Phổ 1H-NMR của hợp chất AV4 (Phụ lục 13) cho thấy tín hiệu proton của một nhóm oxymethyl tại H 3,90 (3H, s); năm tín hiệu proton ở vùng trường cao được dự đoán cho liên kết của carbon trong vòng thơm hoặc của carbon chứa liên kết đôi C = C tại H 6,30 (1H, dt, J = 15,5, 6,0 Hz ), H 6,57 (1H, d, J = 15,5 Hz), H 6,97 (1H, dd, J = 8,0, 1,5 Hz). Ngoài ra phổ 1H NMR còn xuất hiện tín hiệu của một đơn vị đường với proton anome tại δ 4,91 (d, J = 8,0 Hz), hằng số tương tác của proton này lớn chứng tỏ cấu hình của liên kết đường có dạng β.
Hình 3.2.4 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC chính của hợp chất AV4
Trên phổ 13C-NMR (Phụ lục 13) cho thấy tín hiệu của 16 nguyên tử carbon với: một nhóm oxymethyl (OCH3); mười carbon của nhóm methine (CH); hai carbon của nhóm methylene (CH2) và ba carbon không liên kết với hydro. Các số liệu phổ proton được gán với các số liệu carbon tương ứng thông qua phổ HSQC (Phụ lục 13). Phân tích số liệu phổ 1H-, 13C-NMR và phổ HSQC cho phép xác định sự tồn tại của hợp chất phenolic glycoside với các tín hiệu đặc trưng: một nhóm oxymethyl tại C 56,7 (C-10) /H 3,90 (3H, s); ba carbon không liên kết với hydro có chứa liên kết đôi C = C của vòng benzen hoặc cả liên kết với O tại C 150,9 (C-3), 147,6 (C-4) và 133,7 (C-1); ba nhóm methine của vòng benzen tại C 118,0 (C-5)/H 7,13 (1H, d), C 120,7 (C-6)/H 6,97 (1H, dd) và C 111,5 (C-2)/H 7,09 (1H, d), hai nhóm methine của carbon chứa liên kết đôi C
97
= C tại C 131,3 (C-7)/H 6,57 (1H, d) và C 128,9 (C-8)/H 6,30 (1H, dt), hai nhóm methylene chứa liên kết với nhóm hydroxyl tại C 63,7 (C-9)/H 4,23 (2H, d) và C 62,5 (C-6’)/H 3,71 (1H, dd) và H 3,89 (1H, dd); năm nhóm oxymethine còn lại được xác định của gốc đường trong đó có một carbon anome tại C 102,8 (C-1’)/H 4,91 (1H, d) và bốn nhóm khác tại C 74,4 (C-2’)/H 3,51 (1H, dd), C 77,9 (C-3’)/H 3,51 (1H, t), C 71,4 (C-4’)/H 3,42 (1H, t), C 78,2 (C-5’)/H 3,42 (1H, m).
Bảng 3.2.4 Số liệu phổ 1H và 13C của hợp chất AV4 và chất so sánh
C #C AV4 C DEPT H (J = Hz) HBMC (H C) 1 133,7 133,7 C - 2 111,5 111,5 CH 7,09 (d, 1,5) 1, 3 3 159,9 150,9 C - 4 147,9 147,6 C - 5 118,0 118,0 CH 7,13 (d, 8,0) 6 120,7 120,7 CH 6,97 (dd, 8,0, 1,5) 7 131,3 131,3 CH 6,57 (d, 15,5) 6, 8 8 128,9 128,9 CH 6,30 (dt, 15,5, 6,0) 6 9 63,7 63,7 CH2 4,23 (d, 6,0) 10 56,7 56,7 OCH3 3,90 (s) 8, 9 1’ 102,8 102,8 CH 4,91 (d, 8,0) 2’; 3’ 2’ 74,9 74,4 CH 3,51 (dd, 8,0, 9,0) 3’ 3’ 77,9 77,9 CH 3,51 (t, 9,0) 4’ 4’ 71,4 71,4 CH 3,42 (t, 9,0) 5’ 5’ 78,2 78,2 CH 3,42 (m) 6’ 62,5 62,5 CH2 3,71 (dd, 10,0, 4,5) 3,89 (dd, 10,0, 5,5)
#C: độ chuyển dịch 13CNMR của coniferin được đo ở 75MHz trong CD3OD [99]
C: độ chuyển dịch 13CNMR của AV4 được đo ở 125MHz trong CD3OD
Trên phổ HMBC(Phụ lục 13)cho thấy có sự tương tác giữa nguyên tử H-1’ tại H 4,91 tới C-4 (C 147,6). Đồng thời các tương tác trực tiếp HSQC gồm H-1’/C-1’, H-4/C- 4 cho phép qui kết các giá trị phổ 1H-, 13C- tại các vị trí này là phù hợp. Tương tự ta cũng xác định được một số tương tác khác trên phổ HMBC giữa nguyên tử H-2’ tại H 3,51 tới C-3’ (C 77,9)/C-1’ ( C 102,8), giữa nguyên tử H-3’ tại H 3,51 tới C-4’ (C 71,4), giữa nguyên tử H-4’ tại H 3,42 tới C-5’ (C 78,2). Đồng thời các tương tác trực tiếp
98
HSQC H/C cho phép qui kết các giá trị phổ 1H-, 13C- tại các vị trí trên đường là phù hợp. Các tương tác HMBC khác được thể hiện giữa nguyên tử H-7 tại H 6,75 tới C-6 (C 120,7)/C-2 (C 111,5)/C-1 (C 133,7), giữa nguyên tử H-8 tại H 6,30 tới C-1 (C 133,7), giữa nguyên tử H-6 tại H 6,97 tới C-2 (C 111,5)/C-4 (C 147,6), H-9 tại H 4,23 tới C- 8 (C 128,9)/C-7 (C 131,3), giữa nguyên tử H của nhóm oximethyl tại H 3,90 tới C-3 (C 150,9). Đồng thời các tương tác trực tiếp HSQC H/C cho phép qui kết các giá trị phổ 1H-, 13C- tại các vị trí là phù hợp (Bảng 3.2.4). Từ các dữ kiện đã nêu, cùng với sự phù hợp hoàn toàn về số liệu phổ 13C-NMR so với các số liệu đã được công bố, hợp chất
AV4 được xác định là coniferin [99], một hợp chất được tìm thấy ở cây Angelica archangelica - là một loài thực vật có hoa trong họ Hoa tán, Coniferin là chất chuyển hóa ở cây lá kim, đóng vai trò là chất trung gian trong quá trình đốt cháy thành tế bào, cũng như có các vai trò sinh học khác [100]. Hợp chất AV4 là hợp chất thứ 2 thuộc nhóm chất phenolic glycoside và lần đầu được phân lập từ cây ngải cứu.