4. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
4.6.1 Phương pháp sử dụng môi trường CAM (Coconut agar medium)
Ngoài việc dùng phương pháp PCR ựể chẩn ựoán nấm A. flavus sinh
ựộc tố Aflatoxin, chúng tôi còn sử dụng môi trường nước dừa (hay môi trường CAM) ựể nghiên cứu biểu hiện khả năng sinh ựộc tố Aflatoxin của 50 chủng nấm A. flavus ựược phân lập ở trên, chúng tôi thu nhận ựược kết quả
như bảng 4.9 dưới ựây. Theo một số tài liệu, môi trường CAM là môi trường biểu hiện sự sinh ựộc tố Aflatoxin của loài nấm Aspergillus [20, 45] Trên môi trường nước dừa sau khoảng 40 ngày nuôi cấy, 50 chủng nấm A. flavus biểu hiện 3 dạng mầu sắc khác nhau, có thể tạm phân biệt là trắng, vàng nhạt và vàng sẫm (Hình 4.17).
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ59
Bảng 4.9 So sánh kết quả phương pháp Multiplex PCR và phương pháp dựa vào màu sắc chủng nấm trên môi trường CAM ựể phát hiện chủng
nấm A. flavus sinh ựộc tố Aflatoxin.
Chủng Màu sắc trên môi trường nước dừa
Multiplex
PCR Chủng
Màu sắc trên môi trường nước dừa Multiplex PCR G1 Vàng nhạt A G7 Vàng nhạt - G2 Vàng sẫm A G8 Vàng nhạt - G3 Vàng nhạt A G9 Vàng nhạt - G4 Vàng sẫm A G10 Vàng sẫm A G5 Vàng sẫm A G11 Vàng nhạt A G6 Trắng - G12 Vàng nhạt - D1 Vàng nhạt A D5 Vàng sẫm A D2 Vàng nhạt - D6 Trắng - D3 Vàng nhạt - D7 Vàng sẫm A D4 Trắng - D8 Vàng nhạt A N1 Vàng sẫm A N9 Vàng nhạt - N2 Vàng sẫm A N10 Vàng sẫm A N3 Trắng - N11 Vàng nhạt - N4 Vàng sẫm A N12 Vàng sẫm A N5 Vàng sẫm A N13 Vàng sẫm A N6 Vàng nhạt A N14 Vàng sẫm A N7 Vàng nhạt - N15 Vàng nhạt - N8 Vàng nhạt - N16 Vàng sẫm A L1 Trắng - L8 Trắng - L2 Vàng nhạt A L9 Vàng nhạt - L3 Vàng sẫm A L10 Trắng - L4 Vàng nhạt A L11 Trắng - L5 Vàng nhạt - L12 Vàng nhạt - L6 Vàng nhạt A L13 Vàng nhạt - L7 Trắng - L14 Vàng nhạt -
Chú thắch: A: những chủng lên cả 4 băng trong phản ứng Multiplex PCR ; -: những chủng không lên ựủ 4 băng.
Các chủng nấm A. flavus ựược nuôi trên môi trường nước dừa sau khoảng 40 ngày ựể trong bóng tối. Mầu sắc của các chủng nấm A. flavus
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ60
Qua bảng 4.9 ta thấy trong 50 chủng có: 16 chủng cho mầu vàng sẫm, 25 chủng cho mầu vàng nhạt và 9 chủng cho mầu trắng.
đối chiếu với kết quả Multiplex PCR, trong 25 chủng có kết quả
khuyếch ựại với cả 4 gen thì có 16 chủng có màu vàng sẫm và 9 chủng có màu vàng nhạt, còn lại những chủng không khuyếch ựại cả 4 gen thì thường biểu hiện màu là màu trắng hoặc màu vàng nhạt. điều ựó, cho thấy kết quả
Multiplex PCR có sự tương ứng với kết quả nghiên cứu khả năng sinh ựộc tố
Aflatoxin trên môi trường nước dừa (CAM). Một lần nữa, càng tăng tắnh thuyết phục về hiệu quả của phương pháp Multiplex PCR với cả 4 cặp mồi.
50 chủng nấm A. flavus ựược nuôi cấy trên môi trường CAM tiếp tục
ựược quan sát và ghi nhận kết quả dưới ựèn UV. Dưới ựèn UV, ựộc tố
Aflatoxin có thể quan sát ựược dạng mầu xanh nhạt. Những chủng có màu vàng sẫm trên môi trường thường có biểu hiện màu xanh nhạt và có màu sáng hơn. đó là dấu hiệu chứng tỏ sự có mặt của ựộc tố Aflatoxin khi quan sát dưới ánh sáng ựèn UV (hình 4.18).
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ61
Hình 4.17: Mầu sắc biểu hiện của nấm Aspergillus flavus trên môi trường CAM (nước dừa) theo thứ tự: vàng sậm, vàng nhạt và trắng.
Hình 4.18: Hình ảnh quan sát ựộc tố Aflatoxin ựược sinh ra bởi các chủng nấm
Aspergillus flavus dưới ánh sáng ựèn UV.