S và w: 50ộl dung dịch mẫu thu hồi sau kh
3.4.2.2. Chiến lược phân tắch mẫu
* đối với các kháng sinh có qui ựịnh giới hạn tồn dư tối ựa
Tất cả các mẫu thu thập ựược trải qua bước phân tắch sàng lọc bằng phương pháp vi sinh vật NTPT (New Two Plate Test) (Dang và cs, 2011) ựể phát hiện các mẫu nghi ngờ. Các mẫu nghi ngờ này sau ựó ựược phân tắch bằng phương pháp hậu sàng lọc (post-screening) ựể nhận diện các nhóm kháng sinh cần tìm. Cuối cùng các mẫu dương tắnh với phương pháp hậu sàng lọc ựược phân tắch khẳng ựịnh bằng phương pháp lý hóa.
Theo kết quả ựiều tra, các kháng sinh thuộc nhóm (fluoro)quinolone và tetracyclines là hai nhóm ựược sử dụng tương ựối phổ biến trong chăn nuôi gà, tetracycline vừa ựược sử dụng ựể phòng trị bệnh vừa ựược sử dụng như chất kắch thắch sinh trưởng, trong khi các quinolon chủ yếu dùng trong phòng trị bệnh. Vì lý do ựó, trong khuôn khổ nghiên cứu này các mẫu dương tắnh sau bước sàng lọc ựược phân tắch bằng phương ựặc hiệu pháp hậu sàng lọc (Tetra-Sensorệ Test dùng ựể phát hiện tetracycline và ELISA ựể phát hiện các (fluoro)quinolones). Các mẫu dương tắnh khi phân tắch bằng phương pháp ựặc hiệu tiếp tục ựược phân tắch khẳng ựịnh bằng phương pháp Sắc ký khối phổ (LC-MS) (Sơ ựồ 3).
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ. 32
Sơ ựồ 3.3. Chiến lược phân tắch dư lượng kháng sinh trong thịt gà ựược lấy tại các chợ Hải Phòng
* Kắt Tetrasensor: là kắt receptor ựặc hiệu dạng que thử ựể sàng lọc nhanh sự hiện diện của tetracycline tồn dư trong thịt (ngưỡng phát hiện là 20 ppb) ựược cung cấp bởi Unisensor, S.A (Wandre, Liege, Vương Quốc Bỉ).
Kháng sinh trong 5 gam mẫu ựược tách chiết trong dung dịch ựệm (cung cấp kèm theo kắt) nhờ vào hệ thống ựồng nhất stomacher. Sau 2 phút, ựồng nhất mẫu, lấy 2 ml huyễn dịch ựược ly tâm ở 20 000 vòng/phút trong 1 phút. Hút 200 ộl lớp trên nhỏ vào các giếng chứa receptor, lắc lều cho ựến khi tan hết. Sau ựó nhúng que thử vào các giếng và ủ ở nhiệt ựộ phòng 10 phút. Khi hỗn hợp dung dịch mẫu và receptor trong các giếng ngấm vào que thửqua vạch mầu xanh, màu ựỏ sẽ xuất hiện. Vạch thứ nhất giữ lại các receptor từ giếng thử lên và vạch thứ 2 sẽ kết hợp với một phần thừa sau khi ựã bị giữa lại ở vạch