- Chuẩn bị mẫu hạt bụng để phõn tớch HPLC: Hạt bụng của cỏc giống nghiờn cứu được tỏch loại vỏ, phần nhõn được nghiền thành bột đồng nhất bằng
Chương 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Phõn lập gossypol từ hạt bụng
3.2.1. Điều chế (±)-gossypol-L-phenylananinol dienamine
Do gossypol cú 2 nhúm aldehyde cú khả năng phản ứng hầu như toàn lượng với cỏc amine bậc 1 để tạo thành cỏc bazơ Schiff tương ứng, chỳng tụi đó sử dụng phương phỏp tạo bazơ Schiff với amine bất đối là L-phenylalaninol (hay (S)- phenylalaninol) để tỏch riờng 2 đồng phõn (+)-gossypol và (-)-gossypol từ hỗn hợp (±)-gossypol. Sơ đồ phản ứng: OH CHO HO HO OH CHO OH OH OH HO HO OH OH N N OH NH2 OH L-Phenylalaninol CH3CN, 25°C, tránh ánh sáng môi trường khí nitơ
(±)-Gossypol (±)-Gossypol-L-phenylananinol dienamine
OH
HO
Hỡnh 3.6. Phản ứng tổng hợp (±)-gossypol-L-phenylananinol dienamine
(±)-G-AA (0,406 g; 0,70 mmol) được đưa vào bỡnh cầu dung tớch 25 ml. Thờm vào lần lượt 6 ml acetonitrile và L-phenylalaninol (0,233 g, 1,54 mmol). Hỗn hợp phản ứng được khuấy bằng que khuấy từ ở nhiệt độ phũng trong điều kiện trỏnh ỏnh sỏng và trong mụi trường khớ nitơ.
Sau mỗi 0,5 h, một lượng nhỏ dung dịch phản ứng được lấy ra và kiểm tra bằng sắc ký lớp mỏng trờn bản mỏng silica gel trỏng sẵn GF254 với hệ dung mụi khai triển là n-hexan/EtOAc = 6/4. Sau 30 phỳt, hỗn hợp phản ứng cho 4 vết, trong đú căn cứ vào Rf cho thấy chất đầu gossypol đó phản ứng hết. Tại cỏc thời điểm 1 h; 1,5 h; 2 h; 2,5 h hỗn hợp phản ứng cho 4 vết trờn sắc ký lớp mỏng. Đến thời điểm 3 h, trờn sắc ký đồ chỉ cũn 2 vết với Rf = 0,58 và Rf = 0,20. Kộo dài phản ứng thờm 0,5 h nữa sắc ký đồ vẫn khụng thay đổi. Dừng phản ứng. Hỗn hợp này được chuyển vào bỡnh chiết quả lờ, thờm 50 ml nước cất và chiết với 50 ml DCM. Quỏ trỡnh chiết với DCM được lặp lại 3 lần, pha hữu cơ được gộp lại và rửa bằng nước để loại bỏ amine dư, làm khan bằng Na2SO4 và thu hồi dung mụi dưới ỏp suất giảm. Kết quả chỳng tụi thu được 0,549 g sản phẩm thụ dưới dạng chất rắn mầu vàng nõu.
Sản phẩm phản ứng gồm 2 vết cú Rf cỏch xa nhau tương ứng với 2 base Schiff là đồng phõn diastereomer của nhau là (-)-gossypol-L-phenylalaninol dienamine và (+)-gossypol-L-phenylalaninol dienamine được chỳng tụi phõn tỏch và tinh sạch bằng sắc ký cột với chất hấp phụ là silica gel. Kết quả chỳng tụi thu được 0,263 g sản phẩm (-)-gossypol-L-phenylalaninol dienamine (hiệu suất 95%, [α]D = - 7000 (c 0,1, CHCl3)) và 0,231 g (+)-gossypol-L-phenylalaninol dienamine (hiệu suất 83,9%, [α]D = + 2700 (c 0,037, CHCl3)). Sản phẩm được kiểm tra lại bằng phổ khối (negative): [M-H]- (ESI) = 783,4 (Phụ lục 5)
Như vậy, sử dụng amine bất đối L-phenylalaninol, hiệu suất phản ứng tạo bazơ Schiff chỳng tụi thu được gần như toàn lượng (99,6%). Điều quan trọng hơn là do sự khỏc biệt lớn về độ phõn cực (Rf = 0,58 và Rf = 0,20) nờn hai đồng phõn diastereomer
này cú thể phõn tỏch rất tốt bằng sắc ký cột sillica gel. Theo đú, tớnh cả giai đoạn phản ứng tạo bazơ Schiff và phõn tỏch qua cột, hiệu suất thu hồi (-)-gossypol-L- phenylalaninol dienamine đạt 95% và đối với (+)-gossypol-L-phenylalaninol dienamine là 83,9% khi hỗn hợp ban đầu là gossypol racemic. Đõy là cơ sở để chỳng tụi cú thể điều chế cỏc đồng phõn gossypol tinh khiết quang học với hiệu suất cao.
3.2.2. Điều chế (-)-gossypol và (+)-gossypol
Bằng cỏch thuỷ phõn cỏc dẫn xuất bazơ Schiff tinh khiết quang học chỳng tụi thu được sản phẩm (-)-gossypol và (+)-gossypol tinh khiết tương ứng.