3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn
3.4.1. Sơ đồ quy trình bảo quýt bằng chế phấm nano bạc-Chi ở điều kiện lạnh 13oC
Qua các kết quả nghiên cứu đã cho thấy các mẫu quýt Hương Cần được bảo quản ở CT3 và CT4 cho kết quả tốt nhất. Xuất phát từ thực tế chúng tôi chọn nồng độ nano bạc 10ppm và chitosan 0,6% để đề xuất quy trình bảo quản quýt Hương Cần như sau:
Phối trộn Chitosan, 2% Khuấy từ 50 vòng/phút (30 phút) Dung dịch nano bạc, 50ppm Quýt Phân loại, làm sạch Chế phẩm nano bạc-Chi (0,6%) Nhúng lần 1 (trong 60 giây)
Để khô điều kiện thường (trong 60 phút)
Bảo quản lạnh 130C
Độ ẩm 80% - 95%
Để khô điều kiện thường (trong 60 phút)
Nhúng lần 2
(trong 60 giây) gia nhiệt
1. Chuẩn bị quả:
Quả quýt Hương Cần được lựa chọn, đạt độ chín kỹ thuật được tiến hành xử lý sơ
bộ theo tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 1873-2014: phân loại, cắt cuống, rửa và để ráo ở
nhiệt độ phòng.
2. Chuẩn bị chế phẩm nano bạc-Chi
Chuẩn bị 300 ml chế phẩm nano bac-Chi (10ppm, 0,6%) bằng cách hòa trộn dung
dịch nano bạc (60ml, 50ppm), chitosan (90ml, 2%) với nước cất (150ml tương ứng) rồi
tiến hành phối trộn bằng máy khuấy từ (50 vòng/phút) trong 30 phút, thu được hỗn hợp
dung dịch đồng nhất nano bạc (10 ppm)- chitosan (0,6%).
3. Xử lý quả quýt bằng chế phẩm nano bạc-Chi
Quả quýt sau khi đã lựa chọn, rửa sạch được nhúng lần thứ 1 trong chế phẩm
nano bạc-Chi (0,6%) rồi tiến hành để khô trong 60 phút ở điều kiện thường. Nhúng quả
lần 2 được tiến hành tương tự như trên. Quả sau khi để khô được cho vào thùng carton có
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
Kết luận
Qua những kết quả đạt được sau một thời gian triển khai đề tài nghiên cứu làm luận văn tốt nghiệp chúng tôi đưa ra một số kết luận như sau:
- Đã phân lập và định danh được nấm gây bệnh Macrophoma theicola.
- Đã khảo sát khả năng kháng nấm Macrophoma theicola bằng chế phẩm nano
bạc-Chi có hiệu lực ức chế từ 0,2% và ức chế hoàn toàn từ nồng độ 0,4%ở điều kiện in vitro và ở điều kiện in vivo hạn chế được sự phát triển gây bệnh của nấm này từ 57,8% đến 100%, tương ứng nồng độ chitosan 0,2% - 0,6%.
- Xác định được nồng độ thích hợp để bảo quản quýt Hương Cần sau thu hoạch ở điều kiện lạnh là chitosan 0,6% - 0,8% bổ sung vào dung dịch nano bạc 10 ppm. Chế
phẩm ở nồng độ này có hiệu quả bảo quản quả quýt ở 13°C đến 60 ngày với các chỉ tiêu theo dõi như là hàm lượng đường tổng số, acid hữu cơ tổng số, hàm lượng vitamin C, sự
hao hụt khối lượng, tỷ lệ hư hỏng đảm bảo.
- Đề xuất được quy trình bảo quýt Hương Cần bằng chế phấm nano bạc–Chi ở điều kiện lạnh 13oC, độ ẩm 80% đến 95%
Đề nghị
1. Cần nghiên cứu xác định độ chín thu hoạch của quýt.
2. Tiếp tục khẳng định tính khả thi quy trình bảo quản quýt đã đề xuất và triển
khai nghiên cứu ứng dụng bảo quản quýt Hương Cần ở quy mô Hợp tác xã.
3. Cần nghiên cứu ứng dụng chế phẩm tạo màng nano bạc-Chi trên nhóm quả có
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tài liệu tiếng Việt:
[1]. Võ Văn Quốc Bảo, Trương Ngọc Đăng (2018), Khả năng kháng nấm của chế
phẩm nano bạc-TBS đối với Macrophoma theicola gây hại trên quả quýt Hương
Cần (Citrus deliciosa T.), Tạp chí Khoa học tự nhiên, Đại học Huế, 127(1),
131-139.
[2]. Võ Văn Quốc Bảo, Trương Thị Minh Hạnh (2008), Nghiên cứu một số yếu tố ảnh hưởng đến khả năng chịu lực của màng bao gói thực phẩm được chế tạo từ tinh
bột sắn có bổ sung polyethylene glycol (PEG), Tạp chí Khoa học và Công nghệ,
Đà Nẵng 3(2), 49-57
[3]. Hoàng Bình (2005), “Nghiên cứu chế tạo thành công vật liệu siêu hấp thụ nước từ
tinh bột sắn”, Tạp chí khoa học, TP Hồ Chí Minh, 21 (3)
[4]. Quách Đĩnh, Nguyễn Văn Tiếp, Nguyễn Văn Thoa (2008), Bảo quản và chế biến rau quả, NXB Khoa học và Kỹ thuật.
[5]. Nguyễn Thị Hạnh (2009), Bảo quản cam và hồng bằng màng chitosan, Luận văn
thạc sỹ khoa học, ngành Công nghệ Thực phẩm, Đại học Bách khoa Hà Nội.
[6]. Nguyễn Thị Hiền, Từ Việt Phúc, Trần Thanh Đại (2010), Phân tích thực phẩm, NXB Lao động.
[7]. Nguyễn Thị Tuyết Mai, Nguyễn Thị Mỹ An và Nguyễn Bảo Vệ (2012), Ảnh hưởng của xử lý calci đến chất lượng và khả năng bảo quản trái quýt đường
(Citrus reticulata blanco) sau thu hoạch, Tạp chí Khoa học, Đọc học Cần Thơ,
23(a), 193-202
[8]. Phạm Quang Thu, Trần Thanh Trăng (2009), Phân lập và tuyển chọn vi khuẩn đối kháng với nấm gây bệnh vùng rễ cây thông, Viện Khoa học Lâm nghiệp
Việt Nam.
[9]. Nguyễn Thị Bích Thủy, Nguyễn Thị Thu Nga, Đỗ Thị Thu Thủy (2008), Ảnh hưởng của nồng độ chitosan đến chất lượng và thời gian bảo quản chanh. Tạp chí Khoa học và Phát triển, Đại học Nông nghiệp I Hà Nội, 4 (1), 70-75.
[10]. Thống kê Hải quan (2018), Tình hình xuất khẩu, nhập khẩu hàng hóa của Việt Nam tháng 12 và 12 tháng năm 2017, Hải quan Việt Nam
[11]. Hà Duyên Tư (2009), Phân tích hóa học thực phẩm, NXB Khoa học và Kỹ thuật
Hà Nội.
[12]. Phạm Thị Hà Vân, Nguyễn Thị Thúy Liễu, Lê Sĩ Ngọc, Nguyễn HoàngThảo Ly
(2017), Nghiên cứu ứng dụng màng chitosan - nano bạc trong bảo quản nhằm
nâng cao chất lượng thanh long sau thu hoạch, Tạp chí Khoa học tự nhiên và công nghệ, Đại học Sư phạm Hồ Chí Minh, 14(3), 47-56
[13]. Viện Hóa học (2014), Nghiên cứu chế tạo vật liệu dùng bảo quản rau quả tươi, Nghiên cứu khoa học, Viện hàn lâm khoa học và công nghệ Việt Nam.
[14]. Ủy ban Khoa học và Kỹ thuật Nhà nước (2014), Tiêu chuẩn quốc gia TCVN
1873:2014 về các loại quả có múi, Tiêu chuẩn TCVN/TC/F10 Rau quả và sản
phẩm rau quả
Tài liệu nước ngoài:
[15]. Ales Panacek, M. Kolar, R. Vecerova, R. Prucek, J. Soukupova, V. Krystof, P. Hamal, R. Zboril, L. Kvitek, (2009), Antifungal activity of silver nanoparticles against C and ida spp., Biomaterials, 30(31), 6333-6340
[16]. Chien Po-Jung Sheu, Fuu, Lin Hung-Ren (2005), Coating citrus (Murcott
tangor) fruit with low molecular weight chitosan increases postharvest quality
and shelf life, Food Chemistry, 100( 3), 1160-1164
[17]. Dai, L.; Qiu, C.; Xiong, L.; Sun, Q. Characterisation of corn starch-based films reinforced with taro starch nanoparticles, Food Chemistry, 2015, 174, 82–88. [18]. Hadar Arnon, Y. Zaitsev, R. Porat, E. Poverenov, (2014), Effects of
carboxymethyl cellulose and chitosan bilayer edible coating on postharvest quality of citrus fruit, Postharvest Biology and Technology, 87, 21-26
https://doi.org/10.1016/j.postharvbio.2013.08.007
[19]. Keuk-Jun Kim, Woo Sang Sung, Bo Kyoung Suh, Seok-Ki Moon, Jong-Soo Choi, Jong Guk Kim, Dong Gun Lee, (2008), Antifungal Effect of Silver Nanoparticles on Dermatophytes, Microbiology and Biotechnology. 18(8), 1482–1484
[20]. Keuk-Jun Kim, Woo Sang Sung, Bo Kyoung Suh, Seok-Ki Moon, Jong-Soo Choi, Jong Guk Kim, Dong Gun Lee, (2009), Antifungal activity and mode of action of silver nano-particles on Candida albicans, BioMetals, 22(2), 235–242
[22]. Kim D., , Jeong S, Moon J. (2006), Synthesis of silver nanoparticles using the polyol process and the influence of precursor injection, Nanotechnology 17(16), 4019-4014. doi: 10.1088/0957-4484/17/16/004
[23]. Le Dai Vuong, N. D. T. Luan, D. D. H. Ngoc, P. T. Anh and V. V. Q. Bao (2016), Green Synthesis of Silver Nanoparticles from Fresh Leaf Extract of Centella asiatica and Their Applications, International Journal of Nanoscience, 15(3)
1650018.
[24]. Mafune, F.; Kohno, J.-Y.; Takeda, Y.; Kondow, T.; Sawabe, H. (2000), Structure and Stability of Silver Nanoparticles in Aqueous Solution Produced by Laser Ablation, The journal of Physical Chemistry 104 (35), 8333-8337. [25]. Mareesw wran J, Nepolean P, Jayanthi R, Premkumar samuel asir R and
radhakrishnan B (2015), In vitro Studies on Branch Canker Pathogen
(Macrophoma sp.) Infecting Tea, Plant Pathology & Microbiology.6:284.
doi:10.4172/2157-7471.1000284
[26]. Nasrollahi A., Pourshamsian Kh, Mansourkiaee P., (2011), Antifungal activity of silver nanoparticles on some of fungi, International Journal of Nano
Dimension, 1(3), 233-239
[27]. Rabab M. Elamawi, Raida E. Al-Harbi, and Awatif A. Hendi, (2018), Biosynthesis and characterization of silver nanoparticles using Trichoderma longibrachiatum and their effect on phytopathogenic fungi, Agriculture and Agricultural Science Procedia,28(1) 296-303
[28]. Ravikumar M. N. V., Dutta P. K. & Nakamura S. (2000), Chitosan-amine oxide: a new gelling system, characterization and in vitro evaluations, Indian
Journal of pharmaceutical Science, 62 55-58.
[29]. Sang Woo Kim, J. H. Jung, K. Lamsal, Y. S. Kim, J. S. Min, Y. S. Lee (2018), Antifungal Effects of Silver Nanoparticles (AgNPs) against Various Plant Pathogenic Fungi, Mycobiology, 42(1), 53-58
[30]. Taniguchi, N. (1974). On the basic concept of nanotechnology. Proceedings of the international conference on Production Engineering, Japan society of
precision Engineering. 18-23
[31]. Vo Van Quoc Bao, L. D. Vuong and L. V. Luan (2018), Biomimetic Synthesis of Sliver Nanoparticles for Preparing Preservative Solutions for Mandarins (Citrus
[32]. Young-Ki Jo, Byung H. Kim, Geunhwa Jung, (2009), Antifungal Activity of Silver Ions and Nanoparticles on Phytopathogenic Fungi, APS journals, 93(10), 1037-1043, https://doi.org/10.1094/PDIS-93-10-1037 Trang Web [33]. https://giongcayanqua.edu.vn/cach-benh-hai-cam-quyt-va-cach- phong-tranh-tot-nhat.html; cập nhật ngày 10/1/2018. [34]. https://nanobacdietkhuan.com/2016/10/co-che-diet-khuan-nano-bac-va-un g-dung-cua-nano-bac-trong-nong-nghiep.html; cập nhật ngày 16/1/2018. [35]. https://ahtc.com.vn/ưng-dung-nanobac-trong-mot-so-linh-vuc-khac/; cập nhật ngày 16/1/2018. [36]. https://www.2lua.vn/article/cay-quyt-cong-dung-va-ki-thuat-trong-2466.html; cập nhật ngày 11/1/2018. [37]. https://www.academia.edu/31479301/Chitosan; cập nhật ngày 17/1/2018. [38].Ghttp://langhuongcan.blogspot.com/2013/01/nang-len-cho-quyt-ngot-huong-can. html; cập nhật ngày 10/1/2018. [39].Fhttp://vov.vn/kinh-te/bao-quan-nong-san-sau-thu-hoach-dang-la-bai-toan-kho-40 8149.vov; cập nhật ngày 20/1/2018 [40]. https://nghenong.vn/chiet/ky-thuat-chiet-cay-quyt-trong-215.html; cập nhật ngày 20/1/2018. [41]. https://caygiong.com/products/quyt-duong; cập nhật ngày 21/1/2018. [42]. https://baonghean.vn/nghe-an-quyt-ngot-pq-tai-vuon-duoi-10000-dong-k g-181879.html; cập nhật ngày 12/1/2018. [43]. https://www.zbook.vn/ebook/nghien-cuu-dieu-che-dung-dich-ag-nan o-mat-do-cao-va-khao-sat-kha-nang-diet-khuan-cua-chung-32225/; cập nhật ngày 21/1/2018. [44]. https://en.wikipedia.org/wiki/Macrophoma_theicola; cập nhật ngày 12/1/2018 [45]. https://www.nanobacsuper.com/nano-bac-va-ung-dung-cua-nano-bac-trong-nong -nghiep; cập nhật ngày 16/1/2018 [45].Rhttps://www.nanobacsuper.com/nano-bac-va-ung-dung-cua-nano-bac-trong- nong-nghiep; cập nhật ngày 19/1/2018.
PHỤ LỤC
Phụ lục 1. Pha môi trường, hóa chất và dụng cụ nghiên cứu
Phụ lục 2. Phương pháp bố trí thí nghiệm
Phụ lục 3. Phương pháp tiến hành phân tích các chỉ tiêu về sinh lý, hóa sinh Phụ lục 4. Mẫu phiếu đánh giá cảm quan
Phụ lục 5. Bảng số liệu xử lý thống kê trong quá trình nghiên cứu
Phụ lục 6. Kết quả xử lý thống kê ANOVA
PHỤ LỤC 1
PHA MÔI TRƯỜNG, HÓA CHẤT VÀ DỤNG CỤ NGHIÊN CỨU
a. Môi trường phân lập: Môi trường PDA là môi trường giàu cacbon hydrate chứa:
D – glucose: 20g Agar: 20g Khoai tây: 200g Nước: 1 lít
Khoai tây bao vỏ, rửa sạch, thái nhỏ nấu khoảng 1 giờ, lọc lấy dịch trong. Cho lượng agar, nước và đường khuấy đều và định mức đủ 1 lít nước. sau đó đem đi hấp tiệt
trùng ở 1210C, 1atm trong vòng 15 phút.
- Các dụng cụ, giấy báo, bao nilong cần thiết trong quá trình phân lập được rửa
sạch, sấy khô, bao gói bằng giấy báo, nilong và đem đi tiệt trùng.
Mục đích tiệt trùng nhằm tiêu diệt toàn bộ vi sinh vật ngoại lai hiện diện trong môi trường, tạo điều kiện vô trùng cho môi trường để kết quả phân lập, nuôi cấy chính xác.
Nguyên tắc tiệt trùng: không làm biến tính môi trường, không làm bến tính một
số chất trong môi trường. Sau khi khử trùng không sinh sản ra các chất độc gây chết vi
sinh vật nuôi cấy, phải đảm bảo điều kiện vô trùng tuyệt đối sau khi khử trùng.
Khi phân lập cho các dụng cụ cần thiết đã tiệt trùng như: đĩa petri, môi trường,
dao cắt thạch, giấy báo, nilong … vào tủ cấy để khử trùng bằng tia UV. Các dụng cụ như: đèn cồn, bật lửa … có thể khử trùng bằng cồn.
b. Phân lập nấm [3]
Nấm sau khi được nuôi trong môi trường ẩm thì được tách sợi mà nuôi trong môi
trường PDA để nấm phát triển. Quá trình tách sợi nuôi cấy trong môi trường PDA được
thực hiện vô trùng trong tủ cấy.
- Cách dụng cụ sau khi khử trùng bằng tia UV thì ta bắtđầu khử trùng bàn tay,
cánh tay, đèn cồn và bật lửa cho vào tủ cấy để bắt đầu tiến hành tách nấm.
- Để tiến hành cấy ban đầu ta phải thắp đèn cồn lên. Rồi mới mở giấy báo, đĩa, môi trường ra.
- Đĩa được hơ trên đèn cồn sau đó đổ môi trường PDA vào đĩa và ta chỉ đổ 1/3 đĩa.
Nếu nhiều quá tốn môi trường, và không quan sát được sự phát triển của nấm, nếu ít quá
thì không đủ môi trường cho nấm phát triển. Sau đó, để cho môi trường PDA đông lại.
- Tiếp theo, nấm ở ngoài được khử trùng và đem vào tủ cấy. Ta dùng que cấy tách
ta cho đĩa vào bao bì đã hấp và đưa đĩa và tất cả dụng cụ ra khỏi tủ cấy và tiến hành về
sinh tủ.
- Sau 2 ngày nấm phát triển ta dùng dao cắt từng miếng thạch kích thước dài và rộng 2 mm và cấy vào đĩa PDA cho đến khi trên đĩa chỉ còn một mẫu nấm thuần. Quá
trình phân lập thực hiện trong tủ cấy giống trên để quá trình phân lập có kết quả chính
xác nhất.
a)Hóa chất
- Chitosan tiến hành khảo sát ở các nồng độ từ 0,2 đến 0,8%.
- Dung dịch nano bạc: Được kế thừa quy trình công nghệ chế tạo dung dịch nano bạc
từ nhóm nghiên cứu của TS. Võ Văn Quốc Bảo và TS. Lê Đại Vương [23], [31]. Dung dịch
nano bạc này có chứa các hợp chất chứa fitonxit, đặc biệt có hoạt chất asiaticosid tác dụng đến sự phân chia tế bào làm lành nhanh vết thương ngoài da, tác dụng chống loét dạ dày, kháng virus, kháng nấm. Nồng độ nano bạc thích hợp là 10 ppm.
b)Dụng cụ
Kho lạnh, tủ lạnh, tủ sấy, bếp điện,thiết bị lọc hút chân không, cân phân tích,bình tam giác, bình định mức, ống đong, cối sứ, buret, pipet,…
Bảng 1.1. Danh mục các hóa chất sử dụng trong nghiên cứu
STT Hóa chất STT Hóa chất 1 Nước cất 9 Iod 0,01 N 2 Felling A 10 HCl 5% 3 Felling B 11 Chì acetate 30% 4 Fe2(SO4)3 12 Phenolphtalein 0,1% 5 H2SO4 đ (d = 1,84) 13 H2SO4 180g/l 6 KMnO4 0,1 N 14 NaOH 1 N; 0,1 N 7 Na2SO4 8 Hồ tinh bột 5g/l
Bảng 1.2. Danh mục các dụng cụ sử dụng trong nghiên cứu
STT Dụng cụ STT Dụng cụ
1 Bình định mức 100ml, 500ml 6 Máy xay
2 Bình tam giác 100ml, 250ml 7 Cốc sấy
3 Cốc đong 25ml, 100ml, 250ml 8 Phễu thủy tinh
4 Pipet 9 Đũa thủy tinh
5 Buret 10 Giấy lọc
Bảng 1.3. Các loại thiết bị sử dụng trong nghiên cứu
STT Tên thiết bị Hiệu Nước sản xuất
1 Cân kỹ thuật SARTORIUS Đức
2 Hệ thống kho lạnh bảo quản mẫu Kho lạnh Việt Nam
3 Tủ sấy UNB – 500 Đức
4 Bể ổn định nhiệt LWB-106D Hàn Quốc
5 Phễu BUCNE
6 Thiết bị đo nồng độ khí CO2 ICA 15 Nhật Bản
PHỤ LỤC 2
PHƯƠNG PHÁP BỐ TRÍ THÍ NGHIỆM
Nguyên liệu: nano bạc (50 ppm), chitosan (2%), acid acetic 1%, nước cất và các dụng cụ cần thiết.
- Pha dung dịch chitosan 2%: Cho 20g bột chitosan trong 1lít dung dịch acid
acetic 1%. Thời gian khuấy: 24h.
- Hòa trộn dung dịch chitosan đã pha với nano bạc sau đó khuấy bằng máy khuấy
từ, đến khi chế phẩm này đồng nhất. Thời gian khuấy từ 30 phút để nguyên liệu hòa lẫn, đồng nhất mà không bị phân lớp. Khi chế phẩm được đồng nhất thì ta tiến hành xử lý,
rửa cắt bỏ cuống quả còn 2 - 3mm sau đó để ráo. Sau khi chuẩn bị xong chế phẩm nano
bạc - Chi, ta cho quýt nguyên liệu nhúng qua chế phẩm này, thời gian nhúng là 1 phút
sau đó để khô ráo hoặc có thể sử dụng quạt để thông thoáng khí làm lớp màng nhanh khô
hơn. Sau khi chế phẩm khô ta cho quýt vào thùng carton có đục lỗ và đệm mút lót bảo
quản ở nhiệt độ lạnh 13oC. Chitosan Nano bạc Phối trộn, khuấy từ CT3 ĐC CT1 CT2 Phân loại, làm sạch Quýt Vào thùng CT4 Bảo quản 130C Chế phẩm nano bạc-Chi (0,2%; 0,4%;0,6%; 0,8%) Nhúng lần 1, lần 2 Để ráo 1 giờ
Trong đó:
ĐC: mẫu không xử lý chế phẩm dung dịch nano bạc - chitosan
CT1: mẫu được xử lý với nồng độ nano bạc 10 ppm và nồng độ chitosan 0,2%.
CT2: mẫu được xử lý với nồng độ nano bạc 10 ppm và nồng độ chitosan 0,4%.
CT3: mẫu được xử lý với nồng độ nano bạc 10 ppm và nồng độ chitosan 0,6%.
CT4: mẫu được xử lý với nồng độ nano bạc 10 ppm và nồng độ chitosan 0,8%.