Nguyờn lý: Mẫu ủược chưng bằng axit H2SO4 ủậm ủặc (98%) cựng chất
Trường ðại học Nụng nghiệp 1 - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ------ 53
ủược kiềm hoỏ bằng NaOH.NH3 giải phúng ra ủược nhận vào bỡnh chứa H2SO4 lượng H2SO4 dưủược chuẩn ủộ bằng NaOH.
Tiến hành:
Chưng mẫu: Cõn chớnh xỏc 0,5 - 1g mẫu cho vào bỡnh Kjeldahl. Sau ủú cho hỗn hợp xỳc tỏc (cứ 1g mẫu cho 3g xỳc tỏc), 5 - 10ml H2SO498%.
ðem ủốt trong tủ ủốt ủến khi mẫu cú màu xanh trong là ủược, khi ủun cứ 15 phỳt lắc một lần ủến khi mẫu khụng sủi bọt thỡ thụi lắc, tăng nhiệt ủộ
cho sụi ủều.
Chuẩn bị dung dịch mẫu: bỡnh chứa mẫu sau khi chưng xong, ủể nguội, rút vào 100ml nước cất. Cho nước theo thành bỡnh và cho toàn bộ dung dịch mẫu vào ống Kjeldahl.
Chuẩn bị bỡnh nhận: cho chớnh xỏc 30 hay 50ml dung dịch H2SO4 0,1N và nhỏ 3 giọt metyl ủỏ.
Lắp bỡnh Kjeldahl và bỡnh nhận vào hệ thống cất, tiến hành cất trong 4 phỳt.
Chuẩn ủộ: ủem bỡnh nhận chuẩn ủộ bằng dung dịch NaOH 0,1N ủó chuẩn ủộ. Song song với thớ nghiệm trờn cần làm với mẫu trắng sau ủú lấy hiệu chỉnh lượng NaOH 0,1N của thớ nghiệm chớnh
Tớnh kết quả: 0,0014 (V3- V4) x T N (%) =
m x 100
Trong ủú:
V3: thể tớch NaOH 0,1N ủể chuẩn ủộ mẫu thớ nghiệm (ml) V4: thể tớch NaOH 0,1N dựng ủể chuẩn ủộ H2SO4 dư (ml) m: khối lượng mẫu (g)
Trường ðại học Nụng nghiệp 1 - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ------ 54 Tớnh protein thụ (CP)
CP (%) = %N x 6,25
- Cỏc chỉ tiờu NDF, ADF, ADL ủược phõn tớch theo phương phỏp của Van Soest (1970)[49].
Tiến hành: cõn và ghi khối lượng tỳi xơ (W1), dựng bỳt chỡ ủể ủỏnh số
vào 2 mặt của tỳi xơ.
Cõn 0,5 - 1g mẫu ủó sấy khụ và ủược nghiền nhỏở mắt sàng 1 mm (m) cho vào tỳi xơ và dựng mỏy hàn ủể hàn miệng tỳi.
Chiết mỡ từ mẫu: cho 24 tỳi xơ chứa mẫu vào một bỡnh 500ml cú nắp.
ðổ ủầy aceton vào bỡnh phủ kớn cỏc tỳi và ủậy nắp ủảm bảo an toàn. Lắc nhẹ
10 lần và ủể ngõm trong 10 phỳt. Làm lại với aceton mới sau ủú ủể aceton và
ủặt cỏc tỳi ra khay men phơi trong 5 phỳt.
+ ðịnh lượng hàm lượng NDF (Neutal Detergent Fibre):
Chuẩn bị dung dịch cần chuẩn
Chuẩn bị dung dịch NDS (Neutral Detergent solution)
Xếp 24 tỳi xơ vào 8 khay rồi ủưa vào trục trong bỡnh làm xơ, mỗi khay 3 tỳi cũn khay cuối cựng ủể trống. Trờn 9 khay cú một trục sắt nằm ngang ủể ủố cỏc khay xuống.
ðổ dung dịch NDS ủó pha vào bỡnh ankom sao cho ngập cỏc tỳi xơ, nung trong 75 phỳt, sau ủú xả hoỏ chất ủi hết rồi rửa lại bằng nước sụi 3 lần, mỗi lần 5-10 phỳt. Sau ủú bỏ cỏc tỳi xơ ra cho rỏo nước, rửa lại bằng aceton 1 - 2 lần, mỗi lần 10 phỳt.
ðưa ra ủể rỏo nước và sấy ở 105 oC trong 2 giờ. Sau khi sấy ủưa cỏc tỳi vào bỡnh hỳt ẩm và cõn ủến khối lượng khụng ủổi (W2). Cho trong tỳi xơ vào (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Trường ðại học Nụng nghiệp 1 - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ------ 55 chộn nung ủó xỏc ủịnh khối (W3) và nung ở 550oC trong 3 giờ, lấy ra ủể nguội trong bỡnh hỳt ẩm và cõn ủến khối lượng khụng ủổi (W4) Tớnh kết quả: (W3 + W2) - W4 - (W1 x C1) NDF (%) = m x 100 Trong ủú: W1: khối lượng tỳi trống (g) W2: khối lượng của chộn sứ cú khối lượng xỏc ủịnh (g) W3: khối lượng của chộn sứ cú khối lượng xỏc ủịnh (g) W4: khối lượng của chộn + mẫu sau tro hoỏ (g)
m: khối lượng của mẫu (g)
C1: hệ số hiệu chỉnh của tỳi xơ (C1=0,972)
+ ðịnh lượng ADF (Acid detergent Fibre):
Chuẩn bị dung dịch ADS (acid detergent solution)
Cỏc bước trong quỏ trỡnh ủịnh lượng ADF tương tự như NDF, tuy nhiờn thay dung dịch NDS ở trờn bằng dung dịch ADS và trong thời gian 75 phỳt Tớnh kết quả: (W3 + W2) - W4 - (W1 x C1) ADF (%) = m x 100 Trong ủú: W1: khối lượng tỳi trống (g) W2: khối lượng sau sấy (g) W3: khối lượng của chộn sứ cú khối lượng xỏc ủịnh (g) W4: khối lượng của chộn + mẫu sau tro hoỏ (g)
Trường ðại học Nụng nghiệp 1 - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ------ 56 C1: Hệ số hiệu chỉnh của tỳi xơ (C1=0,972)
+ ðịnh lượng ADL (acid detergent lignin):
Hoỏ chất H2SO4 72%
Tiến hành: Cho tỳi xơ khi ủó xỏc ủịnh ủược hàm lượng NDF, ADF hoàn tất vào trong cốc thuỷ tinh, sau ủú ủổ dung dịch axit H2SO4 72% vào cốc thuỷ tinh sao cho axit ngập tỳi xơ, ngõm trong 3 trong giờ, mang cỏc tỳi xơ này ra cõn lấy khối lượng và cho vào chộn sứ ủó ủược cõn ủến khối lượng khụng ủổi. Cho chộn sứ ủựng mẫu vào lũ nung ở nhiệt ủộ 550 – 600 oC trong 30 phỳt. ðể nguội 45 - 60 phỳt, cho chộn sau nung vào bỡnh hỳt
ẩm sau ủú bỏ ra cõn khối lượng. Tớnh kết quả: (W3 + W2) - W4 - (W1 x C1) ADL (%) = m x 100 Trong ủú: W1: khối lượng tỳi trống (g) W2: khối lượng sau sấy (g) W3: khối lượng của chộn sứ cú khối lượng xỏc ủịnh (g) W4: khối lượng của chộn + mẫu sau tro hoỏ (g)
m: khối lượng của mẫu (g)
C1: hệ số hiệu chỉnh của tỳi xơ (C1=0,972)