- Dựa vào kết quả kiểm nghiệm và đề xuất tiờu chuẩn chất lượng, xõy dựng được tiờu chuẩn cơ sở của viờn nộn DIL GPTN (phụ lục 5) và chế phẩm
4.2.1.Về nghiờn cứu xõy dựng tiờu chuẩn của viờn nộn diltiazem giải phúng theo nhịp
5 (phỳt) 1 (phỳt) 30 (phỳt) 4 (phỳt) 60 (phỳt)
4.2.1.Về nghiờn cứu xõy dựng tiờu chuẩn của viờn nộn diltiazem giải phúng theo nhịp
phúng theo nhịp
Để cú thể đăng ký lưu hành thuốc, đưa chế phẩm vào điều trị, một tiờu chuẩn bắt buộc cú là phải xõy dựng được tiờu chuẩn chất lượng và phương phỏp kiểm nghiệm chế phẩm. Hiện nay, trong dược điển của nhiều nước chưa cú tiờu chuẩn về viờn nộn DIL GPTN. Trong nghiờn cứu của luận ỏn, cỏc tiờu chuẩn của viờn nộn DIL GPTN 60 mg cơ bản được xõy dựng dựa theo DĐVN IV và chuyờn luận “Diltiazem hydrochlorid extended-release capsules” của USP 30. Trong việc đỏnh giỏ chất lượng thuốc, cỏc phương phỏp phõn tớch (UV.Vis và HPLC) sử dụng để kiểm nghiệm cú độ chớnh xỏc cao và dễ ỏp dụng trong thực tế tại cỏc phũng kiểm nghiệm thuốc ở Việt Nam.
Định lượng DIL trong chế phẩm bằng phương phỏp HPLC. Trong đề tài luận ỏn, phương phỏp này đó được thẩm định chặt chẽ theo qui định đối với một phương phỏp định lượng DC trong chế phẩm bào chế về độ đặc hiệu, độ tuyến tớnh, độ đỳng và độ chớnh xỏc.
Diltiazem hydroclorid được chiết bằng methanol từ bột viờn, dung mụi này cú khả năng hoà tan tốt DIL. Sau đú, sử dụng thiết bị chiết siờu õm để làm tăng hiệu suất chiết, giảm thời gian xử lý mẫu và cú thể xử lý đồng thời nhiều mẫu trong một lần. Do đú, phương phỏp chiết này thớch hợp cho cỏc trường hợp định lượng nhiều mẫu để lấy giỏ trị trung bỡnh. Chiết DIL từ chế phẩm bằng phương phỏp siờu õm cho độ lặp lại cao. Đồng thời, cũng giảm được cỏc sai số chủ quan trong quỏ trỡnh phõn tớch định lượng.
Hiện nay, hệ thống HPLC dựng để xõy dựng phương phỏp định lượng trong chế phẩm khỏ phổ biến, phự hợp với cỏc cơ sở sản xuất và kiểm nghiệm tại Việt Nam. Detector lựa chọn là detector UV, bước súng dựng để phỏt hiện là 236 nm, đú là bước súng hấp thụ cực đại khi quột phổ của dung dịch DIL
trong pha động từ 200 - 600 nm. Khoảng nồng độ tuyến tớnh của DIL được xỏc định trong giới hạn hẹp (6 - 12àg/ml) với hệ số tương quan R2
giữa diện tớch pic và nồng độ DIL gần bằng 1. Do đú, cú thể dựng phương phỏp so sỏnh với chuẩn khi tớnh toỏn kết quả định lượng. Đồ thị cú phương trỡnh hồi qui là: Y = 52806.X + 13554, cú điểm cắt trục tung tại 13554. Vỡ vậy, nếu tớnh toỏn dựa trờn đường hồi qui sẽ cú sự chờnh lệch so với với cỏch tớnh toỏn dựa trờn dung dịch chuẩn cú cựng nồng độ. Để hạn chế sai số, cần phải pha dung dịch chuẩn và dung dịch thử cú nồng độ tương đương nhau.
Để định lượng DIL trong chế phẩm cú rất nhiều cỏc phương phỏp như: Sắc ký lớp mỏng [31], sắc ký khớ , điện di mao quản [87],….Nhưng đa số cỏc phương phỏp thường sử dụng là sắc ký lỏng pha đảo. Trong nghiờn cứu của luận ỏn, xõy dựng phương phỏp sắc ký lỏng pha đảo dựa trờn phương phỏp định lượng DIL trong viờn nộn của USP 30: Cột Symmetry C18, pha động methanol-dung dịch đệm phosphat 0,05M (60:40). Điều chỉnh pha động tới pH=4,5 nhằm làm tăng độ ổn định của DIL trong quỏ trỡnh sắc ký. USP 30 sử dụng chất xỏc định độ phõn giải của DIL là deacetyl ditiazem, chất này rất đắt tiền, khú mua ở Việt Nam, chưa phự hợp với điều kiện thực tế của cỏc phũng phõn tớch, kiểm nghiệm ở nước ta.
Phương phỏp định lượng DIL trong viờn nộn DIL GPTN 60 mg cú độ lặp lại và tỏi lặp cao với RSD khoảng 0,36% (n = 6). Độ đỳng xỏc định bằng phương phỏp thờm chuẩn. Kết quả thực nghiệm cho thấy: Phương phỏp cú tỷ lệ thu hồi khoảng 100,45% (RSD = 0,53%). Về độ phự hợp của hệ thống sắc ký, RSD của 6 lần phõn tớch liờn tiếp một mẫu chuẩn nhỏ hơn 0,15% đối với cỏc đỏp ứng phõn tớch (thời gian lưu, diện tớch pic) và nhỏ hơn rất nhiều so với giới hạn 2% do dược điển quy định. Hệ số bất đối xứng của pic DIL trong sắc ký đồ xấp xỉ 1,2, đỏp ứng yờu cầu khụng quỏ 2,0 theo qui định của USP 30. Thời gian lưu của DIL khoảng 3,9 phỳt và thời gian phõn tớch 1 mẫu chỉ mất khoảng 6 phỳt nờn đó rỳt ngắn được thời gian phõn tớch.
Chỉ tiờu về độ hoà tan đối vơi thuốc GPTN là một chỉ tiờu đặc biệt quan trọng, bởi nú sẽ quyết định thời điểm giải phúng DC để đạt được nồng độ cực đại của thuốc trong mỏu phự hợp với thời điểm diễn ra bệnh. Đồ thị giải phúng của thuốc GPTN được đặc trưng bởi đường sigma. Nghĩa là, trong khoảng Tlag, thuốc khụng được giải phúng DC. Nhưng sau đú, DC giải phúng một cỏch nhanh chúng. Do đú, việc xỏc định Tlag là yếu tố quan trong nhất trong quỏ trỡnh thử nghiệm hoà tan của thuốc GPTN. Vỡ vậy, Tlag là tiờu chuẩn đầu tiờn và rất quan trọng đặc trưng cho dạng thuốc GPTN. Để đỏnh giỏ Tlag, nhiều tỏc giả đó sử dụng cỏc phương phỏp như: đồng vị phúng xạ, chất màu, gamma scintigraphy. Tuy nhiờn, hiện nay, cỏc phương phỏp đú đều chưa cú điều kiện ứng dụng ở Việt Nam.
Một số tỏc giả khỏc thỡ xõy dựng phương trỡnh giải phúng DC. Sau đú, nội suy Tlag từ phương trỡnh toỏn học. Tuy nhiờn, để xõy dựng được mụ hỡnh động học giải phúng, thỡ phải xỏc định được khoảng 10 điểm khi đo độ hoà tan. Nhưng đối với viờn nộn DIL GPTN bào chế được, khụng thể ỏp dụng được phương phỏp nội suy này. Bởi vỡ, sau khi nứt màng, viờn giải phúng DC rất nhanh.
Trong quỏ trỡnh đo độ hoà tan, nhận thấy: Từ thời điểm ban đầu đến khi xuất hiện vết nứt trờn bề mặt viờn, DC gần như khụng giải phúng ra khỏi viờn nộn DIL GPTN. Khi viờn xuất hiện vết nứt, thỡ hàm lượng DC giải phúng vào dịch hoà tan chỉ nhỏ hơn 10%. Sau khi xuất hiện vết nứt khoảng 5 phỳt, viờn bắt đầu vỡ màng và DC giải phúng rất nhanh (sau 30 phỳt vỡ màng, khoảng 80% lượng DC đuợc giải phúng ra khỏi viờn). Do đú, cần xỏc định thời điểm bắt đầu xuất hiện vết nứt trờn màng, đú chớnh là thời gian tiềm tàng.
Lượng DIL giải phúng khi đo độ hoà tan được xỏc định bằng phương phỏp quang phổ hấp thụ UV với hệ số tương quan của phương phỏp R2
= 0,9997 (xấp xỉ 1) và độ lặp lại tốt (cỏc giỏ trị RSD đều ≤ 2,11%). Hiện nay,
cỏc mỏy quang phổ hấp thụ UV.Vis là những thiết bị thụng thường ở cỏc phũng thớ nghiệm phõn tớch và kiểm nghiệm thuốc. Vỡ vậy, xỏc định nồng độ DC khi đỏnh giỏ độ hoà tan trong quỏ trỡnh nghiờn cứu bào chế và kiểm nghiệm thuốc sẽ gặp nhiều thuận lợi hơn so với cỏc phương phỏp phõn tớch định lượng khỏc.
Chất lượng viờn nộn DIL GPTN được kiểm nghiệm theo tiờu chuẩn cơ sở đó xõy dựng và thẩm định kết quả cho thấy: Chế phẩm đạt tất cả cỏc chỉ tiờu đề ra. Kết quả thực nghiệm cho thấy viờn đồng đều về hàm lượng, khối lượng và độ hoà tan. Trong tiờu chuẩn cơ sở của viờn nộn DIL GPTN 60mg, chỉ tiờu về tỷ lệ DIL giải phúng ra khỏi viờn được xõy dựng ở cỏc mốc thời gian 5 và 7 giờ (sau 5 giờ tỷ lệ giải phúng nhỏ hơn 10%, sau 7 giờ tỷ lệ giải phúng lớn hơn 80%). Đõy là chỉ tiờu chất lượng rất quan trọng, vỡ nú đặc trưng cho tớnh chất của thuốc GPTN và ảnh hưởng trực tiếp đến SKD và 1 số thống số DĐH của chế phẩm (Cmax, Tmax,…).