Phần 3 Nội dung và phƣơng pháp nghiên cứu
3.4. Trang thiết bị, dụng cụ và vật liệu nghiên cứu
3.4.1. Trang thiết bị và dụng cụ nghiên cứu
- Các loại máy móc, thiết bị: Máy phân tích huyết học Abbott Cell-Dyn 3700; máy quang phổ hấp phụ; máy xét nghiệm ELISA, máy RT-PCR; khúc xạ kế Zena; glucometer; máy cắt mảnh Microtom, kính hiển vi quang học, máy li tâm, máy điện di.
- Dụng cụ: Tủ âm, khn đúc, trang thiết bị phịng thí nghiệm (dao, kéo, panh...).
3.4.2. Vật liệu nghiên cứu
- Mẫu bệnh phẩm (phân, ruột): Lấy khoảng 5g từ những lợn có triệu chứng của PED và dương tính với Test kit PED Ag, cho vào trong túi nylon vô trùng, bảo quản (40C) và vận chuyển ngay về phịng thí nghiệm trong vịng 24 giờ để sử dụng phương pháp RT-PCR chẩn đoán xác định lợn mắc bệnh.
- Lợn khoẻ mạnh và lợn mắc PED là lợn lai 3 máu ở tuần tuổi thứ 2 (là con của các lợn nái đã được tiêm phòng các loại vacxin phòng bệnh như Dịch tả
38
lợn cổ điển, PRRS, PCV2, Tụ - Dấu, Phó thương hàn. Có kết quả RT-PCR âm tính với Dịch tả lợn cổ điển, PRRS và kết quả PCR âm tính với PCV2) để khám lâm sàng, xác định các chỉ tiêu lâm sàng và lấy mẫu máu để xác định các chỉ tiêu huyết học và điều trị thử nghiệm.
- Xác chết của lợn mắc PED ở tuần tuổi thứ 2 (dương tính với virus PED bằng phương pháp Test kit PED Ag và RT-PCR) để mổ khám bệnh tích đại thể và làm tiêu bản bệnh tích vi thể.
- Ruột lợn dưới 1 tuần tuổi mắc PED để làm chế phẩm ―Gut feedback‖ trong phòng bệnh.
- Lợn nái khoẻ mạnh mang thai tuần thứ 13 để thử nghiệm phương pháp phòng bệnh ―Gut feedback‖.
- Máu của lợn nái sau khi dùng thử nghiệm phương pháp phịng bệnh ―Gut feedback‖ có biểu hiện tiêu chảy ngày thứ 14 và 21 để xác định kháng thể trong huyết thanh.
- Bộ Test kit PED Ag (Công ty Zoetis) phát hiện được sự hiện diện của virus PED có trong phân lợn (Hình 3.1).
Hình 3.1. Test kit PED Ag
3.4.3. Hóa chất
- Kit tách chiết QIAamp Viral RNA Minikit (Qiagen), Primers; - Hóa chất: Formol 10%, cồn ở các nồng độ, xylen, paraffin...