3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn
2.2.2. Khảo sát khả năng kháng nấm của chế phẩm nano bạc-Chi với nấm được phân lập
phân lập trên quả quýt Hương Cần
2.2.2.1. Khảo sát ởđiều kiện in vitro
Để kiểm tra khả năng kháng nấm của chế phẩm nano bạc bổ sung chitosan, chúng
tôi thực hiện thí nghiệm trên chủng nấm gây bệnh được phân lập từ quả quýt Hương
Cần. Kết quả thu nhận dựa vào khả năng phát triển của nấm trên môi trường PDA với
nồng độ nano bạc 10 ppm và bổ sung chitosan ở các nồng độ 0%; 0,2%; 0,4%; 0,6% và 0,8%. Cắt một mảnh nấm thuần Macrophoma theicola có kích thước 2 × 2 mm từ rìa của
Quả quýt
Phát hiện nấm
Thu sợi nấm
Nuôi cấy trong môi trường PDA
Phân lập trong môi trường PDA
Nấm thuần
tản nấm sau 3 ngày nuôi cấy ở 28°C đặt vào tâm các đĩa petri (Ф 9cm). Mỗi nồng độ
khảo sát được lặp lại 3 lần. Sử dụng thước kẹp điện tử để đo đường kính tản nấm (ĐKTN) mỗi ngày một lần. Tính kháng nấm của chế phẩm được thể hiện bằng sự ức chế
hoặc tiêu diệt khả năng sinh trưởng và phát triển của vi sinh vật [15].Sơ đồ khảo sát tính
kháng nấmở điều kiện in vitro được trình bày ở Hình 2.2.
Hình 2.2. Sơ đồ khảo sát tính kháng nấm ởđiều kiện in vitro
2.2.2.2. Khảo sát ởđiều kiện in vivo
Quá trình thí nghiệm tiến hành tương tự như khảo sát khả năng kháng nấm được
phân lập theo điều kiện in vitro.
Quả quýt sau khi rửa sạch, được tạo 3 vết thương nhân tạo ở 3 vị trí khác nhau
trên quả quýt và gây bệnh bằng cách cho mỗi vết thương 10µl huyền phù nấm
Macrophoma theicola, nồng độ 106 tế bào/ml. Sau 2 giờ để khô ở điều kiện thường, nhúng 2 lần cách nhau 1 giờ chế phẩm nano bạc-Chi có nồng độ khác nhau (0%- mẫu đối chứng xử lý bằng nước cất; 0,2%; 0,4%; 0,6% và 0,8%) rồi tiến hành theo dõi tỷ lệ
nhiễm bệnh trong 10 ngày và xác định tỷ lệ nhiễm bệnh trên các quả gây nhiễm bệnh
nhân tạo. Mỗi nồng độ khảo sát được lặp lại 3 lần. Tỷ lệ nhiễm bệnh (TLN) của quả quýt được xác định như sau: TLN (%) = (Tổng số vết thương phát triển nấm bệnh/Tổng số vết thương nhân tạo của mỗi công thức) × 100. (Ghi chú: Tổng số vết thương nhân tạo của
mỗi công thức = số vết thương nhân tạo/quả × số quả/mẫu = 3 × 5 =15) [15], [26]. Gia nhiệt Đổ đĩa Cấy nấm Nấm thuần Nuôi nấm Khảo sát tính kháng khuẩn Môi trường PDA Dung dịch nano bạc-Chi Khảo sát nồng độ (0% - 8%)
Hình 2.3. Sơ đồ khảo sát tính kháng nấm ởđiều kiện in vivo
Khảo sát tính kháng nấm
Bảo quản ở điều kiện thường trong 10 ngày
Để khô trong 1 giờ
Quýt sau thu hoạch
Rửa sạch Cấy nấm Huyền phù nấm Macrophoma theicola Nhúng chế phẩm nano bạc-Chi lần 1 (0% - 0,8%) trong 60 giây
Để khô ở điều kiện thường (2 giờ) Nhúng chế phẩm nano bạc-Chi lần 2 (0% - 0,8%) trong 60 giây Để khô trong 1 giờ Tạo vết thương