trường rỉ đường và dịch chiết dứa bằng phương pháp đo độ đục:
Nguyên tắc phương pháp đo độ: Khi trong pha lỏng chứa các phần tử khơng tan sẽ tạo thành hệ huyền phù và gây ra độ đục cản ánh sáng, làm phân tán chùm ánh sáng tới. Tế bào vi sinh vật là một thực thể nên khi hiện diện trong mơi trường cũng làm đục mơi trường. Độ đục của huyền phù sẽ tỉ lệ với mật độ tế bào.
Xác định đường chuẩn mối quan hệ giữa OD và mật độ tế bào:
Vi khuẩn L. acidophilus được nuơi cấy trong mơi trường MRS sau 16 giờ nhiệt độ 370 C, dịch nuơi cấy được pha lỗng theo bảng sau:
Bảng 3.1: Số liệu dựng đường chuẩn OD và mật độ tế bào L. acidophilus
Các ống được đo ở bước sĩng 610 nm, ống đối chứng tương ứng 10 ống nhưng thay thế mẫu cĩ vi khuẩn bằng mẫu MRS broth khơng cĩ cấy vi khuẩn và số ml lấy tương ứng với mẫu.
Lấy 1ml dịch nuơi cấy trên xác định mật độ tế bào trong bằng phương pháp đếm khuẩn lạc.
Dựng đường chuẩn biểu hiện mối quan hệ giữa OD và mật độ tế bào.
Trong thí nghiệm tối ưu hĩa mơi trường lên men vi khuẩn Lactocbacillus acidophilus, tơi chọn hai mơi trường để khảo sát là mơi trường rỉ đường và mơi trường dịch chiết dứa:
Mơi trường rỉ đường [18]:
100 ml rỉ đường + 1ml H2SO4 20% đun sơi cách thủy 20 phút
10 g rỉ đường thủy phân + 0.5 g cao nấm men định mức vừa đủ 100 ml
Chỉnh pH đến 6.5 bằng KOH 4M
Hấp khử trùng 1210 C, 15 phút
Cấy giống 1%, ủ 37 0 C , sau 16 h đo quang ở bước sĩng 610 nm
Mơi trương dịch chiết dứa:
Dịch chiết dứa đun sơi 5 phút, lọc
100ml dịch chiết dứa + 0.5 g cao nấm men
Oáng số 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Số ml mẫu cĩ vi
khuẩn (ml) 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 Số ml nưốc cất (ml) 9.5 9 8.5 8 7.5 7 6.5 6 5.5 5
Hấp khử trùng 121 C, 15 phút
Cấy giống 1%, ủ 370 C, sau 16 giờ đo quang bước sĩng 610nm.