9 11-18 Khang Dân Cây bình thường, lá biến vàng ựỏ 18/05 Bắc Giang 10 11-20 Nhị ưu 838 Cây lùn, lá biến vàng ựỏ 11/05 Hòa Bình
4.2.5.Kiểm tra sự có mặt của kháng thể virus
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 36 bộ kháng huyết thanh. Toàn bộ máu thỏ ựược tách làm 2 phần: phần thứ nhất là huyết tương nổi trên bề mặt và phần thứ 2 là dịch trên tủa sau khi ly tâm phần máu ựông còn lạị
để kiểm tra sự có mặt của kháng thể virus trong kháng huyết thanh, kháng huyết thanh thỏ sau các lần tiêm 2, 3 và 4 ựược thử ELISA theo qui trình chuẩn dùng 4 mẫu cây bệnh có triệu chứng ựiển hình, 1 mẫu ựối chứng dương (mẫu 1075, ựã kiểm tra RT-PCR từ trước) và 3 mẫu cây khỏẹ Kết quả ựược trình bày ở bảng 4.6 và hình 4.8.
Bảng 4. 6. ELISA kiểm tra sự có mặt kháng thể virus RYSV trong kháng huyết thanh.
Giá trị mật ựộ quang OD sau 1 giờ STT Mẫu thử Kháng huyết thanh
sau lần tiêm 2 Kháng huyết thanh sau lần tiêm 3 Kháng huyết thanh sau lần tiêm 4 1 Bệnh 1 (tươi) 0.203 0.321 0.689 2 Bệnh 2 (tươi) 0.211 0.346 0.748 3 Bệnh 3 (tươi) 0.394 0.398 0.492 4 Bệnh 4 (tươi) 0.333 0.362 0.478 5 đ/c + 0.527 0.927 0.941 6 TB khỏe (SD) 0.191 (0.008) 0.200 (0.001) 0.210(0.003)
Ghi chú: độ hòa loãng của mỗi loại KHT 1/200, ựộ hòa loãng của phản ứng chéo 1/10, ựộ hòa loãng của kháng thể chuột liên kết AP là 1/5000. OD của các mẫu cây khỏe lúa chỉ ựược trình bày ở giá trị trung bình của 3 mẫu cây khỏẹ
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 37
Hình 4.8. ELISA kiểm tra sự có mặt kháng thể virus RYSV trong kháng huyết thanh.
Kết quả kiểm tra ELISA cho thấy, sau tiêm 2 tuần, kháng thể ựặc hiệu virus ựã hình thành với giá trị OD cao nhất là mẫu ựối chứng + (mẫu 1075) lên tới 0.527, giá trị thấp nhất là 0.203. Sau lần tiêm thứ 3 và thứ 4, kháng thể ựặc hiệu virus ựược hình thành cao hơn rất nhiều với giá trị OD của mẫu ựối chứng lần lượt là 0.927 và 0.941.
So sánh các chỉ số OD ở mẫu lúa bị bệnh với mẫu lúa khỏe cho thấy giá trị OD ở mẫu lúa bệnh cao hơn mẫu lúa khỏe rất nhiều với giá trị OD sau lần tiêm thứ 4 dao ựộng từ 0.478 Ờ 0.748, trong khi của mẫu lúa khỏe chỉ 0.210.
Kết quả ELISA ựã chứng tỏ rằng kháng huyết thanh sau lần tiêm thứ 4 ựã tạo ra lượng kháng thể ựặc hiệu virus ựủ lớn. Giá trị OD khá thấp của các mẫu cây khỏe cũng chứng tỏ rằng protein của cây ựã ựược loại bỏ khá nhiều trong quá trình tinh chiết virus dẫn tới hàm lượng kháng thể không ựặc hiệu trong kháng huyết thanh ắt.