Trong quá trình xét nghiệm, sau khi phát hiện các mẫu bệnh phẩm dương tính với virus cúm type A, các mẫu này tiếp tục được xét nghiệm để xác định subtype H5 bằng kỹ thuật Realtime RT-PCR. Kết quả xét nghiệm các mẫu và tỷ lệ dương tính được trình bày ở bảng 4.5 và hình 4.5.
Bảng 4.5. Tỷ lệ nhiễm virus cúm subtype H5 trong các mẫu bệnh phẩm
STT Tỉnh Đối tượng XN Kết quả XN Số mẫu XN Số mẫu + Tỷ lệ (%) 95% CI 2 Lạng Sơn Gà 144 6 4,17 1,54 8,85 Vịt 144 14 9,72 5,42 15,77 M. Trường 144 9 6,25 2,90 11,53 Tổng Lạng Sơn 432 29 6,71 4,54 9,50 3 Quảng Ninh Gà 144 5 3,47 1,14 7,92 Vịt 144 11 7,64 3,87 13,26 M. Trường 144 6 4,17 1,54 8,85 Tổng Quảng Ninh 432 22 5,09 3,22 7,61 Tổng 2 tỉnh Gà 288 11 3,82 1,92 6,73 Vịt 288 25 8,68 5,70 12,55 M. Trường 288 15 5,21 2,94 8,44 Tổng 864 51 5,90 4,43 7,69
Trong tổng số 864 mẫu xét nghiệm đã phát hiện có 51 mẫu bệnh phẩm dương tính với virus cúm subtype H5 chiếm tỷ lệ 5,90% (95% CI: 4,43-7,69). Trong đó tỷ lệ nhiễm cao nhất ở đối tượng vịt với 25/288 mẫu bệnh phẩm chiếm tỷ lệ 8,68% (95% CI: 5,70-12,55), tiếp đó là trên các mẫu môi trường với 15 mẫu dương tính chiếm tỷ lệ 5,21% (95% CI: 2,94-8,44) và thấp nhất trên đối tượng gà với 11 mẫu bệnh phẩm dương tính chiếm tỷ tệ 3,82% (95% CI: 1,92-6,73).
Kết quả trên cho thấy, tỷ lệ dương tính với subtype H5 tương đồng với kết quả của Phạm Thành Long (2016) với tỷ lệ nhiễm chung là 5,71% (95% CI: 4,89-6,53). Tuy nhiên, kết quả trên đối tượng vịt và đối tượng gà cao hơn so với kết quả của Phạm Thành Long (2016) theo đó tỷ lệ dương tính với subtype H5 ở vịt là 8,23% (95% CI: 8,20-8,30) và ở gà là 2,26% (95% CI: 2,23-2,32) còn trên đối tượng môi trường thì tỷ lệ này thấp hơn 6,83% (95% CI: 5,28-8,38).
Hình 4.5. Biểu đồ Tỷ lệ nhiễm virus cúm subtype H5 trong các mẫu bệnh phẩm
Từ kết quả trên cho thấy có sự lưu hành của virus cúm subtype H5 tại Quảng Ninh và Lạng Sơn. Tuy nhiên, tỷ lệ mẫu bệnh phẩm dương tính với virus cúm subtype H5 tại các tỉnh là khác nhau, cụ thể:
Tại Lạng Sơn, trong tổng số 432 mẫu bệnh phẩm xét nghiệm có 29 mẫu dương tính với subtype H5 chiếm tỷ lệ 6,71% (95% CI: 4,54-9,50) trong đó cao nhất trên đối tượng vịt với 14 mẫu dương tính chiếm tỷ lệ 9,72%, tiếp đó là đối tượng mẫu môi trường với 9 mẫu dương tính chiếm tỷ lệ 6,25% và thấp nhất trên các mẫu của gà với 6 mẫu dương tính chiếm tỷ lệ 4,17%.
Tại Quảng Ninh, tỷ lệ nhiễm virus cúm subtype H5 là 22/432 mẫu xét nghiệm cho kết quả dương tính chiếm tỷ lệ 5,09% (95% CI: 3,22-7,61). Cũng tương tự như Lạng Sơn, tỷ lệ dương tính cao nhất trên các mẫu bệnh phẩm của vịt với 11 mẫu dương tính (7,64%), tiếp đó đến các mẫu môi trường với 6 mẫu dương tính (4,17%) và thấp nhất trên các mẫu bệnh phẩm của gà với 5 mẫu dương tính chiếm tỷ lệ 3,47%.
Nguyên nhân tỷ lệ các mẫu bệnh phẩm dương tính với virus cúm H5 cao nhất tập trung ở các mẫu bệnh phẩm của vịt, tiếp đó đến các mẫu bệnh phẩm môi trường và thấp nhất ở các mẫu bệnh phẩm của gà có thể lý giải như sau:
Đặc điểm chăn nuôi vịt tại nước ta nói chung cũng như tại 2 tỉnh giám sát 4,17 9,72 6,25 3,47 7,64 4,17 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 Gà Vịt Môi trường Lạng Sơn Quảng Ninh
nói riêng chủ yếu là nuôi thả đồng, có nhiều đàn được chăn thả trên cùng một tuyến kênh mương do đó tạo cơ hội cho sự tiếp xúc và lây lan của virus cúm subtype H5 hơn so với trên đàn gà do phương thức chăn nuôi thả vườn hoặc nuôi nhốt nên virus ít có cơ hội tiếp xúc và lây lan hơn.
Đối với mẫu bệnh phẩm môi trường do công tác vệ sinh tiêu độc khử trùng tại các chợ sau mỗi ngày chợ ít được thực hiện, các chủ hộ kinh doanh gia cầm ít khi thực hiện vệ sinh tiêu độc phương tiện vận chuyển, lồng, chuồng nhốt, máng ăn, máng uống cho gia cầm do đó tạo điều kiện cho virus tồn lưu tại đó nên cũng phát hiện tỷ lệ lưu hành của virus cúm subtype H5 trên đối tượng này cũng khá cao. 4.2.4. Tỷ lệ nhiễm virus cúm subtype N6 trong các mẫu bệnh phẩm
Sau khi đã phát hiện các mẫu bệnh phẩm dương tính với virus cúm subtype H5, chúng tôi tiếp tục tiến hành xét nghiệm các mẫu bệnh phẩm này để phát hiện lưu hành của virus cúm subtype N6 tại các chợ buôn bán gia cầm sống trên địa bàn các tỉnh giám sát. Kết quả xét nghiệm và tỷ lệ dương tính với virus cúm subtype N6 được trình bày ở bảng 4.6 và biểu đồ 4.6.
Bảng 4.6. Tỷ lệ nhiễm virus cúm subtype N6 trong các mẫu bệnh phẩm
STT Tỉnh Đối tượng XN Kết quả xét nghiệm Số mẫu XN Số mẫu + N6 Tỷ lệ (%) 95% CI 1 Lạng Sơn Gà 144 4 2,78 0,76 6.96 Vịt 144 10 6,94 3,38 12,40 M. Trường 144 5 3,47 1,14 7,92 Tổng Lạng Sơn 432 19 4,40 2,67 6,78 2 Quảng Ninh Gà 144 2 1,39 0,17 4,93 Vịt 144 8 5,56 2,43 10,65 M. Trường 144 3 2,08 0,43 5,97 Tổng Quảng Ninh 432 13 3,01 1.61 5.09 Tổng 2 tỉnh Gà 288 6 2,08 0,77 4,48 Vịt 288 18 6,25 3,75 9,70 M. Trường 288 8 2,78 1,21 5,40 Tổng 864 32 3,70 2,55 5,19
Qua bảng 4.6 và hình 4.6 cho thấy: Tương tự như subtype H5, subtype N6 được phát hiện trong các mẫu bệnh phẩm trên địa bàn của 2 tỉnh Quảng
Ninh và Lạng Sơn.Trong tổng số 864 mẫu xét nghiệm đã phát hiện 32 mẫu dương tính với virus cúm subtype N6 chiếm tỷ lệ 3,70% (95% CI: 2,55-5,19).
Hình 4.6. Biểu đồ Tỷ lệ nhiễm virus cúm subtype N6 trong các mẫu bệnh phẩm Số mẫu dương tính với virus cúm H5N6 được phát hiện trên tất cả các đối tượng lấy mẫu nhưng với tỷ lệ khác nhau, cụ thể: tỷ lệ nhiễm cao nhất ở đối tượng vịt với 18/288 mẫu bệnh phẩm chiếm tỷ lệ 6,25% (95% CI: 3,75-9,70), tiếp đó là trên các mẫu môi trường với 8/288 mẫu dương tính chiếm tỷ lệ 2.78% (95% CI:1,21-5,40) và thấp nhất trên đối tượng gà với 6/288 mẫu bệnh phẩm dương tính chiếm tỷ tệ 2,08% (95% CI: 0,77-4,48).
Kết quả này của cao hơn so với kết quả của Phạm Thành Long (2016) 3,5% (95% CI: 2,85-4,15) đối với tỷ lệ chung của tổng các mẫu bệnh phẩm xét nghiệm và đối với các đối tượng lấy mẫu là gà, vịt với tỷ lệ lần lượt là 1,32% (95% CI: 0,72- 2,20); 5,32% (95% CI: 4,01-6,90). Riêng mẫu môi trường có tỷ lệ thấp hơn so với kết quả của Phạm Thành Long (2016) - 4,00% (95% CI: 2,80-5,20).
Tỷ lệ mẫu bệnh phẩm dương tính với virus cúm subtype N6 tại các tỉnh là khác nhau, cụ thể: 2,78 6,94 3,47 1,39 5,56 2,08 0 2 4 6 8 10 12 14 Gà Vịt Môi trường Lạng Sơn Quảng Ninh
Tại Lạng Sơn, trong tổng số 432 mẫu bệnh phẩm xét nghiệm có 19 mẫu dương tính với subtype N6 chiếm tỷ lệ 4,40% (95% CI: 2,67-6,78) trong đó cao nhất trên đối tượng vịt với 10 mẫu dương tính chiếm tỷ lệ 6,94%, trên mẫu môi trường tỷ lệ này là 3,47%, đối tượng gà là 2,78%
Tại Quảng Ninh, tỷ lệ nhiễm virus cúm subtype H5 thấp hơn với 13/432 mẫu xét nghiệm cho kết quả dương tính chiếm tỷ lệ 3,01% (95% CI: 1,61-5,09). Tỷ lệ mẫu dương tính với subtype N6 cao nhất cũng trên các mẫu bệnh phẩm của vịt với 8 mẫu dương tính (5,56%), tiếp đó đến các mẫu bệnh phẩm môi trường với 3 mẫu dương tính (2,08%) và thấp nhất trên các mẫu bệnh phẩm của gà với 2 mẫu dương tính chiếm tỷ lệ 1,39%.
Nguyên nhân tỷ lệ các mẫu bệnh phẩm dương tính với virus cúm subtype N6 tại 2 tỉnh cao nhất ở các mẫu bệnh phẩm của vịt, tiếp đó đến các mẫu bệnh phẩm môi trường và thấp nhất ở các mẫu bệnh phẩm của gà có thể lý giải cũng tương tự như đối với tỷ lệ dương tính của virus cúm subtype H5 có liên quan đến các yếu tố như đặc điểm chăn nuôi giữa 2 đối tượng gà và vịt cũng như công tác vệ sinh tiêu độc khử trùng chợ, phương tiện vận chuyển, nuôi nhốt gia cầm sau mỗi ngày chợ không đảm bảo.
Qua các kết quả xét nghiệm cho thấy: tỷ lệ lưu hành virus cúm A/H5N6 tại các tỉnh này cao hơn so với nghiên cứu của Phạm Thành Long (2016) có thể do một số nguyên nhân như:
Các địa phương này trong những năm qua đã xảy ra các ổ dịch cúm gia cầm H5N6, công tác tiêm phòng vaccine phòng bệnh chưa cao nên có khả năng virus vẫn còn lưu hành trên đàn gia cầm đặc biệt là thủy cầm tại đây.
Hoạt động buôn bán gia cầm đặc biệt là gia cầm nhập lậu qua biên giới được buôn bán tại chợ, các điểm tập kết, thu gom gia cầm đã tạo điều kiện cho virus cúm xâm nhập và lây lan cho đàn gia cầm tại địa phương.
Kết quả xét nghiệm trên 3 đối tượng lấy mẫu là gà, vịt và môi trường cho thấy: tỷ lệ dương tính với virus cúm A/H5N6 cao nhất được phát hiện trên các mẫu bệnh phẩm của vịt (6,25% (95% CI: 3,75-9,70)), tiếp đó đến các mẫu bệnh phẩm môi trường chiếm tỷ lệ 2,78% (95% CI: 1,21-5,40) và thấp nhất ở các mẫu bệnh phẩm của gà với tỷ lệ 2,08% (95% CI: 0,77-4,48). Do đó trong các chương trình giám sát tiếp theo có thể tập trung ưu tiên lựa chọn 2 đối tượng lấy mẫu là vịt và mẫu môi trường để tiến hành giám sát lưu hành virus.
Thông qua kết xét nghiệmcho thấy ngoài sự lưu hành virus cúm A/H5N6 (3,70%) thì sự lưu hành các subytype khác của virus cúm cũng rất cao cụ thể đối với virus cúm A là 39,0% và subtype H5 là 5,9%. Do đó cần phải có các nghiên cứu thêm để phát hiện thêm các subtype H và subtype N khác của virus cúm gia cầm tại các tỉnh này qua đó có cái nhìn tổng thể về lưu hành các chủng virus tại các tỉnh nghiên cứu.
4.2.5. Lưu hành virus cúm A/H5N6 qua các vòng lấy mẫu
Với mục đích phát hiện sự lưu hành của virus cúm gia cầm A/H5N6 qua các giai đoạn lấy mẫu qua đó dự đoán thời điểm dễ bùng phát dịch bệnh nhất tại 2 tỉnh Lạng Sơn và Quảng Ninh, các mẫu bệnh phẩm đã được thu thập qua các vòng lấy mẫuvà chia làm 2 giai đoạn: giai đoạn 1 từ tháng 8 đến tháng 10 năm 2016; giai đoạn 2 từ tháng 1 đến tháng 3 năm 2017. Kết quả thể hiện tại bảng 4.7 và hình 4.7
Bảng 4.7. Lưu hành virus cúm A/H5N6 qua các tháng lấy mẫu
Tháng Số mẫu XN Số mẫu + cúm A Tỷ lệ (%) Số mẫu + H5 Tỷ lệ (%) Số mẫu + N6 Tỷ lệ (%) 8 144 43 29,86 0 0 0 0 9 144 49 34,03 9 6,25 3 2,08 10 144 45 31,25 8 5,56 2 1,39 1 144 67 46,63 12 8,33 9 6,25 2 144 62 43,06 13 9,03 11 7,64 3 144 71 49,31 9 6,25 7 4,86 Tổng 864 337 39,0 51 5,90 32 3,70
Từ kết quả bảng trên ta thấy, trong tất cả các vòng lấy mẫu đều phát hiện có sự lưu hành virus cúm A. Tổng số mẫu dương tính với virus cúm A là 337 mẫu chiếm tỷ lệ 39,0% (95% CI: 35,74-42,35) trong đó cao nhất tại vòng 6 (tháng 3/2017) với 71/144 mẫu dương tính (49,31%), tiếp đó đến vòng 4 (tháng 1/2017) với 67/144 mẫu dương tính (46,63%), vòng 5 (tháng 2/2017) với 62/144 mẫu dương tính (43,05%) và thấp nhất tại vòng 1 (tháng 8/2016) với 43/144 mẫu dương tính chiếm tỷ lệ 29,86%.
Đã phát hiện 5/6 vòng lấy mẫu có lưu hành virus cúm subtype H5 (vòng 1 ở tháng 8/2016 không phát hiện có virus cúm subtype H5). Tổng số mẫu dương
tính với subtype H5 là 51 mẫu chiếm tỷ lệ 5,90% (95% CI: 4,43-7,69) trong đó cao nhất tại các vòng lấy mẫu ở giai đoạn 3 tháng đầu năm 2017 với 34/432 mẫu dương tính chiếm tỷ lệ 7.87%. Ở giai đoạn này, số mẫu dương tính với subtype H5 cao nhất vào vòng lấy mẫu 5 (tháng 02/2017 với 13/144 mẫu dương tính chiếm tỷ lệ 9,03%). Ở giai đoạn tháng 8 đến tháng 10 năm 2016 có 17/432 mẫu dương tính chiếm tỷ lệ 3,94% trong đó cao nhất là ở vòng lấy mẫu 2 (tháng 9/2016 với 9/432 mẫu dương tính chiếm tỷ lệ 2,08%).
Đã phát hiện 5/6 vòng lấy mẫu có lưu hành virus cúm subtype N6 (vòng 1 ở tháng 8/2016 không phát hiện có virus cúm subtype N6). Tổng số mẫu dương tính với subtype N6 là 32 mẫu chiếm tỷ lệ 3,7% (95% CI: 2,55-5,19) và cũng như với subtype H5, số mẫu dương tính với subtype N6 phát hiện cao nhất ở các vòng lấy mẫu thuộc giai đoạn 3 tháng đầu năm 2017 với 27/432 mẫu dương tính chiếm tỷ lệ 6,25%, trong đó cao nhất vẫn ở tháng 2/2017 với 11/144 mẫu dương tính (7,64%). Ở giai đoạn từ tháng 8 đến tháng 10 năm 2016, tỷ lệ này là 5/432 mẫu dương tính chiếm tỷ lệ 1,16 %. Tỷ lệ mẫu dương tính với subtype N6 ở tháng 9và tháng 10 lần lượt là 2,08% và 1,39%. Kết quả nghiên cứu này cũng phù hợp với diễn biến tình hình dịch bệnh hàng năm tại các địa phương này cũng như nghiên cứu của Bùi Quang Anh (2005). Theo đó dịch cúm gia cầm độc lực cao thường xảy ra vào các tháng cuối năm và các tháng đầu năm.
Hình 4.7. Biểu đồ Lưu hành virus cúm A/H5N6 qua các tháng lấy mẫu 29,86 34,03 31,25 46,63 43,06 49,31 0 6,25 5,56 8,33 9,03 6,25 0 2,08 1,39 6,25 7,64 4,86 0 10 20 30 40 50 60 T8- 2016 T9-2016 T10-2016 T1-2017 T2-2017 T3-2017 Tỷ lệ nhiễm cúm type A Tỷ lệ nhiễm cúm subtype H5 Tỷ lệ mắc nhiễm subtype N6 Tỷ lệ (%)
Kết quả này cũng phù hợp với kết luận của Nguyễn Huy Đăng (2014). Đây có thể coi là thời điểm nhạy cảm lưu hành virus cúm type A liên quan đến các yếu tố chính:Đây là thời điểm trước và sau Tết Nguyên Đán cổ truyền, là thời đểm có sự lưu thông gia cầm mạnh nhất trong năm và tất nhiên bao gồm cả sự lưu thông và buôn bán gia cầm có nguồn gốc ngoại tỉnh, gia cầm nhập lậu;giai đoạn này có thời tiết, khí hậu ẩm, mưa phùn... là điều kiện thuận lợi cho sự tồn tại và lưu hành của virus cúm gia cầm.
Từ những kết quả phân tích trên, có thể nói nguyên nhân chính dẫn đến sự lưu hành của virus cúm gia cầm A/H5N6 tại đây có thể là do tình trạng buôn lậu gia cầm ở vùng biên giới từ Trung Quốc sang Việt Nam ngày càng diễn biến phức tạp và khó kiểm soát. Gia cầm từ các tỉnh biên giới được vận chuyển về các địa phương và được buôn bán cùng với gia cầm nội địa. Công tác kiểm dịch, kiểm soát nguồn gốc gia cầm chưa được chặt chẽ. Cùng với việc vệ sinh tiêu độc khử trùng chợ, khu vực buôn bán giết mổ gia cầm sau mỗi ngày chợ không được duy trì thường xuyên một phần làm cho virus cúm A/H5N6 lưu hành các địa phương này. Bên cạnh đó các tỉnh này trong những năm qua đã xảy ra các ổ dịch cúm gia cầm H5N6, công tác tiêm phòng vacxin cúm cho đàn gia cầm đạt tỷ lệ không cao do đó có thể có sự lưu hành của virus ngay trên đàn gia cầm đặc biệt là trên thủy cẩm tại 2 tỉnh này.
4.2.6. Sự lưu hành virus cúm A/H5N6 tại các chợ lấy mẫu
Để đánh giá mức độ lưu hành của virus cúm A/H5N6 theo không gian, tiếp tục tiến hành nghiên cứu sự lưu hành của virus tại các chợ thực hiện lấy mẫu trên địa bàn các tỉnh nghiên cứu. Có 8 chợ buôn bán gia cầm sống được lựa chọn ở 2 tỉnh, trong đó Lạng Sơn (các chợ Đồng Đăng, Thất Khê, Hội Hoan và Na Dương) và Quảng Ninh (các chợ Minh Thành, Rừng, Địa Chất và Cái Răm). Kết quả được thể hiện qua bảng 4.8 và hình 4.8.
Qua tổng hợp kết quả xét nghiệm tại các chợ cho thấy: Tất cả các chợ lấy mẫu đều phát hiện lưu hành virus cúm type A chiếm tỷ lệ 100%; đối với virus cúm A/H5N6, trong 8 chợ tiến hành lấy mẫu giám sát có 07/08 chợ có mẫu bệnh phẩm dương tính với cúm A/H5N6 chiếm tỷ lệ 87.5% ngoại trừ Thất Khê, huyện