Phƣơng pháp đánh giá hoạt tính kháng sinh

Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm của các dịch chiết và các hợp chất phân lập đƣợc đánh giá đối với các vi sinh vật kiểm định (VSVKĐ), bao gồm ba chủng vi khuẩn Gram dƣơng (Enterococcus faecalis ATCC299212, Staphylococcus aureus

ATCC25923 và Bacillus cereus ATCC13245), ba chủng vi khuẩn Gram âm (Escherichia coli ATCC25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, và Salmonella enterica ATCC13076), và một chủng nấm men Candida albicans ATCC 24433.

Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định đƣợc thực hiện dựa trên phƣơng pháp pha loãng đa nồng độ. Đây là phƣơng pháp thử hoạt tính kháng VSVKĐ và nấm nhằm đánh giá mức độ kháng khuẩn mạnh yếu của các mẫu thử thông qua các giá trị thể hiện hoạt tính là MIC (nồng độ ức chế tối thiểu). Mẫu ban đầu đƣợc pha loãng trong DMSO ở dải nồng độ giảm dần từ 3002.34 µM với số thí nghiệm lặp lại N=3.

Chuẩn bị dung dịch vi khuẩn hoặc nấm với nồng độ 2×105CFU/ml.

Tiến hành thử: lấy 6 l dung dịch mẫu thử có nồng độ 10mM vào hàng đầu tiên có chứa 100l môi trƣờng LB rồi pha loãng nối tiếp giảm ½ nồng độ vào các hàng có chứa 50l cho đến khi đạt đƣợc nồng độ là 2.34 M, thêm 50 l dung dịch vi khuẩn và nấm ở nồng độ 2×105 CFU/ml, ủ ở 37oC. Sau 24h, xác định sơ bộ giá trị MIC bằng quan sát. Giá trị MIC đƣợc xác định tại giếng có nồng độ chất thử thấp nhất gây ức chế hoàn toàn sự phát triển của vi sinh vật sau 24 giờ nuôi cấy và đƣợc xác định chính xác dựa trên số liệu đo độ đục tế bào bằng máy quang phổ Bioteck và phần mềm Raw data. Streptomycin và nystatin đƣợc sử dụng làm đối chứng dƣơng [91, 92].

CHƢƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN