CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu
2.2. Các trang thiết bị, hóa chất, dụng cụ sử dụng trong quá trình nghiên cứu
Máy sàng lọc các bệnh nhiễm trùng: hiệu Architect 2: i2000 SR, hiệu Diasorin: Eti_Max 3000
Hệ thống máy sàng lọc sinh học phân tử NAT
Kỹ thuật sinh học phân tử dựa trên nguyên lý phản ứng khuyếch đại nhân lên gấp bội các vật liệu di truyền có nguồn gốc từ các virus gây bệnh và tăng khả năng phát hiện khi lượng virus này quá ít trong máu. Việc áp dụng NAT đã góp phần ngăn ngừa hữu hiệu nguy cơ lây truyền virus do người hiến máu nhiễm tác nhân gây bệnh ở giai đoạn cửa sổ. Kỹ thuật này cho phép rút ngắn thời gian cửa sổ từ 90 ngày xuống còn từ 30 đến 40 ngày đối với viêm gan C, từ 60 ngày xuống còn 20 đến 30 ngày đối với viêm gan B. Đặc biệt, NAT có thể phát hiện HIV chỉ 11 ngày sau khi nhiễm bệnh, trong khi với xét nghiệm điện hóa phát quang phải cần tới 20 ngày. Bên cạnh đó, kỹ thuật NAT còn có thể phát hiện những trường hợp nhiễm virus thể ẩn, tức là những người đã nhiễm bệnh một thời gian dài, nhưng virus chỉ tồn tại tiềm tàng trong các tế bào và cơ thể người nhiễm không sản sinh ra kháng thể, do đó không thể phát hiện được bằng các xét nghiệm gián tiếp.
Máy miễn dịch huyết học Galileo NEO xác định nhóm máu và kháng thể bất thường của hãng Immucor.
Hình 2.1. Máy miễn dịch huyết học hãng Immucor
Máy phân tích huyết học tự động: Backman Coutlter
Nguyên lý của máy: trong buồng đếm có đặt một khe đếm có lỗ đủ nhỏ cho tế bào máu đi qua. Các tế bào máu được tạo thành dòng và đưa vào khe đếm. Trong buồng đếm có đặt hai bản điện cực dương và âm giữa hai bên của khe đếm và buồng đếm. Ngoài ra trong buồng đếm còn đặt một bộ phận tạo áp suất, mỗi khi có áp suất thay đổi thì tế bào máu sẽ đi qua khe đếm ngay lập tức sẽ thay đổi trở kháng của dòng điện một chiều, làm xuất hiện xung điện. Số lượng xung điện tỷ lệ với số lượng tế bào máu đi qua khe đếm. Tuỳ kích thước của tế bào mà xung nhận được cao hay thấp. Dựa vào đó người ta biết được kích thước của tế bào.
Hoá chất xét nghiệm: bao gồm bốn hoá chất cơ bản Coulter DxH Diluent: dung dịch pha loãng.
Coulter DxH Cell Lyse: Dung dịch ly giải hồng cầu, để đo tổng số bạch cầu và HGB.
Coulter DxH Diff Pak: Hóa chất dùng để đo các thành phần bạch cầu. Coulter DxH Cleaner: dung dịch rửa
Hình 2.2. Máy phân tích huyết học tự động: hiệu Excel 22
Máy sinh hoá Architech c16000 (a3600)
Nguyên lý máy: sử dụng kỹ thuật hoá phát quang miễn dịch tự động (chemiluminescent automated immunoassay CMIA) xét nghiệm với giao thức linh hoạt được gọi là CHEMIFLEX. Kỹ thuật hoá phát quang dựa trên nguyên lý kháng nguyên (chất có trong mẫu bệnh phẩm) kết hợp với kháng thể (chất có trong thuốc thử) nhờ
chất đánh dấu có khả năng phát quang mà người ta có thể định lượng các chất có nồng độ rất thấp hoặc các chất bất thường trong cơ thể với độ chính xác cao.
Xét nghiệm glucose dựa trên nguyên lý: glucose được phosphoryl hóa bởi adenosine triphosphate (ATP) dưới sự hiện diện của hexokinase. Glucose-6-phosphate hình thành bị oxy hóa dưới sự hiện diện của glucose-6-phosphate dehydrogenase, gây ra sự khử nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) thành nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) (1, 2). Độ hấp thu của NADH được đo như một phản ứng điểm cuối ở bước sóng 340/410 nm.
Hình 2.3. Máy sinh hoá Architech c16000 (a3600)
Thử nghiệm ADVIA Chemistry Glucose Hexokinase_3 (GLUH_3) sử dụng một thuốc thử hai thành phần. Mẫu thử được thêm vào thuốc thử 1, vốn chứa dung dịch đệm, ATP và NAD. Độ hấp thu của mẫu thử trong thuốc thử 1 được đọc và sử dụng để hiệu chỉnh các chất nhiễm chéo trong mẫu thử. Thuốc thử 2 được bổ sung, kích hoạt việc chuyển đổi glucose và làm thay đổi độ hấp thu ở bước sóng 340/410 nm. Khác biệt độ hấp thu giữa thuốc thử 1 và thuốc thử 2 tỉ lệ với nồng độ glucose.
Phương trình phản ứng:
Glucose + ATP Hexokinase G6P + ADP
G6P + NAD+ G6PD 6 Phosphogluconate + NADH + H+
Đơn vị đo glucose mmol/l.
Xét nghiệm Lactat dehydrogenase (LDH) dựa trên nguyên lý: đo sự hoạt động của LDH theo phản ứng sau:
L – lactate + NAD+ Pyruvate + NADH + H+
Đo LDH dựa vào tốc độ phản ứng trên, LDH đóng vai trò xúc tác, phản ánh qua sự hấp thụ ở bước sóng 334 – 365nm. Đơn vị đo U/L.
pH, Na+, K+, CaTp được xác đinh bằng nguyên lý của điện cực chọn lọc ion.
Đơn vị đo của Na+, K+, CaTp là mmol/l
Máy tách TB tự động Haemonetics MCS+:
Hình 2.4. Máy tách TB tự động Haemonetics MCS+
Đặc tính kỹ thuật của máy Haemonetics MCS+: LDH
Kích thước: 56,5 cm (W) x 38,5 cm (D) x 44 cm (H) Trọng lượng: 28,5 kg
Điện áp: 220 – 240 VAC (+/- 10%), 50 – 60 Hz Dòng điện: ~ 2,5 A
Cầu chì: 2,5 A – 250 V
Tốc độ bơm: DRAW (rút máu) 20 – 100 ml/phút; RETURN (trả máu) 20 – 150 ml/phút.
Tốc độ li tâm: 4800 – 7000 vòng/phút (tùy theo protocol) (mặc định các mẫu sử dụng trong nghiên cứu được li tâm từ NHTC là 5500 vòng/phút)
Hoá chất tiêu hao: Bộ kit 996E: kit đơn
Túi chống đông ACD 500 ml Bộ kit 996E2: kit đôi
Túi chống đông ACD 700 ml
Nước muối sinh lý NaCl 0,9% (500 ml) Máy tách TB tự động Nigale:
Hoá chất tiêu hao: Bộ kit P-2000IA: kit đơn Bộ kit P-2000IB: kit đôi
Túi chống đông ACD Anticoagulant Citrate Dextrose Solution 700 ml
Hình 2.5. Máy tách TB tự động Nigale
Máy bảo quản khối tiểu cầu hiệu Helmer
Hình 2.6. Máy bảo quản khối tiểu cầu hiệu Helmer
Máy đo pH hiệu Crison
Các môi trường để cấy KTC: môi trường hiếu khí, yếm khí và môi trường Sabouraud để phát hiện sự nhiễm nấm.