- Chuẩn bị mẫu hạt bụng để phõn tớch HPLC: Hạt bụng của cỏc giống nghiờn cứu được tỏch loại vỏ, phần nhõn được nghiền thành bột đồng nhất bằng
Chương 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Phõn lập gossypol từ hạt bụng
3.1.3.3. Kết tinh lại sản phẩm G-AA thụ
Sản phẩm G-AA thụ (sản phẩm kết tinh lần 1) được kết tinh lại nhiều lần để thu được cỏc sản phẩm G-AA tinh khiết. 10 g sản phẩm G-AA thụ từ quỏ trỡnh nghiờn cứu kết tinh nờu trờn sau khi kết tinh lần 2 thu được 7,1 g (hiệu suất 71%), kết tinh lại lần 3 thu được 6,2 g (hiệu suất 87%), kết tinh lại lần 4 thu được 5,6 g G-AA tinh khiết cú mầu vàng sỏng (hiệu suất 90%, độ tinh khiết > 98% theo diện tớch pic HPLC). Như võy, hiệu suất của cả quỏ trỡnh tinh chế (3 lần kết tinh lại) từ sản phẩm G-AA thụ là 56% .
Sản phẩm gossypol acetic acid tinh sạch cho một vết duy nhất cú Rf = 0,67 trờn SKLM silica gel GF254 với hệ dung mụi khai triển n-hexane/ethyl acetate/acetic acid = 9/1/0,4; cú điểm chảy 178-180ºC và phổ UV (λmax, CHCl3): 242, 288, 363 nm phự hợp với cỏc số liệu đó thụng bỏo trước đõy của G-AA. Kết quả phõn tớch trờn HPLC cũng cho thấy sản phẩm cú độ tinh khiết rất cao, sắc ký đồ ở bước súng 254 nm cho một pic duy nhất cú thời gian lưu là 7,9 phỳt. Sản phẩm thu được từ phương phỏp kết tinh cú độ tinh khiết tương đương với sản phẩm được tinh chế bằng phương phỏp sắc ký cột trờn silica gel (HPLC tớnh theo diện tớch pic ở bước súng 254 nm).
Như vậy, chỳng tụi đó chiết xuất và tinh chế thành cụng G-AA từ giống hạt bụng HD139 thuộc loài Gossypium barbadense.L. Theo phương phỏp chiết soxhlet, khi chỳng tụi nõng quy mụ lờn 1 kg nhõn hạt/mẻ chỉ cần 3 lớt dung mụi mỗi loại. Từ kết quả của quỏ trỡnh tối ưu húa điều kiện kết tinh, gossypol từ cao chiết DEE được kết tinh dưới dạng G-AA trong 30 ml DEE và 5 ml acetic acid, thu được 5,67 g sản phẩm G-AA kết tinh lần 1. Sản phẩm G-AA này sau quỏ trỡnh tinh chế bằng cỏch kết tinh lại theo phương phỏp nờu trờn, cuối cựng chỳng tụi thu được 3,2 g G-AA tinh khiết (>98% tớnh theo diện tớch pic HPLC). Theo đú hiệu suất của cả quỏ trỡnh phõn lập G-AA từ nhõn hạt bụng là 0,32%.
Phương phỏp chiết soxhlet được chỳng tụi sử dụng đó cho phộp chiết được gossypol với thể tớch dung mụi ete dầu và DEE ớt hơn nhiều so với việc ỏp dụng phương phỏp của Carruth. Theo Nguyễn Kim Phi Phụng và cộng sự, để chiết 1,5
kg bột nhõn hạt bụng G. hirsutum theo phương phỏp Carruth cần tới 15 lớt ete dầu và 12 lớt DEE trong cỏc thiết bị chiết lớn. Mặt khỏc, để kết tinh G-AA, cỏc tỏc giả này cần phải sử dụng tới 500 ml DEE và 400 ml acetic acid ở nhiệt độ thấp (trong tủ lạnh). Hiệu suất của quỏ trỡnh kết tinh G-AA mà tỏc giả trờn thu được là 0,45% G-AA kết tinh lần 1 và 0,28% sản phẩm G-AA kết tinh lần 3 [39]. Như vậy, quy trỡnh phõn lập gossypol từ hạt bụng G. barbadense HD139 mà chỳng tụi đó tỡm ra khỏ đơn giản và tiết kiệm húa chất mà vẫn cho hiệu suất cao. Mặt khỏc, quy trỡnh này khi được ỏp dụng để phõn lập gossypol từ hạt của một số giống khỏc của loài
G. barbadense, cũng thu được kết quả khả quan. Cụ thể, từ 100 g bột hạt bụng của 2 giống HD108 và HD208 sau quỏ trỡnh phõn lập theo quy trỡnh nờu trờn chỳng tụi cũng thu được G-AA tinh sạch (sản phẩm kết tinh lần thứ 4) với hiệu suất tương ứng là 0,28% và 0,32%.