9 11-18 Khang Dân Cây bình thường, lá biến vàng ựỏ 18/05 Bắc Giang 10 11-20 Nhị ưu 838 Cây lùn, lá biến vàng ựỏ 11/05 Hòa Bình
4.2.6. đánh giá chất lượng củ a2 nguồn kháng huyết thanh (huyết tương và dịch trên tủa sau ly tâm máu ựông).
dịch trên tủa sau ly tâm máu ựông).
Theo kết quả thắ nghiệm phần 4.2.5, kháng huyết thanh sau lần tiêm thứ 4 có giá trị OD cao nhất chứng tỏ kháng thể ựã hình thành rất nhiềụ Tuy nhiên, sau khi giết thỏ, chúng tôi có 2 nguồn kháng huyết thanh là huyết tương nổi ở trên và dịch trên tủa sau khi ly tâm máu ựông. Về lý thuyết, kháng thể thường tồn tại nhiều trong huyết tương. Tuy nhiên ựể kiểm tra liệu kháng thể có cả ở phần dịch lý tâm không nhằm chọn loại kháng huyết thanh tốt nhất cho các nghiên cứu tiếp theo và tránh
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 38 lãng phắ, chúng tôi tiến hành kiểm tra sự có mặt của kháng thể virus RYSV trong 2 nguồn kháng huyết thanh này bằng ELISA theo qui trình chuẩn với các mẫu lúa bị bệnh ựiển hình và mẫu lúa khỏe ựối chứng. Thắ nghiệm ựược lặp lại 2 lần và trình bày ở Bảng 4.7, Hình 4.9.
Bảng 4. 7. ELISA so sánh chất lượng 2 nguồn kháng huyết thanh virus RYYSV (huyết tương và dịch trên tủa sau ly tâm máu ựông)
Giá trị mật ựộ quang OD sau 1 giờ Nguồn kháng
huyết thanh Mẫu thử
Lần 1 (29/07/2011) Lần 2 (18/08/2011) Bệnh 1 (tươi) 0.208 0.402 Bệnh 2 (tươi) 0.199 0.321 Bệnh 3 (tươi) 0.187 0.298 Bệnh 4 (tươi) 0.460 0.256 đ/c + 0.467 0.521 Dịch sau ly tâm máu ựông TB khỏe (SD) 0.191(0.008) 0.146(0.002) Bệnh 1 (tươi) 0.188 0.343 Bệnh 2 (tươi) 0.197 0.235 Bệnh 3 (tươi) 0.184 0.291 Bệnh 4 (tươi) 0.452 0.249 Huyết tương đ/c+ 0.462 0.547 TB khỏe (SD) 0.190(0.001) 0.140(0.013)
Ghi chú: độ hòa loãng của mỗi loại KHT 1/200, ựộ hòa loãng của phản ứng chéo 1/10, ựộ hòa loãng của kháng thể chuột liên kết AP là 1/5000. OD của các mẫu cây khỏe là giá trị trung bình của 3 mẫu
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 39
Hình 4.9. ELISA so sánh chất lượng 2 nguồn kháng huyết thanh virus RYYSV (huyết tương và dịch trên tủa sau ly tâm máu ựông)
Nhận xét:
Kết quả ELISA ở lần thử thứ nhất ựược thực hiện vào ngày 29/07/2011 cho thấy giá trị OD mẫu ựối chứng dương của 2 nguồn kháng huyết thanh ựều cao gần như nhau: OD của dịch sau ly tâm máu ựông bằng 0.460 và của huyết tương 0.452 chứng tỏ lượng kháng thể ựặc hiệu virus có ở 2 mẫu kháng huyết thanh này là tương ựương.
Vì giá trị OD của 3/4 mẫu cây bệnh tươi (mẫu 1, 2 và 3) có giá trị OD gần tương ựương với mẫu cây khỏe, có lẽ do quá trình lấy mẫu không ựiển hoặc nghiền mẫu chưa ựủ kỹ nên chúng tôi ựã lặp lại thắ nghiệm lần 2, ựược thực hiện vào ngày 18/08/2011, với mẫu cây bệnh mớị Kết quả lần thử ELISA thứ 2 cho thấy các giá trị OD của 4 mẫu cây bệnh từ 0.256 ựến 0.402 ựối với dịch sau ly tâm máu ựông và từ 0.235 ựên 0.343. Kết quả này cũng chứng tỏ lượng kháng thể ựặc hiệu virus có ở 2 mẫu kháng huyết thanh này là tương ựương.
Như vậy cả 2 loại kháng huyết thanh ựều chứa kháng thể virus với lượng tương ựương và do ựó có khả năng phát hiện virus như nhaụ
Kết quả từ thắ nghiệm này cho thấy trong việc sản xuất kháng huyết thanh từ thỏ, việc tách huyết tương là không cần thiết và việc loại bỏ máu ựông sau khi lấy huyết tương là rất lãng phắ vì thể tắch dịch sau khi li tâm máu ựông thường gấp 4 lần thể tắch huyết tương. Như vậy, sau khi giết thỏ thì toàn bộ lượng máu nên ựược ly tâm ngay lạp tức mà không cần phải tách huyết tương.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 40