Ch−ơng 2 :Đối t−ợng, Nội dung, nguyên liệu và ph−ơng pháp nghiên cứu
2.4.4. Ph−ơng pháp giám định đặc tính sinh hóa chủ yếu của vi khuẩn Ẹ col
Ẹ coli
2.3.4.1. Phản ứng V.P (Voges Proskauer)
- Môi tr−ờng để làm phản ứng V.P là Pepton, glucosẹ - Dung dịch để thử phản ứng là alphanaptol .
Ph−ơng pháp tiến hành: Cấy vi khuẩn cần giám định vào môi tr−ờng pepton, glucose, nuôi cấy ở 37oC trong 24 giờ. Nhỏ vào môi tr−ờng nuôi cấy 5 giọt dung dịch thử phản ứng V.P. Nếu xuất hiện màu đỏ hồng là d−ơng tính, không biến màu hay màu vàng là âm tính. Phản ứng này rất chậm, đôi khi 4- 5 giờ sau mới xuất hiện.
2.4.4.2. Phản ứng Indol
Cấy vi khuẩn cần giám định vào môi tr−ờng Trypton, nuôi cấy ở nhiệt độ 37oC trong 24 giờ rồi nhỏ vào canh trùng nuôi cấy 4- 5 giọt dung dịch Kovac (Kowacs.) và quan sát trong vòng một phút.
Đánh giá kết quả:
- Phản ứng d−ơng tính: Trên bề mặt môi tr−ờng xuất hiện một vòng tròn màu đỏ.
- Phản ứng âm tính: Bề mặt mooit tr−ờng không có vòng tròn màu đỏ.
2.4.4.3. Phản ứng lên men đ−ờng trong môi tr−ờng dịch thể: * Ph−ơng pháp tiến hành:
Lấy 100ml môi tr−ờng n−ớc pepton, cho 0,1ml chỉ thị màu Bromocresol 1,6% hay 0,6ml chỉ thị màu Bromothymol lắc đều, phân chia vào các ống nghiệm, mỗi ống chứa 5ml có ống Durham (để kiểm tra sinh hơi). Pha các loại đ−ờng: glucose, lactose ..v..v. thành dung dịch 10%, 20% đem hấp −ớt 110oC trong 20- 30 phút, sau đó cho vào mỗi ống môi tr−ờng n−ớc pepton dung dịch 20% một trong các loại đ−ờng trên theo tỷ lệ 0,15ml hay 0,3ml dung dịch
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 39
đ−ờng 10%. Cấy vi khuẩn cần giám định đ−ợc nuôi cấy ở nhiệt độ 37oC trong 24 giờ. Nếu vi khuẩn lên men đ−ờng và sinh hơi ống Durham sẽ nổi lên và môi tr−ờng đổi màu so với ban đầu là phản ứng d−ơng tính và ng−ợc lạị