- đệm cho enzyme EcoRI 2 ộl Enzyme EcoRI 1,5 ộl
4.4.2Kết quả kiểm tra DNA plasmid tái tổ hợp
4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.4.2Kết quả kiểm tra DNA plasmid tái tổ hợp
Sau khi nuôi cấy thành công trên môi trường LB-agar 1,5%, chúng tôi tiến hành chọn lọc những khuẩn lạc thắch hợp (3 khuẩn lạc tốt nhất) của mỗi loại rồi tiến hành nuôi cấy trong môi trường LB lỏng có bổ sung kháng sinh, lắc 200 vòng/phút ở 370C, 18 Ờ 20 giờ. Sau ựó, lấy vi khuẩn nuôi cấy này ựể tách chiết DNA tái tổ hợp bằng bộ kit tách chiết của hãng BIONEER, cắt sản phẩm DNA plasmid bằng enzyme giới hạn EcoRI. điện di kiểm tra sản phẩm trên môi trường thạch agarose 1,2%, rồi tiến hành soi trong máy Dolphin- DOC và chụp ảnh. Kết quả ựược trình bày ở hình 4.5, với các clone của các mẫu: mẫu DN2 (clone 1) và mẫu DH-EG-2000 (clone 1 và clone 2).
Hình 4.5. Kết quả tách dòng vùng gen VP1 của virus viêm gan vịt ựược ựiện di kiểm tra trên thạch agarose 1,2%, các sản phẩm DNA plasmid
ựược kiểm tra bằng cách cắt với enzyme EcoRI.
Ghi chú: M: chỉ thị phân tử DNA của thực khuẩn thể Lamda ựược cắt bằng enzyme HindIII.
1: DNA plasmid tách dòng (clone 1) của mẫu DH-EG-2000 2: DNA plasmid tách dòng (clone 2) của mẫu DH-EG-2000 3: DNA plasmid tách dòng (clone 1) của mẫu DN2
Kết quả hình 4.5 cho thấy: Khi cắt kiểm tra sản phẩm DNA plasmid tách dòng bằng enzyme EcoRI sẽ tạo ra 2 ựoạn DNA (băng DNA) ở mỗi ựường
chạy 1, 2 và 3. Sau khi so sánh kắch thước với các băng của chỉ thị phân tử, chúng tôi nhận ựịnh: băng nằm ở trên có kắch thước 3,9 kb, tương ứng với kắch thước của vector pCR2.1-TOPO; còn băng ở dưới có kắch thước khoảng 0,8 kb tương ứng với ựoạn DNA sản phẩm gen VP1 của virus viêm gan vịt cần tách dòng. Như vậy, kết quả này ựã khẳng ựịnh sự thành công của chúng tôi trong việc thu nhận ựoạn gen VP1 của virus viêm gan vịt trong năm mẫu và ựã ựưa ựược các ựoạn gen này vào lưu giữ trong vector tách dòng. đồng thời cũng cho thấy các kỹ thuật tách dòng và tách chiết vector tái tổ hợp mà chúng tôi thực hiện là hoàn toàn phù hợp.