Phương pháp hoá sinh miễn dịch mang tính ñặc hiệu cao, dựa trên nguyên lý kết hợp giữa kháng nguyên và kháng thể ñặc hiệu. Hai phương pháp hiện dùng là: Aflatoxin ñánh dấu phóng xạ và Aflatoxin gắn men (Pestka, 1980, 1981). Do sự tiến bộ của kỹ thuật miễn dịch trong những năm qua, ñã phát triển nhiều hệ thống ELISA khác nhau ñể xác ñịnh Aflatoxin và kháng thểñơn và ña dòng [1].
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………25
* Phương pháp ELISA (enzyme – linked immunoabsorbant assay)
Phương pháp ELISA gồm ELISA trực tiếp và ELISA gián tiếp, ELISA trực tiếp sử dụng Aflatoxin có gắn men, ELISA gián tiếp – Aflatoxin có gắn prôtêin và một kháng thể thứ hai. Cả hai phương pháp này ñều sử dụng men peroxidaza và men photphataza kiềm ñể gắn.
Phương pháp ELISA trực tiếp: dựa trên nguyên lý kháng thể ñặc hiệu
ñược phủ trên các ñĩa chuẩn ñộ (microtites). Dung dịch tách từ mẫu hay Aflatoxin mẫu ñược ủ cùng nhau hay tách thành hai bước, sau ñó ñược rửa bằng dung dịch thích hợp. Lượng men gắn vào ñĩa ñược xác ñịnh bằng dung dịch ñặc biệt. Phản ứng màu ñược ño bằng quang phổ hoặc so sánh trực tiếp bằng mắt thường với các ñĩa chuẩn. Phương pháp này chiếm nhiều thời gian và sai số lớn trong cùng mẫu phân tích do sự xâm nhập của các chất ngoại lai có trong mẫu tách [1].
Phương pháp ELISA gián tiếp: Aflatoxin gắn vào protein ñược phủ các
ñĩa chuẩn ñộ (microtiter). Mẫu tách hay Aflatoxin chuẩn ñược ñưa vào ñĩa, tiếp theo là kháng thể thứ cấp (anti Aflatoxin antibody). Lượng kháng thể gắn vào ñĩa ñược xác ñịnh do thêm kháng thể IgG (anti rabit IgG) gắn với photphataza kiềm (ALP) và phản ứng màu xảy ra với P-nitrophenyl photphat. Lượng ñộc tốñược xác ñịnh bằng cách so sánh với ñường ñộc chuẩn Standard Curve. Phương pháp này trải qua nhiều bước và cần một kháng thể thứ cấp nên sai số cao và chiếm nhiều thời gian [1].