PHẦN 3 : ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.2. Vật liệu và dụng cụ thí nghiệm
3.2.1. Vật liệu nghiên cứu
a. Vật liệu
Mẫu máu sử dụng để tách chiết DNA được thu thập được trình bày ở bảng 4.1. Trình tự mồi đặc hiệu exon 10 của gen FAT1 được kế thừa từ nghiên cứu “Xác
định đột biến Q2933P trên gen FAT1 ở bệnh nhân bị thiểu năng trí tuệ trong một gia đình có nạn nhân chất độc dioxin ở Việt Nam” của Nguyễn Thị Thanh Ngân và cộng
sự [18]. Các oligonucleotide được tổng hợp bởi Phusa Biochem.
Bảng 3.1. Cặp mồi sử dụng nhân gen FAT1
Tên mồi Trình tự mồi (5’-3’) Kích thước sản phẩm PCR FAT1-F CGTGCCTATTGGAACAGAGATAG
696 bp FAT1-R GAATCAGCATCCGTGGTACTT
Các hóa chất, sinh phẩm Sinh học phân tử thường quy
b. Hoá chất
Bảng 3.2. Bảng liệt kê các hoá chất cần sử dụng trong q trình thí nghiệm
STT Tên hoá chất sử dụng
Hoá chất tách chiết DNA
1 Cồn, nước cất
2 Proteinase K (Thermo Scientific) 3 RNase (Thermo Scientific)
4 Bộ Tissue Genomic DNA Extraction Mini Kit
Hoá chất điện di
5 Loading dye… (Thermo Scientific) 6 Gene Ladder (Fastgene)
7 Ethidium Bromide
8 Midori Green Direct (Genetics)
9 Agarose
10 TAE 1X (Tris base, Acid acetic, EDTA)
Hoá chất PCR
11 10X Dream Taq DNA Polymerase (Thermo Scientific) 12 10mM dNTP Mix (Thermo Scientific)
13 Cặp mồi FAT1 (PHUSA Biochem)
14 Nước khử ion
3.2.2. Dụng cụ thí nghiệm
Bảng 3.3. Bảng liệt kê các dụng cụ và thiết bị cần thiết trong q trình thí nghiệm trong q trình thí nghiệm
STT Dụng cụ và thiết bị Tên hãng
Dụng cụ
1 Pipette, dao, kéo, phanh, giấy parafilm 2 Ống eppendorf (1,5ml, 200, 100)
3 Ống đong, cốc đong, bình định mức, bình giữ nhiệt,…
Thiết bị
4 Máy chuẩn pH, máy khuấy từ, lị vi sóng 5 Tủ cấy, tủ hút khí, tủ lạnh
6 Máy Votex, máy Spindown Genius 3
7 Máy li tâm lạnh Mikro 220R Hettich
8 Bể ổn nhiệt Grant
9 Bộ điện di Scie – Plas
10 Máy soi gel Wealtec corp Uvtronsilluminator
11 Máy PCR Thermocycler
12 Máy đo nồng độ quang phổ Thermo scientific
13 Máy cất nước