V. PHẠM VI NGHIÊN CỨU 3
3.1.1. Loài cá khảo sát 28
Trong 2 mùa, đã thu được tổng cộng 1200 con cá trong 4 huyện. Các loài cá được định loại dựa vào tài liệu của [50]–[52], [61]. Danh sách các loài cá thu mẫu được thể hiện ở bảng 3.1.
Bảng 3.1 Loài cá thịt thu mẫu ở 4 huyện ngoại thành (Cần Giờ, Củ Chi, Nhà Bè, Bình Chánh), thành phố Hồ Chí Minh
STT Loài cá Số lượng (con) Kích cỡ cá
1 Chẽm 60 6 - 8 tháng 2 Rô phi vằn 580 3 - 4 tháng 3 Trê lai 440 4 - 5 tháng 4 Điêu hồng 20 3 - 4 tháng 5 Tra 70 6 - 8 tháng 6 Sặc điệp 30 5 - 6 tháng Tổng cộng: 1200 3.1.2.Tỉ lệ nhiễm metacercariae
Bảng 3.2 Tỉ lệ nhiễm metacercariae trên mẫu cá nuôi thịt STT Loài cá Số lượng (con) Số mẫu cá có metacercariae Tỉ lệ nhiễm metacercariae (%) 1 Chẽm 60 1 1,67 2 Rô phi vằn 580 1 0,17 3 Trê lai 440 6 1,36 4 Điêu hồng 20 0 0 5 Tra 70 0 0 6 Sặc điệp 30 20 66,67 Tổng cộng: 1200 28
Qua bảng 3.2, ở 6 loài cá được phân tích ấu trùng metacercariae thì có cá Tra và cá Điêu hồng không phát hiện thấy nang sán trên mẫu thịt cá, còn cá Chẽm, Rô phi vằn, Trê lai và cá Sặc điệp có phát hiện nang sán trên mẫu phân tích. Cá Sặc điệp có tỉ lệ nhiễm metacercariae cao nhất (20 con cá nhiễm sán trong tổng số 30 con, tỉ lệ là 66,67%), tiếp đến là cá Chẽm 1,67% (1 con nhiễm trong 60 con), cá Trê lai 1,36% (6 con nhiễm trong 440 con), cá Rô phi vằn 0,17% (1 con nhiễm trong 580 con).
STT Loài cá Số lượng ao thu Số ao nhiễm Tỉ lệ nhiễm metacercariae (%) 1 Chẽm 6 1 16,67 2 Rô phi vằn 58 1 1,72 3 Trê lai 44 6 13,64 4 Điêu hồng 2 0 0 5 Tra 6 0 0 6 Sặc điệp 4 1 25 Tổng cộng: 120
Qua bảng 3.3, tỉ lệ nhiễm metacercriae trên ao nuôi cá Sặc điệp là cao nhất (25%), trên ao nuôi cá Chẽm 16,67%, trên ao nuôi cá Trê lai 13,64%, trên ao nuôi cá Rô phi vằn 1,72%, trên ao nuôi cá Điêu hồng và cá Tra chưa phát hiện sự nhiễm sán.
3.2. Thành phần loài Sán lá song chủ giai đoạn metacercariae trên cá nuôi
Định danh được 4 loài sán thuộc 2 họ sán lá (Cryptogonimidae và Heterophyidae) truyền qua cá, dựa vào khóa phân loại metacercariae (phụ lục 2, 3).
3.2.1.Sán lá Exorchis oviformis
Bào nang ấu trùng sán lá Exorchis oviformis được phân lập có hình elip, có thành mỏng và trong suốt, được nhận dạng nhờ đặc điểm đặc biệt là có điểm mắt ở hai bên hầu như ở hình 3.1.
Hình 3.1 Nang sán Exorchis oviformis (x100)
Ngoài ra, metacercariae của Exorchis oviformis còn có tuyến bài tiết hình chữ V đặc trưng, thể hiện ở hình 3.2.
Hình 3.2 Túi bài tiết hình chữ V của Exorchis oviformis (x40 và x100)
Nang sán Exorchis oviformis được phân lập từ mẫu cá Chẽm thu ở Cần Giờ.
3.2.2.Sán lá ruột nhỏ Centrocestus sp.
Nang sán Centrocestus sp. được phân lập từ mẫu cá Sặc điệp thu ở Bình Chánh. Ở hình 3.3, ấu trùng sán thoát khỏi nang có răng xếp vòng tròn thành 2 hàng xung quanh giác miệng, đây là đặc điểm nhận dạng của ấu trùng sán lá Centrocestus sp.. Ngoài ra, Centrocestus sp. còn có đặc điểm là có tuyến bài tiết hình chữ X quan sát ở hình 3.4.
Hình 3.3 Ấu trùng metacercaria của
Centrocestus sp. bị phá nang (x100)
Hình 3.4 Tuyến bài tiết hình chữ X ở
Centrocestus sp. (x100)
3.2.3.Sán lá ruột nhỏ Procerovum sp.
Nang sán Procerovum sp. được phân lập từ mẫu cá Sặc điệp thu ở Bình Chánh. Nang sán của Procerovum sp. có hình elip và có một túi bài tiết hình chữ D, sán có
Hình 3.5 Nang sán Procerovum sp. (x40)
3.2.4.Sán lá ruột nhỏ Haplorchis pumilio
Nang sán Haplorchis pumilio được phân lập từ mẫu cá Trê thu ở Củ Chi, cá Rô phi vằn ở Bình Chánh. Haplorchis pumilio được nhận dạng nhờ đặc điểm là có hàng răng nhỏ xếp xung quanh giác bụng quan sát hình 3.6.
Hình 3.6 Giác bụng của Haplorchis pumilio (x100)
Ở hình 3.7, bào nang ấu trùng Sán lá ruột nhỏ Haplorchis pumilio được phân lập từ cá có hình dạng giống trong mô tả về H. pumilio trong khóa định loại metacercariae của Murrell và cộng sự [18].
Hình 3.7 Nang sán Haplorchis pumilio (x100)
3.3. Các yếu tố nguy cơ ảnh hưởng đến sự nhiễm sán lá song chủ trên cá nuôi và giải pháp kĩ thuật làm giảm nguy cơ nhiễm sán giải pháp kĩ thuật làm giảm nguy cơ nhiễm sán
Phương pháp phân tích hồi qui Binary logistic regression cũng được sử dụng để phân tích ảnh hưởng của yếu tố mùa, yếu tố kĩ thuật nuôi đến tỉ lệ nhiễm metacercariae, chỉ số kiểm định P<0,05 được dùng để đánh giá mối quan hệ giữa yếu tố mùa, yếu tố kĩ thuật nuôi và sự xuất hiện sán lá trên cá.
3.3.1.Mối liên hệ giữa sự nhiễm sán với yếu tố mùa, loài cá và khu vực thu mẫu cá cá
Trong 60 ao thu mẫu ở mùa mưa có 9 ao nhiễm sán, còn trong 60 ao mùa khô thì chỉ có 1 ao nhiễm.
Bảng 3.4 Kết quả phân tích hồi qui Binary logistic regression để tìm mối liên hệ giữa sự nhiễm sán với yếu tố mùa, loài cá và khu vực thu mẫu cá thịt ở Cần Giờ,
Phân tích hồi qui Binary logistic regression cho thấy mối liên quan giữa sự nhiễm sán với yếu tố mùa là có ý nghĩa thống kê (P <0,05) hay yếu tố mùa ảnh hưởng đến tỉ lệ nhiễm sán trên cá. Điều này có thể giải thích là do mùa mưa tạo điều kiện cho ốc phát triển và môi trường cho trứng sán lây lan, nhiễm lên ốc và sau đó nhiễm lên cá thông qua thức ăn hoặc là qua môi trường nước. Trong khi đó, mùa khô có lượng mưa ít, việc lan truyền trứng sán và ấu trùng sán trong môi trường nước không thuận lợi như ở mùa mưa nên tỉ lệ nhiễm sán trên cá ở mùa khô thấp hơn so với mùa mưa.
Kết quả phân tích có sự tương đồng với các nghiên cứu trước về ảnh hưởng của yếu tố mùa đến tỉ lệ nhiễm sán trên cá. Nghiên cứu của Thiện và cộng sự cho thấy tỉ lệ nhiễm ấu trùng sán lá vào mùa mưa cao hơn so với mùa khô [43]. Theo Qi và cộng sự, tỉ lệ nhiễm sán trên cá cao nhất vào khoảng cuối mùa mưa [65]. Sự chuyển mùa ảnh hưởng đến sự lây truyền sán lá, như sự lây truyền ở ấu trùng cercariae của O. viverrini chịu sự ảnh hưởng của lượng mưa và yếu tố mùa. Ở C. chinensis,ấu trùng cercariae bắt đầu lây truyền từ tháng 5 đến tháng 10 ở Hàn Quốc [23]. Lượng mưa nhiều tạo điều kiện trứng sán và quần thể ốc gặp nhau, dẫn đến số lượng ốc nhiễm sán tăng và ấu trùng cercaria thoát ra từ ốc nhiễm lên cá tăng theo, tỉ lệ nhiễm sán trên cá cao vào mùa mưa.
Do không có trường hợp nhiễm sán trên loài cá Tra, cá Điêu hồng nên phân tích hồi qui được sử dụng để phân tích mối liên quan giữa việc xuất hiện sán lá với 4 loài cá còn lại (Rô phi vằn, Trê lai, Chẽm, Sặc điệp). Kết quả phân tích hồi qui cho thấy mối liên quan giữa việc xuất hiện sán lá với loài cá thu mẫu là không có ý nghĩa thống kê (P >0,05). Mối liên hệ giữa sự nhiễm sán với nơi thu mẫu (Cần Giờ, Củ Chi, Nhà Bè, Bình Chánh) cũng không có ý nghĩa thống kê (P >0,05) hay nơi thu mẫu không phải là yếu tố nguy cơ ảnh hưởng đến sự nhiễm sán, có thể do nguồn cá giống của các nơi thu mẫu giống nhau, cùng từ một nguồn cung cấp cá giống.
Sig. 95% C.I.for EXP(B)
Lower Upper
Mùa .029 1.275 84.998
Loài cá .069 .956 3.259
3.3.2. Ảnh hưởng của các yếu tố kĩ thuật nuôi đến sự nhiễm metacercariae
Một số kĩ thuật nuôi được chọn để khảo sát xem có ảnh hưởng đến tỉ lệ nhiễm sán trên cá nuôi là số ngày phơi đáy, lượng vôi bón ao, sử dụng trùng chỉ làm thức ăn, độ sâu ao. Thông tin của các kĩ thuật nuôi này được thu thập qua phỏng vấn phiếu điều tra (phụ lục 1) và quan sát ao.
Các biến số phụ thuộc sau được đổi thành dạng nhị phân (0 và 1): thời gian phơi đáy (>2 ngày hay <=2 ngày), bón vôi chuẩn bị ao (>7kg/100m2 hay<=7kg/100m2), độ sâu ao (<1,5m hay >=1,5m), thức ăn (có sử dụng trùng chỉ làm thức ăn hay không sử dụng trùng chỉ làm thức ăn).
Bảng 3.5 Kết quả phân tích hồi qui Binary logistic regression để tìm yếu tố rủi ro ảnh hưởng đến sự nhiễm sán trong ao nuôi cá thịt ở mùa mưa và mùa khô
Sig. 95% C.I.for EXP(B) Lower Upper Mùa mưa (60 ao)
Độ sâu .617 .138 27.963
Thức ăn có trùng chỉ .027 1.491 820.352
Bón vôi .732 .075 6.154
Phơi đáy .019 1.564 163.694
Mùa khô (60 ao)
Độ sâu .998 .000 .
Thức ăn có trùng chỉ 1.000 .000 .
Bón vôi .997 .000 .
Phơi đáy 1.000 .000 .
Mối liên hệ giữa sự nhiễm sán với phơi đáy trong mùa mưa có ý nghĩa thống kê (P<0,05) hay phơi đáy là yếu tố ảnh hưởng đến tỉ lệ nhiễm sán trên cá hay việc phơi đáy có thể làm giảm sự nhiễm sán ở cá vào mùa mưa. Khâu phơi đáy ao đóng góp vai trò quan trọng trong việc tiêu diệt kí chủ ốc lây truyền sán lá còn trong ao sau khi đã bón vôi và ao nên phơi đáy 4 - 7 ngày để đảm bảo tiêu diệt hết địch hại trước khi bơm nước, thả cá vào [66]. Vào mùa mưa, việc phơi đáy khó khăn hơn, mưa gây trì hoãn quá trình phơi đáy, số giờ nắng ít gây bất lợi cho quá trình tiêu diệt địch hại trước khi thả cá vào. Vì vậy, số ngày phơi đáy có ảnh hưởng đến tỉ lệ nhiễm của sán lá trên cá.
đáy ao trong nhiều ngày (trên 2 ngày). Tuy nhiên, mối liên hệ giữa sự nhiễm sán với số ngày phơi đáy ở mùa khô không có ý nghĩa thống kê (P>0,05). Có thể là do vào mùa khô, nhiệt độ môi trường cao giúp rút ngắn thời gian phơi đáy nên số ngày phơi đáy ít không là yếu tố nguy cơ ảnh hưởng đến sự nhiễm sán.
Mối liên hệ giữa sự nhiễm sán với thức ăn cho cá có sử dụng trùng chỉ ở mùa mưa có ý nghĩa thống kê (P<0,05). Trong quá trình thu mẫu và quan sát, người dân nuôi cá ở một số nơi (hộ nuôi ở huyện Củ Chi) thường sử dụng trùng chỉ để làm thức ăn cho cá (cá Trê). Theo phỏng vấn, trùng chỉ thường được đào ở những kênh, sông nhỏ nơi có nhiều chất hữu cơ trong nước, như nơi xả phân của một số hộ nuôi gia súc, gia cầm (heo, gà, vịt,…). Người dân thường đào những thao đất bùn có trùng chỉ lẫn ốc như hình 3.8.
Hình 3.8 Đất lẫn trùng chỉ, ốc được sử dụng làm thức ăn cho cá Trê
Qua khảo sát, các hộ nuôi cá Trê lai đều sử dụng trùng chỉ làm thức ăn trong giai đoạn cá còn nhỏ, ít xử lí ốc ra khỏi nguồn thức ăn, đây có thể là nguyên nhân nhiễm sán trên cá Trê. Hộ nuôi những loài cá còn lại thì thường sử dụng nguồn thức ăn tự nhiên, chế biến hoặc thức ăn tổng hợp. Trong quá trình quan sát ao nuôi, đất
chứa trùng chỉ sử dụng làm nguồn thức ăn cho cá Trê lai thường có lẫn nhiều loại ốc, trong đó có ốc Melanoides tuberculata đã được phát hiện. Theo nhiều nghiên cứuthì
M. tuberculata là vật chủ trung gian nhiễm sán lá lên cá [36], [38], [47]. Trứng sán sau khi đi vào nước qua đường phân của vật chủ cuối cùng, chúng xâm nhập vào kí chủ trung gian ốc thích hợp trong đó có ốc M. tuberculata. Trong ốc, ấu trùng sán phát triển qua một số giai đoạn thành cercariae, thoát ra ngoài xâm nhập vào cá qua đường da. Vì vậy, vào mùa mưa, lượng mưa nhiều là điều kiện thuận lợi cho quần thể ốc phát triển trong đó có ốc M. tuberculata. Lượng nước trong tự nhiên cao dẫn đến sự tiếp xúc giữa trứng sán với ốc tăng, số lượng ốc bị nhiễm ấu trùng sán nhiều. Nên ốc lẫn vào trùng chỉ có nguy cơ nhiễm sán cao. Việc sử dụng thức ăn có trùng chỉ lẫn ốc nhiễm sán làm thức ăn cho cá sẽ tạo điều kiện sán từ ốc lây truyền sang cá nuôi. Vì vậy, để hạn chế sự nhiễm sán trên cá nuôi vào mùa mưa cần có các biện pháp xử lí nguồn thức ăn trùng chỉ trước khi cho cá ăn. Tuy nhiên, mối liên hệ giữa sự nhiễm sán với nguồn thức ăn trùng chỉ lẫn ốc ở mùa khô không có ý nghĩa thống kê (P>0,05). Có thể là do vào mùa khô, lượng nước trong tự nhiên thấp, nên quần thể ốc ít, sự lây truyền sán trong môi trường thấp. Bên cạnh đó, do yếu tố mùa có ảnh hưởng đến quá trình lây nhiễm sán (P<0,05) nên số lượng ốc lẫn vào đất chứa trùng chỉ ở mùa khô có thể nhiễm sán thấp hoặc không nhiễm sán. Do đó việc sử dùng trùng chỉ lẫn ốc không là yếu tố nguy cơ ảnh hưởng đến sự nhiễm sán lên cá nuôi vào mùa khô.
Mối liên hệ giữa sự nhiễm sán trên cá nuôi với độ sâu ao nuôi không có ý nghĩa thống kê trong cả mùa mưa và mùa khô (P>0,05). Độ sâu của ao trong 2 mùa không là yếu tố ảnh hưởng đến sự xuất hiện sán trên cá. Tuy nhiên, ở một số nghiên cứu cho thấy độ sâu ảnh hưởng đến khả năng lây nhiễm của cercariae. Ao nuôi cá có độ sâu hơn 1,5m thì ao có nhiệt độ thấp hơn, làm tăng khả năng nhiễm cercariae lên cá nuôi, tạo môi trường sống cho ốc tốt hơn [66], [67]. Vào mùa khô, nhiệt độ môi trường cao, dẫn đến nhiệt nước trong ao cao hơn so với mùa mưa, ảnh hưởng khả năng lây nhiễm cercaria lên cá nuôi. Vì vậy, việc ao có độ sâu hơn 1,5m không là yếu tố ảnh hưởng đến tỉ lệ nhiễm sán lá trên cá nuôi. Vào mùa mưa, lượng mưa nhiều, quần thể ốc phát triển, tăng khả năng lây nhiễm metacercariae lên cá. Tuy nhiên, qua quan sát bờ ao
(thuộc họ Babyloniidae), không là vật chủ nhiễm sán truyền sán lá qua cá. Vì vậy, vào mùa mưa, ao có độ sâu hơn 1,5m cũng không là yếu tố nguy cơ ảnh hưởng đến tỉ lệ nhiễm sán lên cá.
Bên cạnh đó, mối liên hệ giữa sự nhiễm sán với lượng vôi bón trong ao không có ý nghĩa thống kê trong cả mùa mưa và mùa khô (P>0,05). Bón vôi là yếu tố được thực hiện trong quá trình chuẩn bị ao, trước khi thả cá vào nuôi để tiêu diệt địch tạp. Tuy nhiên, cá có thể nhiễm sán do nhiều yếu tố khác sau khi thả vào ao nuôi đã xử lí. Vì vậy, việc bón vôi ít cho ao không là yếu tố rủi ro ảnh hưởng đến sự nhiễm sán trên cá nuôi.
3.3.3. Ảnh hưởng của các yếu tố rủi ro khác
Bảng 3.6 Kết quả phân tích hồi qui Binary logistic regression để tìm mối liên quan giữa các yếu tố rủi ro khác đến sự nhiễm sán lá trên cá
Sig. 95% C.I.for EXP(B) Lower Upper Mùa mưa Ốc .939 .152 5.722 Chó .534 .106 3.211 Mèo .758 .135 4.301 Chó, mèo ăn cá .038 1.113 43.602 Mùa khô Ốc .999 .000 . Chó .999 .000 . Mèo .998 .000 . Chó, mèo ăn cá .998 .000 .
Mối liên hệ giữa sự nhiễm sán với sự có mặt của ốc, chó, mèo trong ao thu mẫu trong cả 2 mùa đều không có ý nghĩa thống kê (P>0,05). Chó, mèo nhiễm ấu trùng sán thông qua ăn cá sống, chưa chín. Trứng sán đi vào môi trường nước, bắt đầu chu trình mới lây nhiễm cá nuôi từ phân của các loài động vật (chó, mèo,…). Vào mùa khô, lượng nước trong tự nhiên thấp, khả năng tiếp xúc giữa trứng sán trong phân chó mèo với nguồn nước ao thấp. Vì vậy, việc khu vưc nuôi có sự xuất hiện của chó, mèo cũng không là yếu tố nguy cơ ảnh hưởng đến tỉ lệ nhiễm sán. Vào mùa mưa, khả năng tiếp xúc phân chó mèo với nguồn nước ao cao. Tuy nhiên, chó mèo không nhiễm sán nên sự xuất hiện của chó, mèo vào mùa mưa cũng không là yếu tố ảnh hưởng đến sự
nhiễm sán. Vì vậy, yếu tố chó mèo có xuất hiện ở ao nuôi không là yếu tố rủi ro ảnh hưởng đến sự nhiễm sán trên cá ở mùa mưa và mùa khô. Bên cạnh đó, trong quá trình quan sát ao nuôi và phỏng vấn hộ thu mẫu thì ốc thường xuất hiện trong cả hai mùa