- Chuẩn bị mẫu hạt bụng để phõn tớch HPLC: Hạt bụng của cỏc giống nghiờn cứu được tỏch loại vỏ, phần nhõn được nghiền thành bột đồng nhất bằng
Chương 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Phõn lập gossypol từ hạt bụng
3.1.1. Chiết xuất gossypol từ hạt bụng
Hạt bụng Gossypium barbadense L., giống HD139, được nghiền bằng mỏy xay và rõy ở cỏc cỡ lần lượt 1 mm và 0,2 mm để tỏch phần nhõn hạt ra khỏi phần vỏ và xơ bụng. Sau quỏ trỡnh này chỳng tụi thu được nhõn hạt bụng dưới dạng bột mầu trắng xỏm (độ ẩm 7,9%) với cỏc tuyến chất mầu cú thể quan sỏt được bằng mắt thường. Khối lượng nhõn thu được bằng 62,6% tổng khối lượng hạt.
100 g nhõn hạt bụng HD139 được chiết trong 300 ml ete dầu (nhiệt độ sụi 300C-600C) ở nhiệt độ 60ºC trờn bếp cỏch thủy bằng mỏy soxhlet cho đến khi dịch chiết ete dầu trở nờn khụng mầu. Điều này đạt được sau khoảng 24 h chiết. Cuối giai đoạn này, bột hạt bụng được lấy ra, làm khụ trong tủ sấy chõn khụng ở nhiệt độ phũng.Dịch chiết ete dầu được thu hồi để lấy dung mụi trờn mỏy cất quay dưới ỏp suất giảm ở nhiệt độ 40ºC đến tối đa, thu được 23,5 g dầu mầu nõu. Bột nhõn hạt bụng sau khi đó được chiết loại dầu được tiếp tục chiết bằng 300 ml DEE ở nhiệt độ 40ºC trong 24 h trờn mỏy soxhlet. Dịch chiết DEE được lọc, thu hồi dung mụi trờn mỏy cất quay dưới ỏp suất giảm ở nhiệt độ phũng, thu được 2,07 g cao chiết DEE mầu nõu.
Cao chiết DEE được định tớnh sự cú mặt của gossypol bằng phương phỏp phổ tử ngoại và SKLM. Kết quả cho thấy, phổ tử ngoại của phần cao chiết DEE cú hỡnh dạng và cực đại hấp thụ tại 368 nm, phự hợp với hỡnh dạng và cực đại hấp thụ của gossypol đó được cụng bố trước đú (365 nm) [17]. Mặt khỏc, kết quả SKLM cao chiết DEE hệ dung mụi: n-hexan/ethyl acetate/acetic acid = 9/1/0,4 cho 4 vết chớnh trong đú chỉ 1 vết (Rf=0,67) cú mầu đỏ với thuốc thử H2SO4 20% trong EtOH và mầu xanh đậm với thuốc thử là FeCl3. Từ kết quả trờn chỳng tụi bước đầu khẳng định rằng trong dịch chiết DEE cú chứa gossypol với Rf = 0,67
Ete dầu (300C-600C) là một dung mụi kộm phõn cực, do đú được dựng để loại cỏc tạp chất kộm phõn cực trong nhõn hạt bụng trong đú chủ yếu là dầu bộo đó được xỏc định là chiếm khoảng từ 13-24% trong nhõn hạt bụng. Để chứng minh gossypol khụng bị mất đi trong quỏ trỡnh loại tạp bằng ete dầu, chỳng tụi tiến hành định tớnh gossypol trong phần dịch chiết ete dầu bằng phổ tử ngoại (đo trong CHCl3). Phổ tử ngoại của dịch chiết ete dầu khụng thấy đỉnh hấp thụ cực đại ở bước súng 365 nm hay ở cỏc bước súng lõn cận (đỉnh đặc trưng cho nhúm -CHO của gossypol). Điều này đó khẳng định tớnh đỳng đắn khi lựa chọn ete dầu để loại tạp chất.
Cao DEE sau đú được tỏch lấy gossypol bằng sắc ký cột hoặc bằng kết tinh. Sơ đồ quy trỡnh chiết xuất và tinh chế gossypol được trỡnh bày trong hỡnh 3.1.
Hạt bông Gossypium barbadense
Nghiền nhỏ
Rây 1 mm rồi 0,2 mm Bột nội nhũ hạt bông
Bảo quản ở nhiệt độ thấp -18°C Loại dầu bằng chiết soxhlet
dùng dung môi ete dầu Bột nội nhũ hạt bông đã loại dầu
Dầu hạt bông
Chiết bằng diethyl ether (soxhlet) Cất loại dung môi dưới áp suất giảm Cao chiết diethyl ether
+ Et2O
+ Acetic acid glacial
Lọc, rửa bằng ete dầu