Phản ứng RPA có thể hoạt động ở nhiệt độ từ 22 đến 45°C và không giới hạn về kiểm soát nhiệt độ [83], tuy nhiên, hầu hết các bài báo được công bố về tối ưu hóa cho nhiệt độ phản ứng RPA là từ 37 đến 41°C. Để kiểm soát nhiệt độ phản ứng, các thiết bị khác nhau có thể được sử dụng, bao gồm máy ủ, lò sưởi, lò sưởi hóa học [96] và nhiệt độ cơ thể [48], và cũng có các ví dụ về RPA hoạt động ở nhiệt độ môi trường xung quanh ở những vùng ấm (trên 30°C) [96].
Bộ kit TwistAmpTM chuẩn được thiết lập để hoạt động tối ưu ở dải nhiệt độ từ 37°C đến 41°C. Ở nhiệt độ cao hơn, hệ thống sẽ bị tổn hại khi các enzyme dần dần mất hoạt động. Ở nhiệt độ dưới mức tối ưu, Recombinase Polymerase Amplification (RPA) vẫn có thể hoạt động tốt tuy nhiên tốc độ phản ứng giảm.
- Nguyên lý: Để tối ưu nhiệt độ phản ứng, chúng tôi tiến hành đồng thời các phản ứng RPA giống hệt nhau về các thành phần tham gia (như Bảng 2.1) chỉ khác nhau nhiệt độ phản ứng. Sau khi thực hiện xong một loạt phản ứng, tiến hành phân
tích để tìm nhiệt độ gắn mồi cho kết quả tốt nhất với thời gian phát hiện sớm nhất và tín hiệu huỳnh quang thu được là tốt nhất.
- Dải gradient nhiệt độ sử dụng tối ưu hóa nhiệt độ gắn mồi: Chúng tôi sử dụng dải nhiệt độ phản ứng từ 37°C - 41°C theo đề xuất của nhà sản xuất TwistAmpTM và một vài nhiệt độ nằm ngoài dải nhiệt độ đề xuất (45℃ và 50℃) nhằm khảo sát hiệu suất của phản ứng RPA ở các điều kiện nhiệt độ khác nhau và chọn ra nhiệt độ phản ứng tối ưu.