Các bước tiến hành xác định kháng thể bằng test ELISA

Phần 5 Kết luận và kiến nghị

3.5. Các bước tiến hành xác định kháng thể bằng test ELISA

49

3.6.9. Điều trị thử nghiệm lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED)

Tiến hành xây dựng hai phác đồ điều trị trên đàn lợn mắc PED ở 2 tuần tuổi, mỗi phác đồ điều trị 50 con. Cụ thể như sau:

Phác đồ Thuốc Liều lƣợng Đƣờng đƣa thuốc Phác đồ 1 - Colistin sulfat - Atropin sulfat - Lactat Ringer - Glucose 5% 100.000UI/kgTT/lần (ngày 2 lần) 0,1mg/kgTT/ngày 20ml/con/lần (buổi sáng) 20ml/con/lần (buổi chiều)

Uống Tiêm bắp Tiêm phúc mạc Tiêm phúc mạc Phác đồ 2 - Colistin sulfat - Atropin sulfat - Lactat Ringer - Glucose 5% - Máu lợn 100.000UI/kgTT/lần (ngày 2 lần) 0,1mg/kgTT/ngày 20ml/con/lần (buổi sáng) 20ml/con/lần (buổi chiều) 2ml/con/lần/2ngày Uống Tiêm bắp Tiêm phúc mạc Tiêm phúc mạc Tiêm bắp

Máu lợn được lấy trực tiếp 2ml từ những lợn sử dụng trong phác đồ 2 + 0,2ml Citrat natri để chống đông.

Kết quả điều trị được theo dõi thông qua các chỉ tiêu:

Tỷ lệ khỏi bệnh (%) = Số con khỏi bệnh 100 Tổng số con điều trị Tỷ lệ chết (%) = Số con chết 100 Tổng số con điều trị Tỷ lệ tái phát (%) = Số con tái phát 100 Tổng số con điều trị khỏi

Thời gian điều trị trung bình/ca (ngày) =

Tổng số ngày điều trị Tổng số con điều trị

Lượng thuốc điều trị =

Tổng lượng thuốc sử dụng Tổng số con điều trị

50

3.6.10. Phƣơng pháp xử lý số liệu

- Dung lượng mẫu khảo sát được xác định theo Thrusfield (1997):

n =

1,962 x Pexp (1- Pexp) d2

Trong đó: Chọn độ tin cậy 95% và độ chính xác tuyệt đối mong muốn d = 0,05. - Số liệu thơ được xử lý và tính tốn trên Excel, số liệu tổng hợp được xử lý bằng chương trình thống kê T.Test (so sánh 2 giá trị trung bình) và Chitest (so sánh 2 tỷ lệ phần trăm). Phép thử chi bình phương (χ2: Chi-square) được sử dụng để phân tích cho trường hợp dung mẫu lớn (với giá trị mong đợi theo lý thuyết lớn hơn 5). Vào menu Analyze - Descriptive Statistics – Crosstabs - đưa hai biến vào hai ô tương ứng. Sau đó nhấn vào nút Statistics, chọn Chi-square để thực hiện kiểm định. Kết quả, nếu giá trị Chi-square (ở bậc tự do df là 2) sig. > 5% thì hai biến này độc lập với nhau.

51

PHẦN 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

4.1. TÌNH HÌNH DỊCH TIÊU CHẢY CẤP Ở LỢN (PED) TẠI THANH HỐ 4.1.1. Tình hình chăn ni lợn tại Thanh Hoá giai đoạn từ năm 2016 đến 4.1.1. Tình hình chăn ni lợn tại Thanh Hoá giai đoạn từ năm 2016 đến 2019

Để khái qt về tình hình chăn ni lợn trên địa bàn tỉnh Thanh Hố trong các năm gần đây, chúng tơi đã tổng hợp số liệu của Cục thống kê tỉnh Thanh Hoá từ năm 2016, 2017, 2018 và 2019. Kết quả được trình bày ở bảng 4.1.

Bảng 4.1. Tình hình chăn ni lợn tại Thanh Hoá giai đoạn 2016 - 2019 Năm Tổng đàn Nông hộ Tỷ lệ % Gia trại Tỷ lệ % Trang trại Tỷ lệ % 2016 945.300 652.919 69,07 124.401 13,16 167.980 17,77 2017 785.120 500.750 63,78 132.685 16,90 151.764 19,33 2018 813.789 520.255 63,93 113.524 13,95 180.010 22,12 2019 795.071 490.479 61,69 111.866 14,07 192.725 24,24

Nguồn: Cục Thống kê Thanh Hoá (2019)

Qua bảng số liệu 4.1 cho thấy tình hình chăn ni lợn ở Thanh Hố năm 2017 giảm so với năm 2016 là 160.180 con (16,94%). Theo báo cáo của Cục Quản lý giá thuộc Bộ Tài chính (2017), so với cùng kỳ năm 2016, giá thịt lợn hơi ở các tỉnh miền Bắc thấp hơn 48 – 52% (giá lợn ở mức 20.000 - 25.000đ/kg), trong khi giá thức ăn chăn nuôi công nghiệp vẫn giữ ở mức cao (12.000- 13.000đ/kg), giá trị thu được không đủ chi phí bù đắp cho đầu tư nên người chăn ni đã giảm đàn. Tuy nhiên, đến tháng 12/2017 giá lợn ổn định dần, giá thịt lợn hơi miền Bắc phổ biến trong khoảng 29.000 – 33.000 đồng/kg, miền Nam là 27.000 – 33.000 đồng/kg và sang năm 2018, giá lợn dao động từ 32.000đ/kg đến 52.000đ/kg nên người nuôi đã tái đàn trở lại nên số lợn của tỉnh Thanh Hoá đã tăng lên so với năm 2017 khoảng 3,65%.

Những tháng đầu năm 2019, giá lợn hơi ổn định ở mức cao nên người chăn nuôi đã tiếp tục tái đàn. Tuy nhiên, đến ngày 24/02/2019 bệnh Dịch tả lợn Châu Phi đã xuất hiện tại Thanh Hoá đã làm cho tổng đàn lợn của tỉnh năm 2019 giảm 18.718 con (2,30%) so với năm 2018, mặc dù giá lợn hơi ở mức cao, dao động từ 45.000đ/kg đến 85.000đ/kg (Bộ Nông nghiệp & PTNT, 2019).

52

Hình 4.1. Thực trạng các phương thức chăn ni lợn ở Thanh Hoá

Nguồn: Cục Thống kê Thanh Hoá (2020)

Tuy nhiên, Hình 4.1 lại cho thấy thực trạng phương thức chăn ni lợn ở Thanh Hố đang đi đúng xu thế của ngành chăn ni nói chung và các chủ trương, Nghị quyết của tỉnh Thanh Hố nói riêng đó là tỷ lệ phương thức chăn nuôi tập trung (gia trại và trang trại) tăng dần và ngược lại phương thức chăn nuôi nhỏ lẻ (nơng hộ) có xu hướng giảm dần. Theo Quyết định số 4833/2014/QĐ-UBND về việc phê duyệt Quy hoạch tổng thể phát triển Nơng nghiệp tỉnh Thanh Hố đến năm 2020 và định hướng đến năm 2030. Trong đó, giai đoạn 2015 - 2020 đầu tư phát triển trang trại chăn nuôi lợn ngoại quy mô lớn, chăn ni khép kín tại các huyện miền núi và trung du với tổng quy mô 40.000 - 50.000 lợn ngoại, tăng tỷ lệ chăn nuôi theo hướng công nghiệp và giảm tỷ lệ chăn ni nhỏ lẻ.

4.1.2. Tình hình mắc PED trên đàn lợn tại 6 huyện của tỉnh Thanh Hố

Để đánh giá tình hình mắc PED, đàn lợn được theo dõi theo các tiêu chí: vùng địa lý, độ tuổi, quy mô đàn và mùa vụ. Lợn ở các trại được theo dõi trực tiếp và điền thông tin vào phiếu theo dõi khi nghi mắc PED, tiến hành chọn mỗi đàn 1-2 lợn có biểu hiện lâm sàng điển hình (tiêu chảy phân vàng xám, gầy sút

53

nhanh, giảm ăn (bú), nằm dồn đống hoặc nằm trên bụng mẹ), sau đó tiến hành chẩn đoán nhanh bằng Test kit PED Ag và RT-PCR để xác định chính xác bệnh. Những lợn cịn lại ở trong đàn nếu có những biểu hiện tương tự lợn có kết quả Test kit PED Ag và RT-PCR dương tính cũng được xác định là mắc PED.

Kết quả theo dõi tình hình dịch PED trên đàn lợn ở một số gia trại và trang trại chăn nuôi tại 6 huyện của Thanh Hố được thể hiện qua hình 4.2.

Ghi chú: Các chữ cái a,b,c,d,e biểu hiện sự sai khác có ý nghĩa giữa các giá trị so sánh trong cùng 1 chỉ tiêu (P<0,05)

Hình 4.2. Thực trạng mắc PED trên lợn ni tại các huyện của tỉnh Thanh Hố

Tỷ lệ mắc bệnh, tỷ lệ chết và tỷ lệ tử vong ở lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) của 6 huyện thuộc tỉnh Thanh Hố khá cao, trung bình tỷ lệ mắc bệnh khoảng 14,56%, tỷ lệ chết là 7,77% và tỷ lệ tử vong là 53,38% (bảng 4.2). Trong đó lợn ni tại huyện Tĩnh Gia có tỷ lệ mắc bệnh (16,12%), tỷ lệ chết (9,12%) và tỷ lệ tử vong (56,57%) là cao nhất và huyện Yên Định có tỷ lệ mắc bệnh (12,08%) và tỷ lệ chết (6,67%) thấp nhất so với các huyện (P<0,05).

Nguyên nhân dẫn đến có sự khác nhau giữa các huyện trong tỉnh là do có sự khác biệt về đặc điểm địa lý và trình độ kỹ thuật chăn ni. Tĩnh Gia là huyện vùng ven biển, chịu tác động của khí hậu vùng biển. Như Thanh và Thạch Thành

54

là những huyện thuộc khu vực miền núi, các chủ trại đa số là người địa phương khả năng tiếp cận với tiến bộ khoa học kỹ thuật còn hạn chế. Phạm Khắc Hiếu & cs. (1998) cho rằng các yếu tố khí hậu, thời tiết khơng thuận lợi là yếu tố tác động rất mạnh đến quá trình loạn khuẩn ở lợn và là nguyên nhân gây ra hội chứng tiêu chảy. Theo Hoàng Văn Tuấn & cs. (1998), tỷ lệ mắc tiêu chảy trong một số cơ sở chăn nuôi lợn phụ thuộc vào điều kiện chăm sóc, vệ sinh thú y.

Mai Thi Ngan (2020), khi nghiên cứu tình hình dịch tiêu chảy cấp (PED) tại các tỉnh phía Bắc Việt Nam trong giai đoạn từ tháng 1 năm 2018 đến tháng 2 năm 2019 thì ở các vùng địa lý khác nhau cho kết quả mắc bệnh khác nhau. Ở khu vực Đông Bắc tỷ lệ nhiễm là 36,5%; khu vực Tây Bắc tỷ lệ nhiễm là 27,3%; Đồng bằng Sông Hồng tỷ lệ nhiễm là 33,6% và khu vực Duyên hải Bắc Trung bộ có tỷ lệ nhiễm là 11,4%.

4.1.3. Tình hình dịch tiêu chảy cấp theo đối tƣợng lợn ni tại Thanh Hố

Để đánh giá khả năng kháng bệnh cũng như mức độ gây thiệt hại cho đàn lợn khi mắc dịch tiêu chảy cấp, chúng tôi đã tiến hành phân đối tượng lợn thành năm nhóm khác nhau, kết quả theo dõi được trình bày tại bảng 4.2.

Qua bảng 4.2 cho thấy, 100% đối tượng lợn đều bị mắc bệnh, tuy nhiên tỷ lệ mắc bệnh ở các nhóm đối tượng là khác nhau. Tỷ lệ mắc bệnh cao nhất là ở lợn con theo mẹ với tỷ lệ mắc bệnh là 22,01%, tiếp đến là lợn sau cai sữa với tỷ lệ mắc bệnh là 12,04% và thấp nhất là lợn đực giống (p<0,05). Ba nhóm đối tượng lợn là lợn thịt, lợn nái và lợn đực giống có tỷ lệ mắc bệnh tương đương nhau và khơng có sự khác biệt về mặt thống kê học (p>0,05).

Về tỷ lệ chết và tỷ lệ tử vong do mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) trên đàn lợn chỉ xảy ra đối với hai nhóm đối tượng đó là nhóm lợn con theo mẹ với tỷ lệ chết là 15,99% và tỷ lệ tử vong là 72,63%. Nhóm lợn sau cai sữa với tỷ lệ chết là 3,20% và tỷ lệ tử vong là 26,59%. Khi nghiên cứu về PED ở 6 tỉnh phía Bắc, lợn ở tất cả các lứa tuổi đều mắc bệnh, tỷ lệ tử vong ở lợn con theo mẹ là 68,60% và có sự khác biệt lớn về mức độ mắc bệnh giữa các nhóm tuổi (Nguyễn Văn Điệp & cs., 2014). Cũng nghiên cứu về vấn đề này, Đoàn Anh Tuấn (2012) cho biết: Nếu lợn con mắc bệnh ở độ tuổi 0 – 5 ngày tuổi: tỷ lệ tử vong 100%, nếu lợn con mắc bệnh ở độ tuổi 6 – 7 ngày tuổi tỷ lệ tử vong khoảng 50% còn nếu lợn con mắc bệnh ở độ tuổi lớn hơn 7 ngày tuổi tỷ lệ tử vong khoảng 30%. Tomoyuki (2014), khi theo dõi tình hình mắc PED tại Nhật Bản giai đoạn từ tháng 10 năm

75

cứu trên cho thấy, các tổn thương vi thể ở ruột chủ yếu của lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) là sung huyết, xuất huyết, thâm nhiễm tế bào viêm, lơng nhung bị ăn mịn, tăng sinh các nang lympho và hoại tử tế bào.

Gregory & cs. (2013) cho biết lợn khi mắc PED các tổn thương cấp tính nhất là của các tế bào biểu mơ thối hóa trên bề mặt bên và các đầu của lông nhung. Các tế bào bị sưng lên một cách khác nhau với tế bào chất bạch cầu ái toan dạng hạt, đôi khi chứa các không bào proteinic màu hồng nhạt từ trịn đến bầu dục có kích thước thay đổi. Các tế bào sưng lên dẫn đến đường viền bàn chải có hình vỏ sị chứ khơng phải là bề mặt phát sáng tuyến tính bình thường hơn. Một số tế bào mất gắn kết với các tế bào lân cận trên bề mặt bên và với màng đáy trên bề mặt cơ bản của chúng. Các tế bào biểu mơ hợp bào được quan sát có chứa nhiều nhân. Các vi nhung bị rút ngắn một cách khác nhau với sự ngưng tụ của lớp đệm gần các đầu của lông nhung. Các lông nhung bị teo nghiêm trọng, đầu của lơng nhung bị bào mịn hoặc bị bao phủ bởi các tế bào biểu mơ suy giảm rõ rệt với hình thái hình khối thấp đến hình vảy. Lớp đệm được cô đặc trong suốt chiều dài của lông nhung và thường chứa các mảnh vụn nhân và một số bạch cầu trung tính. Tế bào biểu mơ lơng nhung sưng lên có tế bào chất dạng hạt, đơi khi chứa các khơng bào màu hồng nhạt có kích thước thay đổi từ hình trịn đến hình bầu dục.

Ảnh 4.17. Sung huyết hạ niêm mạc ruột. (HE x 100)

Ảnh 4.18. Lông nhung ruột bị tù đầu, ngắn lại. (HE x 200)

76

Ảnh 4.19. Sung huyết hạ niêm mạc ruột nhuộm. (HE x 200)

Ảnh 4.20. Hoại tử tế bào biểu mô ruột. (HE x 200)

Ảnh 4.21. Thối hóa tế bào trên đỉnh các lơng nhung Tá tràng lợn mắc

PED. (HE x 200)

Ảnh 4.22. Các lông nhung Không tràng lợn mắc PED bị ngắn lại.

(HE x 200)

Ảnh 4.23. Lông nhung của Hồi tràng lợn mắc PED tù đầu, ngắn lại.

(HE X200)

Ảnh 4.24. Tổn thƣơng lông nhung Kết tràng lợn mắc PED. (HE x 200)

77

Ảnh 4.25. Tăng sinh nang Lympho thành ruột Hồi tràng lợn mắc PED.

(HE x 100)

Ảnh 4.26. Tăng sinh các nang Lympho thành ruột ở không tràng

lợn mắc PED. (HE x 200)

Ảnh 4.27. Thâm nhiễm tế bào viêm xung quanh các tuyến ruột lợn mắc

PED. (HE x 400)

Ảnh 4.28. Sung huyết và thâm nhiễm tế bào viêm xung quanh tuyến ruột

lợn mắc PED. (HE x 400) 4.2.4. Các chỉ tiêu sinh lý máu của lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED)

4.2.4.1. Một số chỉ tiêu về chất lượng hồng cầu

a. Số lượng hồng cầu (RBC: 106/µL)

Số lượng hồng cầu ở các lồi gia súc là khác nhau, trong cùng một loài số lượng hồng cầu thay đổi theo giống, giới tính, chế độ dinh dưỡng. Khi gia súc bị bệnh số lượng hồng cầu có thể tăng hay giảm. Số lượng hồng cầu tăng thường gặp trong trường hợp mất nước như: tiêu chảy nặng, nôn nhiều, sốt cao, trúng

78

độc (Asen, Coban) do thiếu dưỡng khí. Số lượng hồng cầu giảm thường gặp trong các bệnh thiếu máu, các bệnh làm dung huyết, ký sinh trùng đường máu.

Số lượng hồng cầu phản ánh phẩm chất con giống, số lượng hồng cầu càng nhiều thì sức sống, sức đề kháng của con vật càng tốt. Vì vậy, việc xác định số lượng hồng cầu có ý nghĩa quan trọng để chẩn đoán bệnh.

Kết quả kiểm tra số lượng hồng cầu ở lợn khoẻ và lợn mắc PED được thể hiện tại bảng 4.7.

Kết quả bảng 4.7 cho thấy: Số lượng hồng cầu ở lợn khoẻ trung bình là 6,51 0,10x106/àL, t 5,28 ữ 7,52x106/µL. Trong khi đó số lượng hồng cầu ở lợn mắc dịnh tiêu chảy cấp (PED) là 7,76x106/µL. Hồ Văn Nam & cs. (1997) khi nghiên cứu về bệnh viêm ruột tiêu chảy ở lợn đã xác định được số lượng hồng cầu của lợn trung bình là 6,5 x106/àL, t 6 ữ 8x106/àL. Theo Masiuk & cs. (2018) ở lợn từ 16 đến 18 ngày tuổi mắc dịnh tiêu chảy cấp (PED) có số lượng hồng cầu (từ 7,14 đến 8,19x106/µL) cao hơn lợn khoẻ (5,62x106/µL) là 34,1% (P<0,05).

Khi lợn bị bệnh đã xuất hiện triệu chứng tiêu chảy mãnh liệt và giảm bú nên lượng nước trong cơ thể lợn giảm mạnh. Vì vậy, máu lợn sẽ bị cơ đặc nên lượng hồng cầu/µL tăng. Phạm Ngọc Thạch & cs. (2006). Tại nghiên cứu này, các tác giả cho rằng: Trong thú y số lượng hồng cầu tăng thường do các nguyên nhân làm cơ thể mất nước như những bệnh gây tiêu chảy, nôn mửa, ra nhiều mồ hôi,... làm cho máu bị cô đặc.

b. Tỷ khối hồng cầu (HCT: %)

Tỷ khối hồng cầu là tỷ lệ phần trăm khối hồng cầu trong một thể tích máu nhất định. Xác định tỷ khối hồng cầu là một chỉ tiêu quan trọng trong chẩn đoán lâm sàng. Tỷ khối hồng cầu có thể tăng hoặc giảm do nhiều nguyên nhân khác nhau. Chỉ số này tăng khi thể tích bình qn hồng cầu tăng, hoặc số lượng hồng cầu tăng, hoặc cả hai cùng tăng và ngược lại, tỷ số sẽ giảm khi tỷ khối hồng cầu

79

Bảng 4.7. Số lƣợng, tỷ khối và thể tích bình qn của hồng cầu ở lợn khoẻ và lợn mắc PED ni tại tỉnh Thanh Hố

Đối tƣợng Số lƣợng hồng cầu (106/µL) Tỷ khối hồng cầu (%) Thể tích bình qn hồng cầu (fL)

MSE MSE MSE

Lợn khoẻ

(n=40) 6,51  0,10b 37,30  0,38b 57,73  0,91

Lợn bệnh

(n=40) 7,76  0,09a 43,84  0,26a 56,76  0,70

Ghi chú: Các chữ cái a,b biểu hiện sự sai khác có ý nghĩa giữa các giá trị so sánh trong cùng cột (P<0,05).

80

giảm khi thể tích bình qn hồng cầu giảm hoặc khi số lượng hồng cầu giảm hoặc khi cả hai cùng giảm. Kết quả kiểm tra tỷ khối hồng cầu ở lợn khoẻ và lợn bệnh được trình bày ở bảng 4.7.

Ở lợn khoẻ mạnh có tỷ khối hồng cầu trung bình là 37,30  0,38%. Trong khi đó, ở lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) có tỷ khối hồng cầu trung bình là 43,84  0,26%, từ 40,08 ÷ 45,98%. Như vậy, ở lợn mắc dịnh tiêu chảy cấp (PED)