- Chuẩn bị mẫu hạt bụng để phõn tớch HPLC: Hạt bụng của cỏc giống nghiờn cứu được tỏch loại vỏ, phần nhõn được nghiền thành bột đồng nhất bằng
3.2.2.2.Điều chế (+)-gossypol
Chương 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Phõn lập gossypol từ hạt bụng
3.2.2.2.Điều chế (+)-gossypol
Điều chế (+)-gossypol dựa trờn phản ứng thuỷ phõn bazơ Schiff tương ứng là (+)- gossypol-L-phenylalaninol dienamine. Phản ứng thuỷ phõn được tiến hành trong mụi trường acid HCl và acetic acid với cỏc điều kiện tương tự như phản ứng thuỷ phõn dẫn xuất (-)-gossypol-L-phenylalaninol dienamine để điều chế (-)-gossypol. Cụ thể như sau:
(+)-Gossypol-L-phenylalaninol dienamine (0,285 g; 0,36 mmol) được đưa vào bỡnh cầu dung tớch 25 ml. Thờm vào 10,6 ml diethyl ether, 1,5 ml acetic acid và 0,45 ml HCl đặc (37%). Hỗn hợp phản ứng được đun hồi lưu trong điều kiện trỏnh ỏnh sỏng và trong mụi trường khớ nitơ. Theo dừi sự tiến triển của phản ứng bằng sắc ký lớp mỏng với hệ dung mụi khai triển là n-hexane/EtOAc = 6/4 (soi UV 254 nm). Sau 30 phỳt phản ứng, sắc ký đồ cho 3 vết, trong đú 1 vết là (+)-gossypol (Rf = 0,67) đó được tạo thành và chất đầu chưa phản ứng hết (Rf = 0,20), chất trung gian là sản phẩm thuỷ phõn 1 nhúm enamine của bazơ Schiff (Rf = 0,43). Sau 1 h; 1,5 h; 2 h; 2,5 h phản ứng, dựa trờn sắc ký lớp mỏng chỳng tụi nhận thấy phản ứng tiến triển theo hướng lượng sản phẩm (+)-gossypol tăng lờn cựng với sự giảm dần lượng chất đầu và chất trung gian. Sau 3 h phản ứng, sắc ký đồ cho thấy chất đầu cũng như sản phẩm trung gian đó phản ứng hết, bản mỏng chỉ xuất hiện duy nhất tương ứng với (+)-gossypol. Dừng phản ứng.
Phản ứng sau khi dừng được xử lý tương tự như phản ứng thuỷ phõn bazơ Schiff của (-)-gossypol, cuối cựng chỳng tụi thu được 0,407 g (+)-gossypol thụ dưới dạng chất rắn mầu nõu. Sau quỏ trỡnh tinh chế bằng phương phỏp sắc ký cột với chất hấp phụ silica gel chỳng tụi thu được 0,150 g (+)-gossypol dưới dạng chất rắn mầu vàng. Hiệu suất tỏch (+)-gossypol từ base Schiff sau 2 giai đoạn thuỷ phõn và sắc ký cột là 79,5%
Một số thụng số của sản phẩm (+)-gossypol: [α]D= +3290 (c 0,19; CHCl3) (lit. [α]D + 3480 (c 0,05; CH3OH) [32] Điểm chảy :175-177ºC UV (λmax; CHCl3): 242, 288, 364 nm. IR (KBr, cm-1): ν = 3506, 3429 (-OH), 2971, 2886 (-COOH), 1710, 1752 (C=O), 1617 (C=C), 1442, 1339, 1295 (CAr-O), 1172, 1065, 845, 774, 644, 480. (Phụ lục 10) 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 14,93 (s, 2H, -OH); 11,08 (s, 2H, -CHO); 7,76 (s, 2H, -Ar-H); 6,34 (s, 2H, -OH); 6,16 (s, 2H, -OH); 3,88 (br s, 2H, -CH(CH3)2); 2,15 (s, 6H, -Ar-CH3); 1,54 (s, 12H, -CH(CH3)2) ppm. (Phụ lục 11)
13C MNR (500 MHz, CDCl3): δ = 199,3; 155,9; 150,6; 143,3; 134,2; 133,8; 129,7; 117,5; 116,1; 114,7; 111,7; 27,9; 20,3; 20,2 ppm. (Phụ lục 12)