4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.3 KẾT QUẢ THỤ TINH ỐNG NGHIỆM TRỨNG BÒ
Các tế bào sau khi thành thục được ủ với tinh trùng để thụ tinh và đặt vào tủ nuôi cấy. Sau 5 giờ kiểm tra sự thụ tinh bằng cách tìm thấy thể cực thứ
hai (tạo thành hợp tử). Kết quả thụ tinh ống nghiệm được chúng tôi trình bày qua bảng 4.8.
Bảng 4.8. Kết quả thụ tinh trứng bò trong ống nghiệm
Chỉ tiêu theo dõi Kết quả
Số tế bào trứng cho thụ tinh (n) 1522 Số tế bào sau 5 giờ thụ tinh tạo thành hợp tử (n) 760 Tỷ lệ thụ tinh (% ± SE) 50,22 ± 1,12
Tổng số có 1522 tế bào trứng được đưa vào ủ với tinh trùng để thụ tinh. Sau 5 giờ ủ với tinh trùng, số tế bào trứng đã thụ tinh (xuất hiện thể cực thứ 2) là 760 đạt tỷ lệ 50,22%.
Kết quả của chúng tôi thấp hơn kết quả của Nguyễn thị Ước và cs (1999)[11] đã báo cáo trên bò vàng và bò Hà Ấn. Theo tác giả này, tỷ lệ thụ
tinh trên bò vàng là 60,90%; trên bò Hà Ấn đạt 54,70%. Theo báo cáo của tác giả Nguyễn Văn Lý và cs (2003[7]), tỷ lệ thụ tinh ống nghiệm ở bò 54,14%.
Nguyễn Hữu Đức và cs (2003)[3] đã dựa vào tỷ lệ phân chia để đánh giá kết quả thụ tinh, kết quả thụ tinh ống nghiệm ở bò lai Sind đạt 72,96%.
Theo kết quả nghiên cứu của Khurana và Niemann (2000)[42], tỷ lệ thụ
tinh ống nghiệm đạt 66,22% trong đó có 12,97% thụ tinh bất bình thường. Còn theo kết quả của Avery và cs (2003)[16] tỷ lệ thụ tinh bình thường là 56,11%, tuy nhiên tác giả này chỉ sử dụng tế bào trứng loại A, B để nuôi cấy và thụ tinh. Kết quả thụ tinh ống nghiệm phụ thuộc vào rất nhiều yếu tố, trong khuôn khổ thí nghiệm chúng tôi chỉ nghiên cứu ảnh hưởng của chất lượng tế
bào trứng đến kết quả thụ tinh ống nghiệm.
Ảnh hưởng của chất lượng tế bào trứng bò đến kết quả thụ tinh
Qua bảng 4.9 chúng ta thấy: có 774 tế bào trứng loại A đưa vào thụ tinh và có 456 tế bào đã thụ tinh đạt 58,65%; trong số 454 tế bào loại B đưa vào thụ tinh có 259 tế bào đã được thụ tinh đạt 57,82% và có 16,47% tế bào trứng loại C được thụ tinh. Không có sự sai khác có ý nghĩa giữa tế bào trứng loại A và B về tỷ lệ thụ tinh nhưng tỷ lệ thụ tinh của tế bào trứng loại C giảm rõ rệt.
Bảng 4.9. Ảnh hưởng của chất lượng tế bào trứng bò đến kết quả thụ tinh trong ống nghiệm
Chất lượng tế bào trứng Tế bào trứng đưa vào thụ tinh (n) Tế bào trứng đã thụ tinh (n) Tỷ lệ thụ tinh (% ± SE) Loại A 774 456 58,65 ± 0,39a Loại B 454 259 57,82 ± 0,33a Loại C 294 45 16,47 ± 1,2b (Các chữ cái cùng cột khác nhau có ý nghĩa ở mức p<0,05)
Kết quả thụ tinh trứng loại A của chúng tôi tương đương kết quả thụ
tinh của Nguyễn Hữu Đức và cs (2004)[4] tuy nhiên theo tác giả này có sự sai khác về tỷ lệ thụ tinh giữa trứng loại A và loại B (71,09% so với 48,98%). Tác giả này đánh giá kết quả thụ tinh thông qua số phôi phân chia ở giai đoạn 2-4 tế bào sau 48 giờ nuôi trong tủấm.
Kết quả thụ tinh ống nghiệm của các tế bào trứng có chất lượng khác nhau trong nghiên cứu của chúng tôi thấp hơn so với với kết quả của Khurana và Niemann (2000)[42], tỷ lệ thụ tinh bình thường của tế bào trứng loại I, II, III và IV tương ứng là 67,10%; 63,70%; 44,60% và 16,30% . Không có sự
khác biệt về tỷ lệ thụ tinh giữa tế bào trứng loại I và II song có sự khác biệt về
tỷ lệ thụ tinh giữa tế bào nhóm I, II và III, IV.
Tỷ lệ thụ tinh phụ thuộc nhiều vào chất lượng tế bào trứng trong đó sử
dụng những tế bào trứng loại A, B (I, II) cho tỷ lệ thụ tinh cao hơn hẳn khi sử
dụng tế bào trứng loại C (III, IV). Các trứng có chất lượng C đã đi vào chiều hướng thoái hoá từ trong buồng trứng nên khi nuôi chúng trong môi trường M-199 chúng vẫn không thể hồi phục và phát triển trở lại. Các trứng có chất lượng A và B sau khi nuôi thành thục sẽ được đưa vào môi trường thụ tinh bên trong chứa sẵn những tinh trùng có chất lượng tốt. Kết quả thụ tinh ống nghiệm và sau đó phân chia ở giai đoạn hai tế bào của tác giả Shioya và cs (1988)[60] thu được như sau: đối với lô trứng có chất lượng A và B tỷ lệ thụ
tinh đạt 71,40% đến 87,90%; tỷ lệ phân chia ở giai đoạn hai tế bào đạt 29,50%-63,70%. Đối với những trứng chất lượng loại C thì kết quả thụ tinh
ống nghiệm chỉ đạt 29,20% và tỷ lệ phân chia chỉ đạt 17,70%.
Theo Nguyễn Hữu Đức (2004)[4]: Thời gian thích hợp cho quá trình thụ
tinh ống nghiệm có thể từ 24-26 giờ với kết quả thụ tinh ống nghiệm thể hiện qua số phôi phân chia đạt khoảng 68-70%. Cũng theo tác giả này, kết quả thụ
tinh ống nghiệm sẽ đạt kết quả cao khi nồng độ tinh trùng bằng hoặc cao hơn 1 triệu/ml. Theo Nguyễn Văn Lý (2006)[8] tỷ lệ thụ tinh cao nhất đạt được ở
những tế bào trứng được thu từ nang trứng có đường kính > 5-8mm (66,89%). Ngoài ra tỷ lệ thụ tinh còn phụ thuộc vào rất nhiều nguyên nhân trong đó phải kể đến các nguyên nhân quan trọng như: kỹ thuật bảo quản tinh trùng, kỹ thuật hoạt hoá tinh trùng, xác định mật độ tinh trùng, thao tác nuôi cấy trong quá trình thụ tinh, đường kính của nang trứng, thời gian thụ tinh… Kỹ
thuật hoạt hoá và kiện toàn năng lực thụ tinh của tinh trùng rất phức tạp đòi hỏi độ chính xác cao từ khâu giải đông, pha loãng tinh trùng, ly tâm tinh trùng… Nếu một trong những khâu trên làm chưa tốt sẽ dẫn đến hiện tượng số
lượng tinh trùng chết tăng lên làm cho chất lượng tinh trùng giảm đi rõ rệt. Thụ tinh trong ống nghiệm với mật độ tinh trùng 6,25 x 106ml. Nếu xác định sai mật độ sẽ ảnh hưởng đến kết quả thụ tinh. Mật độ quá ít thì không đủ số
lượng để thụ tinh, ngược lại mật độ tinh trùng quá nhiều sẽ dẫn đến hiện tượng đa tinh trùng. Ngoài ra khâu bảo quản tinh trùng và pha chế môi trường cũng ảnh hưởng đến tỷ lệ thụ tinh. Bảo quản tinh trùng không đúng sẽ làm giảm chất lượng tinh trùng. Môi trường thụ tinh không đảm bảo sẽ ngăn trở sự
thụ tinh. Tất cả các nguyên nhân trên đều trực tiếp ảnh hưởng đến kết quả và tỷ lệ thụ tinh của tế bào trứng trong thụ tinh ống nghiệm.