PHẦN 4 : KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
4.3. Kết quả PCR khuyếch đại gen FAT1
PCR khuếch đại gen FAT1 có kích thước 696 bp trên exon 10 của gen FAT1 được thực hiện với cặp mồi đặc hiệu theo nghiên cứu của Nguyễn Thị Thanh Ngân và cộng sự [18]có trình tự như ở bảng 3.1.
Nhóm nghiên cứu đã lặp lại chính xác điều kiện phản ứng như nghiên cứu gốc nhưng không thu được sản phẩm PCR mong muốn. Do đó, chúng tôi đã tiến hành tối ưu hóa các điều kiện của phản ứng bao gồm (1) nhiệt độ gắn mồi, (2) thời gian kéo dài, (3) nồng độ DNA khuôn theo 3 dải pha loãng và (4) thể tích của phản ứng. Kết quả tối ưu cho thấy các điều kiện phù hợp nhất cho PCR gen FAT1 sử dụng cặp mồi nói trên bao gồm nhiệt độ gắn mồi 55oC, thời gian kéo dài 45 giây, nồng độ DNA khuôn pha loãng 10 lần và thể tích phản ứng 15 uL.
Sau khi đã tối ưu hóa thành công điều kiện của PCR, gen FAT1 trên các mẫu nghiên cứu thuộc 3 gia đình đã được khuếch đại. Danh sách 3 gia đình được trình bày trong bảng 4.2 và kết quả điện di trên gel agarose 0.8% của các sản phẩm PCR được trình bày trong hình 4.2.
Bảng 4.2: Danh sách các mẫu thuộc 3 gia đình được tiến hành PCR
Người ông có tiền xử phơi nhiễm dioxin
(thế hệ thứ nhất)
Con trai (thế hệ thứ 2)
Cháu gái người bị thiểu năng trí tuệ (thế hệ thứ 3)
Gia đình 1 A2 A3 A1
Gia đình 2 D2 D3 D1
Gia đình 3 E2 E3 E1
L: Ladder 1kb của hãng Thermo Siencetific
Đường chạy từ 1 → 9 : Sản phẩm PCR đoạn gen FAT1
Lượng mẫu nạp trên mỗi làn trên bản điện di là 5 uL/mỗi làn.
Kết quả điện di sản phẩm cho PCR ở hình 4.2 cho thấy tại các đường chạy xuất hiện băng sáng, không đứt gãy tuy nhiên vẫn có băng mờ phía dưới có thể là mồi thừa, primer dimers hay các sản phẩm phụ không mong muốn khác. Đối chiếu với thang chuẩn DNA kích thước của sản phẩm PCR tương ứng với kích thước dự đoán theo lý thuyết ≈700bp. Như vậy có thể tạm thời kết luận PCR đã khuếch đại thành công gen FAT1 từ mẫu máu của người liên quan đến phơi nhiễm dioxin.