6. Bố cục của luận văn
2.3.6.Phƣơng pháp sắc ký bản mỏng và sắc ký cột
a. Phương pháp s c k b n m ng
Phƣơng pháp này đƣợc Izmailop và Schreiber đề nghị từ năm 1938, đƣợc Stan phát triển, hoàn thiện năm 1955 và có ứng dụng rộng rãi.
Phƣơng pháp sắc ký lớp mỏng đƣợc dùng để định tính, thử độ tinh khiết và đôi khi để bán định lƣợng hoặc định lƣợng hoạt chất thuốc. Sắc ký lớp mỏng là một kỹ thuật tách các chất đƣợc tiến hành khi cho pha động di chuyển qua pha tĩnh trên đó đã đặt hỗn hợp các chất cần tách. Pha tĩnh là chất hấp phụ đƣợc chọn phù hợp theo từng yêu cầu phân tích, đƣợc trải thành lớp mỏng đồng nhất và đƣợc cố định trên các phiến kính hoặc phiến kim loại. Pha động là một hệ dung môi đơn hoặc đa thành phần đƣợc trộn với nhau theo tỷ lệ quy định trong từng trƣờng hợp. Trong quá trình di chuyển qua lớp hấp phụ, các cấu tử trong hỗn hợp mẫu thử đƣợc di chuyển trên lớp mỏng, theo hƣớng pha động, với những tốc độ khác nhau. Kết quả, ta thu đƣợc một sắc ký đồ trên lớp mỏng. Cơ chế của sự chia tách có thể là cơ chế hấp phụ, phân bố, trao đổi ion, sàng lọc phân tử hay sự phối hợp đồng thời của nhiều cơ chế tùy thuộc vào tính chất của chất làm pha tĩnh và dung môi làm pha động.
Ðại lƣợng đặc trƣng cho mức độ di chuyển của chất phân tích là hệ số di chuyển Rf đƣợc tính bằng tỷ lệ giữa khoảng dịch chuyển của chất thử và khoảng dịch chuyển của dung môi:
Rf = a/ b (2.2)
Trong đó:
a: Là khoảng cách từ điểm xuất phát đến tâm của vết mẫu.
b: Là khoảng cách từ điểm xuất phát đến mức dung môi đo trên cùng đƣờng đi của vết, tính bằng cm.
Rf: Chỉ có giá trị từ 0 – 1.
+ Ưu đi m của kỹ thuật: Hiệu quả tách cao, thời gian ngắn, lƣợng chất ít, tốn
biệt là chọn đƣợc hệ dung môi phù hợp dùng để tách các hợp chất hữu cơ có trong mẫu nghiên cứu bằng sắc ký cột.
+ Nhược đi m của kỹ thuật:Thành phần pha động dễ thay đổi trong quá trình
thực hiện, các vết sau khai triển thƣờng bị kéo đuôi và chỉ dùng khi hỗn hợp cần tách có số lƣợng ít, vài trăm miligam, còn nếu mẫu nhiều, vài gam thì tách bằng sắc ký cột sẽ kinh tế hơn [8].
b. Phương pháp s c k c t
Sắc ký cột là kỹ thuật phổ thông nhất trong các phòng thí nghiệm. Phƣơng pháp này rất đơn giản và có thể phân lập các hợp chất khỏi hỗn hợp một cách nhanh chóng. Tuy nhiên, giống nhƣ nhiều kỹ thuật hóa học thực hành khác, để có thể thiết lập và chạy một cột sắc ký nhanh và hiệu quả lại cần đến nhiều năm kinh nghiệm.
Các cột sắc ký thƣờng đƣợc dùng trong các phòng thí nghiệm vô cơ và hữu cơ để loại bỏ các nguyên liệu không phản ứng ban đầu hoặc phân lập một sản phẩm mong muốn khỏi các sản phẩm phụ sau khi phản ứng hoàn thành. Để làm đƣợc điều này, hỗn hợp phản ứng đƣợc đi qua một ống thủy tinh thẳng đứng, bên trong có nhồi hạt silica gel, các chất đi ra đƣợc thu lại thành từng phần nhỏ hay phân đoạn nhỏ ở đầu dƣới của cột. Các thành phần khác nhau của mẫu đƣợc phân tách thành các loại hợp chất khác nhau do tƣơng tác của hỗn hợp với silica gel.
Các hợp chất phân cực sẽ tƣơng tác với silica gel mạnh hơn so với các hợp chất không phân cực nên chúng sẽ đi ra khỏi cột (hoặc rửa giải) chậm hơn so các hợp chất không phân cực. Khi một mẫu có chứa các hợp chất có độ phân cực tƣơng tự nhau, việc phân tách chúng ở các phần nhỏ và thu hồi mẫu sạch sẽ rất khó khăn.
Việc nhồi cột chính xác đƣợc cho là yếu tố thực nghiệm quan trọng nhất, bên cạnh đó, một số yếu tố khác có thể tối ƣu để có thể đạt khả năng phân tách tốt nhất trong thời gian ngắn nhất.
Phương pháp nhồi cột
Nhồi cột kiểu ƣớt (huyền phù)
Ƣu điểm Nhƣợc điểm
- Cách làm:
1. Rót dung môi vào khoảng 1/2 dung tích cột sắc ký. 2. Dùng cốc có mỏ, đong lƣợng silicagel vừa đủ.
3. Trong bình phản ứng hoặc cốc có mỏ, đong lƣợng dung môi gấp khoảng 1,5 lần lƣợng silica gel.
4. Thêm silica gel vào dung môi, từng ít một, vừa thêm vừa lắc nhẹ, sử dụng pipet Pasteur hoặc đũa thủy tinh để khuấy lên.
5. Rót hoặc dùng pipet để thêm hỗn hợp silica gel và dung môi vào cột. Để dung môi thoát ra khỏi cột tránh bị tràn.
6. Gõ nhẹ vào cột để bọt khí thoát ra và silica lắng xuống.
7. Tiếp tục đổ hỗn hợp vào cột đến khi tất cả lƣợng silica gel hết. 8. Rửa thành cột bằng cách rót dung môi lên thành trong của cột.
9. Mở van tháo dung môi đến khi mức dung môi trong cột chạm đến bề mặt của pha tĩnh.
10. Rót mẫu cần phân lập vào thành cột sắc ký, đồng thời mở van xả cột và rót dung môi để rửa giải [8].
(adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});