Đối tượng Tổng số gàchủng (con) HGKT trung bình Số mẫu dương tính HGKT bảo hộ (%) Thí nghiệm 20 0,487 19 95 Đối chứng 10 0.075 0 0
Kết quả kiểm tra tính gây miễn dịch của virus RTD IB H120 cho thấy: + Lô miễn dịch: 19/20 mẫu dương tính có HGKT >0,15 với HGKT trung bình là 0,487. HGKT bảo hộ đạt 95%.
+ Lô đối chứng: 10/10 mẫu âm tính có HGKT < 0,15 với HGKT trung bình là 0,075. HGKT bảo hộ đạt 0%.
4.1.2. Kết quả giải mã gen đặc trưng của virus RTD IB H120
4.1.2.1. Tiếp truyền virus
Mẫu virus RTD IB H120 được xử lý và tiêm vào xoang niệu mô của phôi gà SPF 9 ngày tuổi. Sau 72 giờ, chúng tôi tiến hành thu hoạch nước trứng chứa virus RTD IB H120. Tiếp theo đó, tách chiết ARN tông số bằng để làm nguyên liệu cho phản ứng RT-PCR thi nhận chuỗi gen.
4.1.2.2. Kết quả thu nhận gen S1 và giải trình tự
Xác định chủng virus RTD IB H120 bằng phương pháp RT-PCR, cặp mồi IB-SF1/IB-SR1 đặc hiệu cho đoạn gene S1 đã được sử dụng:
Mồi xuôi IB-SF1: 5’-ATGTTGGTAACACCTCTTTAC-3’ Mồi ngược IB-SRI: 5’-ACGTCTAAAACGACGT GTTCCA-3’
Sản phẩm PCR thu được khí ử dụng cặp mồi IB-SF1/IB-SR1 là 1.611bp. Sản phẩm PCR thu đươc tiến hành giải trình tự gen bằng máy giải trình tự DNA tự động (model 3730; AppliedBiosystem) sử dụng bộ kit Big Dye terminator cycle sequencing kit (Applied Biosystems).
M 1
Hình 4.2. Kết quả nhân gen S1 của chủng virus RTD IB H120 bằng phản ứng PCR. M: Marker AND (1Kb DNA ladder- INtRON Biotchhnology);
Kết quả giải trình tự gen S1 sẽ được xử lý bằng phần mềm CLUSTAL X ver.1.81 và MegAlign (DNASTAR, Madi-son, WI) và được so sánh với các trình tự gen S1 tham chiếu khác trên ngân hàng giữ liệu gen quốc tế (GenBank). Kết quả phân tích về trình tự gen và amino acid đối với gen S1 cho thấy chủng virus “RTD IB H120” có mức độ tương đồng cao khi so sánh với chủng virus H120 (mã số GenBank là GU393335).
Hình 4.3. Cây phát sinh chủng loại gen S1 giữa chủng RTD IB H120 với các chủng tham chiếu khác
4.2. KẾT QUẢ KIỂM NGHIỆM VẮC-XIN
4.2.1. Kết quả kiểm tra vô trùng vắc-xin RTD IB H120
Để kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của vắc-xin nhược độc đông khô RTD IB H120 chế trên phôi gà sạch SPF, mỗi lô vắc-xin chúng tôi lấy mẫu theo QCVN 01-03: 2009/BNNPTNT. Mẫu lô vắc-xin được hoàn nguyên trở lại bằng PBS, sau đó nuôi cấy trên các môi trường nuôi cấy vi khuẩn: nước thịt, thạch máu, thạch thường, nước thịt gan yếm khí và môi trường nuôi cấy nấm: thạch nấm . Hút 0,2 ml vắc-xin cấy vào mỗi ống môi trường, mỗi loại môi trường dùng 2 ống, sau đó để vào tủ ấm 370C/7 ngày, đem kiểm tra sự phát triển của vi khuẩn, riêng môi trường thạch nấm để ở nhiệt độ phòng 7 ngày (bảng 4.5).
Từ kết quả bảng 4.5 cho thấy, mỗi lô vắc-xin được kiểm tra đều cho kết quả âm tính (không có vi khuẩn hoặc nấm mọc trên các môi trường kiểm tra).
Căn cứ theo TCVN 8684:2011, cả 3 lô trên đều đạt tiêu chuẩn vô trùng. Kết quả này cũng đáp ứng được yêu cầu của OIE, (2016) và tiêu chuẩn ASEAN, (2002).