O O 16 M154 X O O O O O 17 M160 O O X O O O Ghi chú: X: dương tính O: âm tính
PHẦN5.KẾTLUẬNVÀĐỀNGHỊ
5.1.KẾTLUẬN
● Tỉ lệ Salmonella lưu hành trên thịt gia cầm tại các chợ tại một số quận nội thành Hà Nội là 32.0%.
● Các chủng Salmonella phân lập được kháng lại các kháng sinh cephalosporin thế hệ 1, 2, 3 với tỉ lệ lần lượt: Cefazolin là 15.63%, Cefuroxime là 6.25%, Cefoxitin với 0%, Ceftriaxone 3.13%, Cefotaxime 3.13% và Ceftazidime với 9.38%.
● Có 1 chủng duy nhất sinh eznyme B-lactamase phổ rộng trong số 32 chủng Salmonella đã thu thập, cũng là chủng kháng các loại kháng sinh cephalosporin thế hệ 1, 2, 3.
● Phát hiện có 10 chủng Salmonella sinh enzyme Bla TEM, có 4 chủng sinh enzyme CMY-2, có 6 chủng sinh enzyme bla PSE, có 3 chủng sinh enzyme bla OXA, không có chủng Salmonella nào sinh enzyme bla SHV và enzyme bla DHA trong số 32 chủng đã thu thập.
5.2.ĐỀNGHỊ
Khuyến cáo người dân hiểu rõ về tình hình nhiễm Salmonella trên địa bàn Hà Nội vẫn còn cao. Ngoài ra, đã tồn tại chủng vi khuẩn kháng thuốc các thế hệ khác nhau và kháng phổ rộng. Khuyến cáo làm kháng sinh đồ khi mắc bệnh để có phác đồ điều trị phù hợp.
Đưa vào các chương trình hành động về vấn đề vi khuẩn kháng thuốc: kiến thức về tình hình vi khuẩn kháng thuốc và kiến thức về sử dụng kháng sinh trong cộng đồng.
Tiến hành các nghiên cứu sâu hơn về sinh học phân tử đối với chủng kháng kháng sinh để xem xét khả năng kháng các kháng sinh khác và các gen kháng kháng sinh khác tiềm ẩn trong các chủng đã thu thập.
Xác định các biến thể của các gen mã hóa enzyme β-lactamase phổ rộng của các chủng Salmonella đã thu thập.
TÀILIỆUTHAMKHẢO Tiếng Anh:
1. Calo S., C. Ricke and J. Rivera (2015). Antibiotic Resistance in Pathogenic Salmonella, Antimicrobial Resistance and Food Safety. Elsevier Inc. pp. 37-53. 2. Centres for Disease Control and Prevention (US) (2013). Antibiotic resistance
threats in the United States, 2013. Centres for Disease Control and Prevention, US Department of Health and Human Services
3. Chen H. M., W. Yue, H. S. Lin and H. C. Cheng (2013). Nontyphoid Salmonella Infection: Microbiology, Clinical Features, and Antimicrobial Therapy. Pediatrics and Neonatology. 54. pp. 147-152.
4. Chroma M. and M. Kolar (2015). Genetic methods for detection of antibiotic resistance: focus on extended-spectrum β-lactamases. Food Control. 47. pp. 264-276. 5. European Food Safety Authority (2010). Scientific report of EFSA: analysis of the
baseline survey on the prevalence of Campylobacter in broiler batches and of Campylobacter and Salmonella on broiler carcasses in the EU, Part A: Campylobacter and Salmonella prevalence estimates. EFSA J. 8. pp.1-100.
6. Hald T. (2013. Pathogen Updates: Salmonella. [ed.] Jr and Morris E. Potter J. Glenn Morris. Foodborne Infections and Intoxications. Fourth edition. s.l. Elsevier Inc. pp. 67-97.
7. Hannah G., A. L. Nisler, M. P. H. Karen, M. Herman, M. Dana, J. Cole, I. T. Williams and M. Griffin (Div of Foodborne, Waterborne, and Environmental Diseases, National Center for Emerging and Zoonotic (2008). Infectious Diseases Div of Viral Diseases. National Center for Immunization and Respiratory
Diseases. Retrieved on 18 Sep 2017 at
https://www.cdc.gov/mmwr/preview/mmwrhtml/mm6035a3.htm
8. Holmes A. H., L. S. P. Moore, A. Sundsfjord, M. Steinbakk, S. Regmi, A. Karkey, P. J. Guerin and L. J. V. Piddock (2015). Understanding the mechanisms and drivers of antimicrobial resistance. The Lancet. http://dx.doi.org/10.1016/ S0140- 6736(15)00473-0.
9. Jorgensen F., H. James and M. Jane (2009). Antimicrobial Susceptibility Testing: A Review of General Principles and Contemporary Practices. Clinical Infectious Diseases. 49. pp. 1749–1755.
10. Lee K. M., M. Runyon, T. J. Herrman, R. Phillips and J. Hsieh (2015). Review of Salmonella detection and identification methods: Aspects of rapid emergency response and food safety. Food Control. 47. pp. 264-276.
11. Manning J., V. Gole and K. Chousalkar (2015). Screening for Salmonella in backyard chickens. Preventive Veterinary Medicine. 120. pp. 241–245.
12. Meldrum R. J. and I. G. Wilson (2007). Salmonella and Campylobacter in United Kingdong retail raw chicken in 2005. J. Food Prot. 70. pp. 1937-1939.
13. Neto D. F., O. C. Penha, P. Barrow and B. Junior (2010). Sources of Human Non- Typhoid Salmonellosis: A Review. Brazilian Journal of Poultry Science. 12. pp. 1-11. 14. Nguyen D. T. A., M. Kanki, P. D. Nguyen, H. T. Le, P. T. Ngo, D. N. Tran, N. H.
Le, C. V. Dang, T. Kawai, R. Kawahara, S. Yonogi, Y. Hirai, M. Jinnai, S. Yamasaki, Y. Kumeda and Y. Yamamoto (2016). Prevalence, Antibiotic Resistance, and Extended-Sectrum and AmpCβ-Lactamase Productivity of Salmonella Isolates from Raw Meat and Seafood Samples in Ho Chi Minh City, Vietnam. International Journal of Food Microbiology. 10.
15. Oliveira K. S., L. A. Lima, N. B. Cobacho, S. C. Dias and O. L. Franco (2016). Mechanism of Antibacterial Resistance: Shedding Some Light on These obscure. Elsevier Inc. pp. 19-35.
16. Philip W. (2014). Mumy KL. Salmonella Encyclopedia of Toxicology. Elsevier Inc. pp. 211-212.
17. Sanche V., M. Flor, A. Maisam, A. E. Haija and G. Oscar (2011). Salmonella infections: An update on epidemiology, management, and prevention. Travel Medicine and Infectious Disease. 9. pp. 263-277.
18. Seiffert S. N., M. Hilty, V. Perreten and A. Endimiani (2013). Extended-spectrum cephalosporin-resistant gram-negative organisms in livestock: An emerging problem for human health. Drug Resist. 13. pp. 1-24.
19. Shaikh S., J. Fatima, S. Shakil, S. Mohd, D. Rizvi and M. A. Kamal (2014). Antibiotic resistance and extended spectrum beta-lactamases: Types, epidemiology and treatment. Saudi Journal of Biological Sciences, p. doi: http://dx.doi.org/10.1016/j.sjbs.2014.08.002.
20. Sun L. K., Y. Vuthy, P. Song, K. Phol and J. L. Sarthou (2010). Prevalence, numbers and antimicrobial susceptibilities of Salmonella serovars and Campylobacter spp. in retail poultry in Phnom Penh Cambodia. J. Vet. Med. Sci.73. pp. 325-329.
21. Ta Y. T., T. T. Nguyen, P. B. To, D. X. Pham, H. T. H. Le, W. Q. Alali, I. Walls, D. M. Wong and M. P. Doyle (2012). Prevalence of Salmonella on chicken carcasses from retail markets in Vietnam. J. Food Prot. 75. pp. 1851–1854.
22. Ta Y. T., T. T. Nguyen, P. B. To, D. X. Pham, H. T. H. Le, G. N. Thi, W. Q.