4. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
4.1.4. Phát hiện virus RYSV bằng RT-PCR trên các mẫu thu thập ngoài ựồng ruộng vụ xuân
ruộng vụ xuân 2011
Vì là bệnh mới nên việc chẩn ựoán bằng quan sát triệu chứng thường không chắnh xác khi mẫu thử không biểu hiện triệu chứng ựặc trưng, hoặc khi cây bệnh ở giai ựoạn mới nhiễm. đặc biệt triệu chứng vàng lá do RYSV gây ra có thể rất rễ với các hiện tượng vàng lá sinh lý khác. Chắnh vì vậy, việc chẩn ựoán bệnh do RYSV gây ra thường rất khó, dễ nhầm lẫn.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 31 Do tại thời ựiểm ựiều tra vụ xuân, kháng huyết thanh ựặc hiệu virus RYSV vẫn chưa có nên chúng tôi ựã kiểm tra sự có mặt của virus bằng RT-PCR với cặp mồi ựặc hiệu gen L của virus RYSV là RY-L-F2 và RY-L-R2. Cặp mồi này ựã ựược thiết kế từ trước và tạo sản phẩm 422 bp (Hà Viết Cường et al., 2010). Chi tiết phản ứng RT-PCR một bước như trình bày trong phần vật liệu và phương pháp
Trong ựợt kiểm tra thứ nhất, chúng tôi ựã kiểm tra các mẫu lúa biểu hiện triệu chứng biến màu vàng hoặc ựỏ lá tại Gia Lâm Hà Nộị Bốn mẫu RNA tổng số ựược chiết theo phương pháp CTAB và kết tủa bằng LiCl. Tuy cả 4 mẫu thử (từ T1 ựến T4) ựều cho kết quả âm tắnh mặc dù có băng sản phẩm hình thành (Hình 4.5). để ựảm bảo chắc chắn, 2 mẫu RNA (T3 va T4) ựược chiết lại lần 2 bằng Kắt TriPure theo hướng dẫn của nhà sản xuất và thực hiện phản ứng với ựiều kiện tương tự. Kết quả của lần lặp lại này cho thấy chỉ mẫu ựối chứng dương (xác ựịnh từ năm 2010) tạo sản phâm rõ và ựặc hiệu còn 2 mẫu còn lại là T3 và T4 không hình thanh sản phẩm ựúng. (Hình 4.5)
Bảng 4.3. RT-PCR phát hiện virus RYSV trên lúa vụ xuân 2011 tại Hà- Nộị
TT Mẫu Giống Triệu chứng Ngày
thu địa ựiểm