- Cỏc húa chất và dung mụi dựng cho tổng hợp, tinh chế, đo cỏc loại phổ và thử độc tớnh tế bào (MTT assay) được mua của hóng Merck hoặc Sigma.
2.2.3.3.Xỏc định độ tinh khiết của gossypol acetic acid
Sản phẩm G-AA trong quỏ trỡnh nghiờn cứu tinh chế gossypol bằng phương phỏp kết tinh được được xỏc định độ tinh khiết bằng quang phổ tử ngoại dựa theo phương phỏp được xõy dựng bởi Guangfeng Jia và cộng sự [21].
- Xõy dựng đường chuẩn: 50 mg G-AA đối chiếu được đưa vào bỡnh định mức 100 ml và định mức đến 100 ml bằng chloroform để thu được dung dịch gốc với nồng độ 0,5 mg/ml (m/v). Tiếp theo, lấy 50, 100, 150, 200, 250 àl dung dịch gốc ở trờn bằng micropipette đưa vào bỡnh định mức 5 ml và định mức lần lượt thành cỏc dung dịch cú nồng độ 5, 10, 15, 20, 25 àg/ml bằng chloroform. Cỏc dung dịch chuẩn thu được sau đú được đo cường độ hấp thụ ở bước súng 365 nm trờn mỏy quang phổ UV-Visible Spectrophotometer Cary 1E (Varian), đo lặp lại 3
lần. Qua đú, chỳng tụi xõy dựng được đường chuẩn cú phương trỡnh là: y = 0,0403x + 0,0395 (R2=0,0085) với x là nồng độ G-AA (àg/ml), y là cường độ hấp thụ ở bước súng 365 nm.
- Đỏnh giỏ độ tinh khiết của mẫu: Độ khiết của sản phẩm G-AA thu được trong quỏ trỡnh kết tinh từ cao DEE được xỏc định bằng phương phỏp UV dựa theo phương trỡnh đường chuẩn được xõy dựng ở trờn. Dung dịch mẫu thử được chuẩn bị ở nồng độ vào khoảng 15 àg/ml G-AA trong CHCl3. Đo độ hấp thụ ở bước súng 365 nm. Độ tinh sạch của sản phẩm G-AA được tớnh là tỷ lệ giữa nồng độ của G- AA tinh khiết khi được xỏc định theo đường chuẩn và nồng độ của mẫu thử.
Hỡnh 2.1. Đường chuẩn G-AA bằng phương phỏp UV