L: Ladder 1kb của hãng Thermo Siencetific
Đường chạy từ 1→24 (A1→G4) : DNA tổng số được tách từ 24 mẫu máu thu thập được. Thơng tin kí hiệu bệnh nhân được chi tiết trong nhật kí thí nghiệm.
DNA tổng số được tiến hành điện di trên gel agarose 0,80%. Số lượng mẫu nạp trên mỗi làn trên bản điện di là 5uL/mỗi làn.
Kết quả điện di cho thấy các mẫu DNA tổng số thu được có chất lượng đạt yêu cầu, DNA ít bị đứt gãy, các band sáng và rõ ràng đủ điều kiện để thực hiện phản ứng PCR và các nghiên cứu tiếp theo.
4.3. Kết quả PCR khuyếch đại gen FAT1
PCR khuếch đại gen FAT1 có kích thước 696 bp trên exon 10 của gen FAT1 được thực hiện với cặp mồi đặc hiệu theo nghiên cứu của Nguyễn Thị Thanh Ngân và cộng sự [18]có trình tự như ở bảng 3.1.
Nhóm nghiên cứu đã lặp lại chính xác điều kiện phản ứng như nghiên cứu gốc nhưng khơng thu được sản phẩm PCR mong muốn. Do đó, chúng tơi đã tiến hành tối ưu hóa các điều kiện của phản ứng bao gồm (1) nhiệt độ gắn mồi, (2) thời gian kéo dài, (3) nồng độ DNA khn theo 3 dải pha lỗng và (4) thể tích của phản ứng. Kết quả tối ưu cho thấy các điều kiện phù hợp nhất cho PCR gen FAT1 sử dụng cặp mồi nói trên bao gồm nhiệt độ gắn mồi 55oC, thời gian kéo dài 45 giây, nồng độ DNA khn pha lỗng 10 lần và thể tích phản ứng 15 uL.
Sau khi đã tối ưu hóa thành cơng điều kiện của PCR, gen FAT1 trên các mẫu nghiên cứu thuộc 3 gia đình đã được khuếch đại. Danh sách 3 gia đình được trình bày trong bảng 4.2 và kết quả điện di trên gel agarose 0.8% của các sản phẩm PCR được trình bày trong hình 4.2.
Bảng 4.2: Danh sách các mẫu thuộc 3 gia đình được tiến hành PCR
Người ơng có tiền xử phơi nhiễm dioxin
(thế hệ thứ nhất)
Con trai (thế hệ thứ 2)
Cháu gái người bị thiểu năng trí tuệ (thế hệ thứ 3)
Gia đình 1 A2 A3 A1
Gia đình 2 D2 D3 D1
Gia đình 3 E2 E3 E1