- Cỏc húa chất và dung mụi dựng cho tổng hợp, tinh chế, đo cỏc loại phổ và thử độc tớnh tế bào (MTT assay) được mua của hóng Merck hoặc Sigma.
2.2.5.1.Điều chế bazơ Schiff gossypol-L-phenylalaninol dienamine
(±)-G-AA (0,406 g; 0,70 mmol) được đưa vào bỡnh cầu dung tớch 25 ml. Thờm vào đú lần lượt 6 ml acetonitrile và L-phenylalaninol (0,233 g, 1,54 mmol). Hỗn hợp này được khuấy ở nhiệt độ phũng trong điều kiện trỏnh ỏnh sỏng và trong mụi trường khớ nitơ. Theo dừi tiến triển của phản ứng bằng sắc ký lớp mỏng với hệ dung mụi khai triển n-hexane/EtOAc = 7/3. Sau khi phản ứng kết thỳc (gossypol phản ứng hết), hỗn hợp này được chuyển vào bỡnh chiết quả lờ và thờm vào đú 50 ml nước cất và chiết bằng 50 ml DCM. Quỏ trỡnh chiết này được lặp lại 3 lần. Gộp cỏc dịch chiết DCM rồi làm khan bằng Na2SO4 khan. Lọc bỏ Na2SO4 qua giấy lọc,
phần dịch chiết DCM sau đú được cất loại dung mụi bằng mỏy cất quay dưới ỏp suất giảm thu được sản phẩm là hỗn hợp hai đồng phõn diastereomer bazơ Schiff của gossypol.
2.2.5.2. Phõn tỏch (-)-gossypol-L-phenylalaninol dienamine và (+)-gossypol-L- phenylalaninol dienamine phenylalaninol dienamine
Hỗn hợp đồng phõn diastereomer (-)-gossypol-L-phenylalaninol dienamine và (+)-gossypol-L-phenylalaninol dienamine được phõn tỏch trờn cột sắc ký sử dụng chất hấp phụ silica gel pha thường cỡ hạt 0,04-0,063 mm. Hệ dung mụi rửa giải là hỗn hợp n-hexan/EtOAc cú độ phõn cực tăng dần (100/0 – 40/60).
Quỏ trỡnh được theo dừi bằng sắc ký lớp mỏng sử dụng bản mỏng trỏng sẵn GF254 (Merck) với hệ dung mụi khai triển là n-hexane/ethyl acetate = 5/5, soi bản mỏng trờn mỏy soi UV (CAMAG) tại bước súng 254 nm. Cỏc phõn đoạn cú cỏc vết cú Rf giống nhau được gộp lại và thu hồi dung mụi dưới ỏp suất giảm. Cỏc phõn đoạn chứa chất tinh sạch (1 vết trờn SKLM) được đem kiểm tra sơ bộ cấu trỳc bằng phương phỏp phổ khối lượng và đo độ quay cực.