kháng khuẩn
Sau khi phân lập và thuần khiết được 40 chủng xạ khuẩn, tiến hành kiểm tra sơ bộ khả năng đối kháng của các chủng xạ khuẩn phân lập đượcbằng phương pháp đặt cục thạch với các chủng vi sinh vật kiểm định. Kết quả được thể hiện trên bảng 3.3, 3.4 và hình 3.3
STT KH chủng Vòng kháng khuẩn D – d, mm 1 2 3 4 5 6 7 1 R10-4 20 15 - 26 20 22 27 2 R12-4 24 18 - 28 22 23 29 3 R8-14 23 16 - 25 19 21 28 4 R8-1 24 15 - 15 - - 16 5 R8-11 - - - - 6 7 - 6 R8-7 7 - - - - 7 R8-6 8 - - - - 8 R8-3 - - - 10 - - 8 9 R12-5 - - - 7 - - 6 10 R12-1 20 - - - - 11 C12 - - - 20 14 12 22 12 C2-3 7 - - 15 - - 16 13 C2-4 6 - - 8 - - 9 14 C2-5 8 - - 10 - - 11 15 R8-5 6 - 5 8 - - 8 16 R12-3 6 4 - 7 - - 8
Ghi chú: 1. Staphylococcus aureus; 2. Pseudomonas aeruginosa ATCC; 3. Bacillus subtilis; 4. Colletrichum trumcatum; 5. F. oxysporum; 6. Fusarium udum; 7. Geotrichum candidum.
Bảng 3.4. Số lượng các chủng xạ khuẩn nội sinh phân lập có khả năng đối kháng với các vi sinh vật kiểm định
Chủng vi sinh vật kiểm định Số chủng có hoạt tính đối kháng
Staphylococcus aureus 12 Pseudomonas aeruginosa 5 Bacillus subtilis 1 Fusarium udum 5 F. oxysporum 5 Colletrichum trumcatum 12 Geotrichum candidum 12
a b c d
Hình 3.3.Khả năng đối kháng của một số chủng xạ khuẩn phân lập với F. oxysporum (a, b),Staphylococcus aureus (c) và Colletotrichum sp (d)
Kiểm định khả năng kháng khuẩn của 40 chủng xạ khuẩn thuần khiết được,có 16 chủng có khả năng tổng hợp chất kháng nấm, kháng khuẩn, kết quả cho thấy, có 30% xạ khuẩn kháng vi khuẩn Sta. aureus, 12,5% kháng P.aeruginosa, 2,5% kháng B.subtilis. Đối với các chủng nấm kiểm định, có 30% xạ khuẩn nội sinh phân lập được đối kháng với
Geotrichum candidum(nấm gây bệnh thực vật gây thối chua trái cây họ cam quýt, cà chua, cà rốt và một số rau quả) vàColletotrichum (nấm gây bệnh thán thư trên cây và quả),
12,5% kháng F. udum, F. oxysporum (gây bệnh héo cây, chết cây và thối cổ rễ). Trong đó, chủng R12-4, R8-14, R10-4 và C12 có khả năng kháng cả bốn nấm khiểm định với vòng kháng nấm dao động từ 1,2÷ 2,2 cm. Như vậy, hai chủng xạ khuẩn nội sinh này có tiềm năng ứng dụng trong kiểm soát dịch bệnh sau này. Các chủng này được tiếp tục nghiên cứu các đặc điểm hình thái, sinh hóa nhằm định tên và sử dụng trong các nghiên cứu tiếp theo.
Căn cứ vào kết quả kiểm tra sơ bộ hoạt tính đối kháng một số chủng vi sinh vật kiểm định, chúng tôi đã chọn ra bốn chủng xạ khuẩn có hoạt tính mạnh nhất để tiếp tục sàng lọc bước 2. Các chủng này ký hiệu là R12-4, R8-14, R10-4 và C12.Kết quả kiểm tra được thể hiện trên Bảng 3.5.
Bảng 3.5. Khả năng kháng vi sinh vật kiểm định của dịch sau lên men của các chủng xạ khuẩn
Chủng VSV kiểm định
Xạ khuẩn
R12-4 R10-4 R8-14 C12
Sta. aureus ATCC 25922 ++ + + -
P. aeruginosa ATCC 25932 - - - - B. subtilis HU058 - - - - G.candidum VSVĐ1 ++ + + ++ F. oxysporum VSVĐ 3 + + + ++ F. udum + + + ++ C. trumcatum VSVD 14 ++ + + +
Ghi chú: “-” không có hoạt tính kháng;“+” có hoạt tính kháng. vòng kháng dưới 12 mm; (++) Có hoạt tính kháng mạnh, vòng kháng to (12-16 mm) và rõ.
a b c d
Hình 3.4.Xạ khuẩn C12 và R12-4 đối kháng với (a) F. oxysporum, (b)C. trumcatum và (c)Sta. aureus và (d) F. oxysporum
Với mục đích tuyển chọn được các chủng xạ khuẩn nội sinh có hoạt tính kháng nấm cao.Chúng tôi lựa chọn 02 chủng xạ khuẩn C12 và R12-4 để tiến hành các nghiên cứu tiếp theo. Nhiều nghiên cứu trên thế giới đã khẳng định vai trò của xạ khuẩn nội sinh trên nhiều đối tượng câytrồng như cây thuốc [23,24],cây sâm [25] cây có múi (cam, quýt) [29, 45] cây lương thực [20,21] trong thu nhận các chất kháng nấm và kháng khuẩn có tiềm năng sử dụng trong kiểm soát sinh học. Điều này cũng thật dễ hiểu vì các cơ thể nội sinh này muốn cùng sinh trưởng với cây chủ chúng cần hỗ trợ cây chủ trong sự phát triển bằng cách sinh ra các chất kích thích sinh trưởng hoặc kiểm soát sinh học tránh sự xâm nhập chiếm chỗ và lấy mất nguồn cung cấp dinh dưỡng của chúng của các sinh vật khác. Chính vì vậy, trong số gần 300.000 loài thực vật tồn tại trên trái đất thì mỗi loại cây sẽ là cây chủ cho một hoặc nhiều loài vi sinh vật nội sinh [29].