Chương 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.5. Kết quả xác định độc lực của các chủng vi khuẩn phân lập được
3.5.1. Kết quả xác định độc lực của vi khuẩn E. coli phân lập được
Các chủng vi khuẩn E. coli được tiến hành thử độc lực trên chuột nhắt trắng theo phương pháp thường quy bằng cách tiêm cho chuột nhắt trắng mỗi con 0,2 ml canh trùng nguyên (ở 37°C/24 giờ) của từng chủng riêng rẽ vào xoang phúc mạc. Mỗi chủng thử trên 02 chuột, theo dõi thời gian chuột chết. Kết quả nghiên cứu của chúng tôi được thể hiện ở bảng 3.15
Bảng 3.15. Kết quả kiểm tra độc lực của một số chủng vi khuẩn E. coli trên chuột nhắt trắng Ký hiệu chủng Số chuột tiêm (con) Liều tiêm (ml/con) Đường tiêm Số chuột chết (con) Tỷ lệ chết (%) Thời gian chết (giờ) Phân lập lại VK E.coli E-01 2 0,2 Xoang phúc mạc 2 100 8 - 17 + E-02 2 0,2 1 50 45 + E-03 2 0,2 0 0 0 Không E-04 2 0,2 2 100 21 - 24 + E-05 2 0,2 2 100 28 - 48 +
Ghi chú: E - 1, E - 02…E - 05 là ký hiệu các mẫu xác định thịt nhiễm vi khuẩn E. coli không đạt tiêu chuẩn vệ sinh tiến hành xác định độc lực.
Qua bảng 3.15 cho thấy sau khi tiêm mỗi chuột 0,2 ml canh trùng nuôi cấy 24 giờ vào xoang phúc mạc, mỗi chủng thử trên 2 chuột, chúng tôi thấy có 3 chủng vi khuẩn E. coli giết chết 100% số chuột sau tiêm và 1 chủng E- 02 chỉ giết chết 50% số chuột thí nghiệm. Trong số chủng vi khuẩn E. coli gây chết chuột 100% thì có 1 chủng là E-01 gây chết chuột sớm nhất từ 8 - 17 giờ sau khi tiêm, 2 chủng E-04 và E-05 gây chết chuột trong vòng 21 - 48 giờ và 1 chủng E-03 không gây chết chuột. Các chuột chết đều có đặc điểm chung là bụng đều chướng to, khi mổ khám bệnh tích biểu hiện là phổi viêm xuất huyết trên bề mặt, gan sưng, tụ huyết, ruột xuất huyết. Lấy máu tim chuột phân lập đều thu được vi khuẩn E. coli thuần chủng.
Như vậy, hầu hết các chủng E. coli phân lập được từ thịt lợn tại các cơ sở giết mổ trên địa bàn quận Nam Từ Liêm đều có độc lực rất mạnh, điều đó bước đầu có thể khẳng định vi khuẩn E. coli là nguyên nhân quan trọng gây ô nhiễm trên thịt lợn trên địa bàn nghiên cứu.
3.5.2. Kết quả xác định độc lực của vi khuẩn S. aureus phân lập được
Chúng tôi chọn 5 chủng S. aureus được nuôi cấy trong môi trường đặc hiệu ở
37°C/24 giờ, được canh trùng có khoảng 108 CFU/ml. Sau đó tiến hành tiêm mỗi chủng 0,2 ml trên chuột nhắt trắng. Kết quả nghiên cứu được trình bày ở bảng 4.16.
Qua bảng 3.16 cho thấy:
- Các chủng S. aureus dung huyết đều giết chết chuột thời gian nhanh sau từ
41 - 76 giờ, có tỷ lệ gây chết chuột cao (80%) và không phụ thuộc vào đường tiêm. - Các chủng S. aureus dung huyết không hoàn toàn thời gian giết chuột lâu hơn (73 - 121) giờ và phụ thuộc vào đường tiêm. Tỷ lệ gây chết chuột của S. aureus dung huyết không hoàn toàn khi tiêm tĩnh mạch là 60% (từ 73 - 101 giờ, còn khi tiêm xoang phúc mạc là 40% (từ 96 - 121) giờđối với chuột thí nghiệm.
Kết quả này phù hợp với công bố của Nguyễn Thị Thu Huyền (2012) khi tác giả cho biết: Sau 48h kể từ khi công cường độc, vi khuẩn S. aureus đã gây chết 85% số chuột thí nghiệm.
Bảng 4.16. Xác định độc lực vi khuẩn S. aureus phân lập được trên chuột nhắt trắng TT Vi khuẩn Số chủng thử Số chuột tiêm (con) Liều tiêm (ml/con) Đường Tiêm Số chuột chết (con) Tỷ lệ chết (%) Thời gian chết (giờ) Phân lập lại vi khuẩn 1 S. aureus dung huyết 5 5 0,2 Tĩnh mạch 4 80 36-48 + 5 0,2 Xoang phúc mạc 4 80 43-76 + 2 S. aureus dung huyết không hoàn toàn 5 5 0,2 Tĩnh mạch 3 60 73-101 + 5 0,2 Xoang phúc mạc 2 40 96-121 +
3.5.3. Kết quả xác định độc lực của vi khuẩn Salmonella phân lập được
Để kiểm tra độc lực của các chủng vi khuẩn Salmonella phân lập được từ các mẫu thịt lợn lấy từ các lò giết mổ, chúng tôi đã tiến hành kiểm tra độc lực của các chủng Salmonella phân lập được trên chuột nhắt trắng.
Chọn 5 chủng Salmonella phân lập được có yếu tố gây bệnh để thử độc lực bằng cách tiêm truyền qua chuột nhắt trắng. Các chủng nuôi cấy trong môi trường BHI trong bình tam giác 100ml, sau đó canh trùng được bồi dưỡng ở 37°C trong 24 giờ, đếm số lượng vi khuẩn có trong 1ml canh trùng bằng phương pháp đếm số
lượng khuẩn lạc trên thạch.
Mỗi chủng tiêm cho 2 chuột, mỗi chuột 0,2 ml canh trùng vào xoang phúc mạc. Theo dõi số chuột chết và thời gian chuột chết ở mỗi chủng được trình bày ở
bảng 3.17.
Qua bảng 3.17 cho thấy với 5 chủng xác định độc lực thì có 4 chủng đều có
độc lực cao, gây chết 100% số chuột trong thời gian từ 4 - 18 giờ sau khi tiêm canh trùng. Có 1 chủng (ký hiệu Sal 3) gây chết 50% chuột thí nghiệm, thời gian gây chết
là 19h sau khi tiêm. Mổ khám những chuột chết, lấy máu tim nuôi cấy phân lập vi khuẩn thì đều tìm thấy vi khuẩn Salmonella thuần khiết. Đa số chuột chết mổ khám bệnh tích thấy gan, lách, thận sưng nhão, có nhiều điểm xuất huyết, dạ dày xuất huyết, ruột đầy hơi, xung quanh chỗ tiêm thủy thũng, nhầy đúng với bệnh tích đặc trưng do Salmonella gây ra.
Bảng 3.17. Kết quả kiểm tra độc lực của một số chủng vi khuẩn
Salmonella trên chuột nhắt trắng Ký hiệu chủng Số chuột tiêm (con) Liều tiêm (ml/con) Đường tiêm Số chuột chết (con) Tỷ lệ chết (%) Thờigian chết (giờ) Phân lâp lại VK Sal 1 2 0,2 Xoang phúc mạc 2 100 7 - 15 + Sal 2 2 0,2 2 100 4 - 6 + Sal 3 2 0,2 1 50 19 + Sal 4 2 0,2 2 100 12 - 18 + Sal 5 2 0,2 2 100 4 - 6 +
Ghi chú: Sal 1, Sal 2…Sal 5 là ký hiệu các mẫu xác định thịt nhiễm vi khuẩn Salmonella không đạt tiêu chuẩn vệ sinh tiến hành xác định độc lực.
Kết quả nghiên cứu này của chúng tôi cũng tương đồng với kết quả nghiên cứu của các tác giả khác như: Kết quả nghiên cứu của Trần Thị Hạnh và cs (2009) thử độc lực các chủng Salmonella phân lập được trên gà cho biết trong vòng 24 giờ sau khi tiêm cũng cho thấy tất cả các chuột thí nghiệm đều bị chết, trong đó 02 chủng S. entertidis phân lập từ gà làm chuột chết sau 08 giờ tiêm. Kết quả này phù hợp với công bố của Đào Thị Thanh Thủy (2012) khi tác giả cho biết: Sau 24 - 48h kể từ khi công cường độc, vi khuẩn Salmonella đã gây chết 87,5% số chuột thí nghiệm. Khi nghiên cứu về độc lực của một số chủng Salmonella phân lập từ
thịt lợn bán tại chợ thuộc thành phố Thái Nguyên, Dương Quốc Tiến (2015) cho biết: Sau thời gian công cường độc, 100% số chuột tiêm canh khuẩn qua tĩnh mạch chết; có 83,33% số chuột tiêm canh khuẩn qua xoang phúc mạc chết sau 48h công cường độc.
3.6. Đề xuất giải pháp khắc phục tình trạng không đảm bảo vệ sinh thú y tại các cơ sở giết mổ trên địa bàn quận Nam Từ Liêm
Từ những kết quả của đề tài, chúng tôi đề xuất một số giải pháp sau:
- Tăng cường công tác tuyên truyền giết mổ tập trung, không ngừng nâng cao nhận thức của chủ cơ sở giết mổ, người tiêu dùng về vệ sinh an toàn thực phẩm và phòng chống dịch bệnh theo Pháp lệnh Thú y.
- Tuyên truyền, khuyến cáo về việc sử dụng thực phẩm an toàn. Thực hiện “Ăn chín, uống sôi” để tránh ngộđộc thực phẩm do vi sinh vật.
- Cần triển khai xây dựng cơ sở giết mổ tập trung. Trước khi hoàn thành hệ
thống cơ sở giết mổ tập trung và các văn bản Quy phạm pháp luật về giết mổ gia súc, gia cầm trên địa bàn, các ban ngành ở địa phương phối hợp với cơ quan Thú y xử lý nghiêm các vi phạm trong giết mổ, kinh doanh có ảnh hưởng đến vệ sinh an toàn thực phẩm.
- Phối hợp với cơ quan liên quan tổ chức thực hiện việc kiểm tra, đánh giá phân loại các cơ sở giết mổ, gia súc, gia cầm thuộc địa bàn quản lý.
- Thực hiện giết mổ tập trung, trước mắt có thể từng bước triển khai tại những nơi có số lượng giết mổ lớn. Xây dựng mô hình mẫu về lò mổ tiêu chuẩn, thiết lập cơ chế quản lý phù hợp, từ đó rút kinh nghiệm nhân rộng trên địa bàn. Trong thời gian triển khai các lò mổ tập trung, để quản lý tạm thời đối với các điểm giết mổ nhỏ cần trú trọng đến việc sử dụng công nhân giết mổ đảm bảo yêu cầu về
sức khỏe, đồng thời tăng cường công tác kiểm tra vệ sinh thú y tại chợ.
- Kiên quyết đóng cửa các cơ sở giết mổ không đảm bảo vệ sinh thú y trên
địa bàn (không có điều kiện cải tạo). Thực hiện thông báo công khai Danh sách các cơ sở giết mổ gia súc, gia cầm đủ điều kiện và chưa đủđiều kiện vệ sinh thú y, thực hiện việc cải tạo và nâng cấp đểđảm bảo chất lượng, an toàn thực phẩm.
- Đối với các chợ có kinh doanh thịt, cần phải chú trọng kiểm tra và nâng cấp chất lượng các quầy, sạp bán hàng theo quy định, thực hiện vệ sinh khu vực bán hàng theo quy định, kiên quyết xử lý việc bán thịt ở lề đường, hè phố và không
đúng nơi quy định; tiến hành kiểm tra và yêu cầu người giết mổ, kinh doanh thịt phải có giấy khám sức khoẻ.
- Trong thời gian tới, tiếp tục tăng cường công tác kiểm dịch, kiểm soát giết mổ tại các chợ, đầu mối giao thông và các địa phương có ổ dịch cũ nhằm khống chế
dịch bệnh và đảm bảo vệ sinh an toàn thực phẩm trên địa bàn.
- Tăng cường các thiết bị xét nghiệm, đánh giá sự ô nhiễm vi sinh vật trên thịt để có biện pháp xử lý phù hợp.
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 1. Kết luận
- Trên địa bàn quận Nam Từ Liêm, thành phố Hà Nội có 28 cơ sở giết mổ
lợn, các cơ sở giết mổ lợn hầu hết là giết mổ với quy mô nhỏ và vừa, phát triển mang tính tự phát, không theo tiêu chuẩn quy định, nhiều cơ sở không chịu sự quản lý của các cơ quan chức năng; điều kiện giết mổ không đạt yêu cầu, không đảm bảo vệ sinh an toàn thực phẩm, gây ô nhiễm môi trường và tiềm ẩn nhiều nguy cơ phát sinh dịch bệnh.
- Đa số các cơ sở giết mổ điều tra không đạt yêu cầu về địa điểm xây dựng và điều kiện giết mổ. Quá trình giết mổ thực hiện trên sàn, nền nhà, làm thịt và các sản phẩm khác dễ bị nhiễm bẩn và nhiễm vi sinh vật.
- Hầu hết cơ sở giết mổ lợn đều không được vệ sinh tiêu độc, không có biện pháp xử lý nước thải và chất thải. Thực trạng vệ sinh khu giết mổ rất kém.
- Không khí tại các cơ sở giết mổ lợn đều ô nhiễm VKHK với số lượng lớn. - Đa số các cơ sở giết mổ lợn sử dụng nước giếng khoan trong quá trình giết mổ (57,14%). Phần lớn mẫu nước tại các cơ sở giết mổ không đạt TCVS.
- Số mẫu thịt lợn thu thập tại các cơ sở giết mổ nghiên cứu không đạt yêu cầu về tổng số vi khuẩn hiếu khí là 31,14%; E. coli là 46,43%; Coliform là 57,14% và S.
aureus là 50,00%. Có 32,14% số mẫu dương tính với vi khuẩn Salmonella, các mẫu này đều không đạt yêu cầu tiêu chuẩn.
- Các chủng vi khuẩn E. coli, S. aureus và S. aureus phân lập được từ thịt lợn tại các cơ sở giết mổ nghiên cứu đều có độc lực cao.
- Tiến hành đề xuất các giải pháp khắc phục tình trạng không đảm bảo vệ
sinh thú y tại các cơ sở giết mổ lợn trên địa bàn quận Nam Từ Liêm.
2. Đề nghị
Do kinh phí có hạn nên kết quả nghiên cứu của đề tài còn hạn chế. Vì vậy, chúng tôi đề nghị cần tiếp tục có nghiên cứu tiếp theo trên phạm vi rộng hơn, tăng thêm một số chỉ tiêu, cụ thể như sau:
- Nghiên cứu độc lực vi khuẩn, khả năng gây bệnh, xác định serotype vi khuẩn E. coli, Salmonella và S. aureus đã phân lập từ mẫu kiểm tra.
- Đánh giá các nguồn lây nhiễm vi khuẩn vào thịt từ dụng cụ, trang thiết bị
và quần áo bảo hộ, tay người giết mổ.
- Nghiên cứu một số chỉ tiêu lý hoá nguồn nuớc sử dụng; tình trạng ô nhiễm nguồn nước thải tại các cơ sở giết mổ.
TÀI LIỆU THAM KHẢO I. Tài liệu tiếng Việt
1. Võ Thị Trà An, Nguyễn Ngọc Tuân và Lê Hữu Ngọc (2006), “Tình hình nhiễm
Salmonella trong phân và thân thịt (bò, heo, gà) tại một số tỉnh phía Nam”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y,, 13(2), tr. 11 - 16.
2. Trần Thị Hồng Ánh (2015), Thực trạng vệ sinh giết mổ lợn và ô nhiễm vi sinh vật
ở thịt sau giết mổ tại 3 thành phố thuộc tỉnh Quảng Ninh, đề xuất giải pháp khắc phục, Luận văn Thạc sĩ Thú y, trường Đại học Nông Lâm, Đại học Thái Nguyên. 3. Cục thú y (1998), “Quy định tạm thời về vệ sinh thú y đối với cơ sở giết mổ
động vật”.
4. Cục Vệ sinh an toàn thực phẩm - Bộ Y tế (2011 - 2018), Số liệu các vụ ngộđộc thực phẩm hàng năm.
5. Đỗ Bích Duệ (2012), Nghiên cứu một số đặc điểm sinh học của vi khuẩn Escherichia coli trên thịt lợn bán tại thành phố Thái Nguyên, Luận văn thạc sĩ
công nghệ sinh học, Đại học Thái Nguyên.
6. Nguyễn Văn Giang (2018), Nghiên cứu sự ô nhiễm Escherichia coli, salmonella trên thịt lợn tươi, một số đặc tính sinh học và đề xuất biện pháp không chế tại thành phố Lào Cai, Luận văn Thạc sĩ Thú y, trường Đại học Nông Lâm, Đại học Thái Nguyên.
7. Trần Thị Hạnh, Nguyễn Tiến Thành, Ngô Văn Bắc, Trương Thị Hương Giang, Trương Thị Quý Dương (2009), “Tỷ lệ nhiễm Salmonella spp. tại cơ sở giết mổ lợn công nghiệp và thủ công”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, tập 16 (2), tr. 51 - 56. 8. Cầm Ngọc Hoàng, Nguyễn Thị Thanh Thủy, Nguyễn Bá Tiếp (2014), “Đánh giá
thực trạng giết mổ và ô nhiễm vi khuẩn trong thịt lợn tại các cơ sở giết mổ thuộc tỉnh Nam Định” Tạp chí Khoa học và Phát triển, tập 12, số 4, tr. 549 - 557.
9. Đỗ Ngọc Hoè (1996), Một số chỉ tiêu vệ sinh nguồn nước trong chăn nuôi ở Hà Nội, Luận án PTS khoa học nông nghiệp, ĐHNN I, Hà Nội.
10. Nguyễn Thị Hiền, Phan Thị Kim, Trương Thị Hoà, Lê Thị Lan Chi (2003), Vi sinh
11. Nguyễn Thị Thu Huyền (2012), Nghiên cứu một số đặc điểm sinh học của vi khuẩn Staphylococcus aureus gây độc đường ruột nhóm B trong thịt lợn bán tại Thái Nguyên, Luận Văn thạc sĩ Công nghệ sinh học, Đại họcThái Nguyên. 12. Quốc hội, Luật số 79/2015/QH13, Luật Thú y, thông qua ngày 19/6/2015.
13. Ngô Thị Phương Nam, Phạm Khắc Liệu, Trịnh Thị Giao Chi (2008), “Nghiên cứu xử lý nước thải giết mổ gia súc bằng quá trình sinh học hiếu khí thể bám trên vật liệu polymer tổng hợp”, Tạp chí Khoa học - ĐH Huế, số 48, tr. 125. 14. Lê Đức Ngoan, Dư Thanh Hằng (2014), “Giáo trình Dinh dưỡng vật nuôi”, Nxb
Đại học Huế.
15. Phạm Thị Ngọc, Nguyễn Tiến Thành, Trần Thị Hạnh, Nguyễn Việt Hùng (2013), “Tỷ lệ nhiễm Salmonella trên lợn tại một số trang trại và lò mổ thuộc các tình phía Bắc Việt Nam”, Tạp chí Y học dự phòng, tập 23, số 4, tr. 59 - 66. 16. Lương Đức Phẩm (2000), Vi sinh vật học và an toàn vệ sinh thực phẩm, Nxb
Nông nghiệp, Hà Nội, tr. 89 - 106.
17. Nguyễn Vĩnh Phước (1970), Vi sinh vật thú y,Tập2, Nxb Đại học và Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội.
18. Nguyễn Vĩnh Phước (1976). Vi sinh vật thú y, Tập3, Nxb Đại học và Trung học