Ch−ơng 2 :Đối t−ợng, Nội dung, nguyên liệu và ph−ơng pháp nghiên cứu
2.4.3. Ph−ơng pháp phân lập vi khuẩn Ẹ col
Ph−ơng pháp phân lập và giám định vi khuẩn Ẹ coli theo quy trình th−ờng quy của bộ môn Vi trùng- Viện Thú ỵ Qui trình đ−ợc tóm tắt tại hình 2.1
Các mẫu sau khi lấy về đ−ợc tiến hành nuôi cấy phân lập ngay (chỉ để tối đa 4- 5 giờ trong điều kiện bảo quản ở nhiệt độ lạnh) để tránh tạp khuẩn phát triển.
* Ph−ơng pháp xử lý bệnh phẩm:
Cắt một mẫu bệnh phẩm phía trong (để tránh tạp trùng), dùng panh kẹp vô trùng ria trực tiếp lên thạch đĩa hoặc nghiền bệnh phẩm thành huyễn dịch với n−ớc sinh lý theo tỷ lệ 1/10, dùng ống hút cấy trên thạch máu, thạch th−ờng, MacConkeỵ Bồi d−ỡng ở 37oC trong 24 giờ. Nếu lợn có triệu chứng đặc tr−ng, bệnh phẩm đ−ợc cấy trực tiếp vào môi tr−ờng phân biệt nh− MacConkeỵ Trên các loại môi tr−ờng phân biệt để nuôi cấy, phân lập vi khuẩn đ−ờng ruột, mỗi loại vi khuẩn sẽ mọc những khuẩn lạc có kích th−ớc, hình dáng, màu sắc khác nhaụ Đối với vi khuẩn Ẹ coli trên môi tr−ờng MacConkey sau khi nuôi cấy 24 giờ ở 37oC khuẩn lạc mọc có màu hồng đỏ (màu cánh sen), dạng S; Trên môi tr−ờng brilliant green có khuẩn lạc màu vàng, dạng S . Chọn các khuẩn lạc đứng riêng rẽ, điển hình nuôi cấy vào môi tr−ờng thạch ống để tiến hành giám định đặc tính của vi khuẩn phân lập.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 37
Hình 2.1. Qui trình phân lập và giám định vi khuẩn Ẹ coli
Bệnh phẩm
(Phân, phủ tạng của lợn mắc phù đầu)
Macconkey
(Khuẩn lạc màu cánh sen)
Chọn khuẩn lạc thuần khiết
Giữ trên thạch máu
Hình thái,
nuôi cấy Đặc tính sinh hóa
Yếu tố gây
bệnh Định týp
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 38