Để có thể phục vụ cho các hoạt động công nghiệp sản xuất chất kháng nấm từ chủng nghiên cứu, lựa chọn môi trường lên men là bước có vai trò rất quan trọng. Một môi trường lên men tốt phải vừa thích hợp cho chủng xạ khuẩn sinh trưởng tốt lại đồng thời cho hiệu suất sản xuất chất kháng nấm cao. Để lựa chọn được MT lên men đáp ứng cả 2 yêu cầu trên, tiến hành nuôi cấy trên xạ khuẩn nội sinh C12 và R12-4 trên 7 môi trường nghiên cứu: Gause I, Gause II, A-H4, ISP4, ISP2, 79 và tinh bột casein. Nhiệt độ phòng, pH 6,5 ÷ 7 và lắc 150 vòng/phút.
Bảng 3.13. Môi trường thích hợp cho sinh tổng hợp hoạt chất kháng nấm của hai xạ khuẩn C12 và R12-4
Môi trường Vòng kháng nấm ( D-d, mm )
G. candidum F. oxysporum F. udum C. trumcatum
C12 R12-4 C12 R12-4 C12 R12-4 C12 R12-4 Gause I 4 4 7 5 5 6 4 8 Gause II 5 8 4 6 13 7 6 4 ISP2 9 13 8 13 17 12 11 6 ISP4 7 6 5 4 4 6 7 5 Tinh bột casein 14 10 9 14 10 13 12 12 A-H4 18 17 20 19 19 14 14 19 79 15 15 19 23 12 15 10 16
Kết quả cho thấy, chủng xạ khuẩn nội sinh C12 sinh trưởng và sinh tổng hợp hoạt chất kháng nấm cao nhất trên môi trường AH4 với vòng kháng nấm dao động từ 14 ÷ 20mm tùy vào chủng nấm kiểm định (Bảng 3.13.). Chủng R12-4 sinh tổng hợp hoạt chất kháng nấm thích hợp trên môi trường AH4 và môi trường 79, với vòng kháng nấm dao động từ 15 ÷ 23 mm. Như vậy cả hai chủng xạ khuẩn nghiên cứu đều sinh tổng hợp hoạt tính kháng nấm cao nhất trên môi trường giầu có chứa bột đậu tương. Môi trường AH4 sẽ được lựa chọn trong các nghiên cứu tiếp theo.
3.3.2. Xác định điều kiện nuôi cấy thích hợp cho sinh tổng hợp hoạt chất kháng nấm - Khảo sát pH nuôi cấy
Để tìm ra pH thích hợp cho việc tổng hợp hoạt chất kháng nấm của chủng xạ khuẩn R12-4 và C12, chúng tôi tiến hành nghiên cứu ở các pH 6 đến 8, bước nhảy 0,5 với các điều kiện công nghệ khác được giữ nguyên như trên.
Bảng 3.14. Ảnh hưởng của pH môi trường đến khả năng sinh tổng hợp chất kháng nấm
pH
Vòng kháng nấm ( D-d, mm )
G. candidum F. oxysporum F. udum C. trumcatum
C12 R12-4 C12 R12-4 C12 R12-4 C12 R12-4
6,5 9 16 7 16 9 15 10 11
7 13 21 11 19 13 17 12 18
7,5 9 19 10 18 11 10 11 13
8 9 15 7 15 10 8 8 10