chiết dứa tối ưu trong quá trình lên men.
Mơi trường dịch chiết dứa và mơi trường MRS được chuẩn bị tương tự như mục 3.2.3 , tiến hành đo pH của hai mơi trường tại thời điểm 5, 8, 16, 18, 20, 24 giờ.
3.2.5. Xác định hàm lượng đường giảm theo thời gian của hai mơi trường MRS và dịch chiết dứa tối ưu MRS và dịch chiết dứa tối ưu
Trong mơi trường dịch chiết dứa chủ yếu là fructose và surose, đây là hai loại đường mà L. acidophilus đều sử dụng tốt. Để xác định đường tổng ta chuyển đường đơi về đường đơn bằng HCl 2M và sử dụng phương pháp định lượng đường khử để xác định hàm lượng đường cịn lại trong quá trình lên men.
Nguyên tác xác định đường khử: Phương pháp dựa trên trên cơ sở phản ứng tạo màu giữa đường khử với thuốc thử axit dinitrosalicylic ( DNS ). Cường độ màu của hỗn hợp phản ứng tỷ lệ với nồng độ đường khử trong một phạm vi nhất định.
Dựng đường chuẩn glucose [5]:
Dựng đường chuẩn glucose: Cân 100 mg glucose hịa tan vào 100 ml nước cất để đạt nồng độ 1mg/ml, chuẩn bị 6 ống nghiệm và lấy các chất theo thứ tự sau:
Bảng 3.5: Số liệu dựng đường chuẩn glucose
Oáng số 0 1 2 3 4 5
Nồng độ glucose (mg/ ml) 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5
Nước cất (ml) 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5
DNS (ml) 2 2 2 2 2 2
Lắc đều ống nghiệm, đun sơi cách thủy 15 phút, làm nguội rồi đo mật độ quang ở bước sĩng 540 nm. Oáng số 0 là ống đối chứng.
Xác định đường chuẩn biểu hiện mối quan hệ giữa nồng độ đường và OD
Mơi trường MRS và dịch chiết dứa tối ưu chuẩn bị tương tự như mục 3.2.3 và xác định hàm lượng đường tại 5, 8, 16, 18, 20, 24 giờ.
Tiến hành:
25 ml dịch mơi trường + 2.5 ml HCl 2M đun sơi 5 phút
Trung hịa bằng NaOH 10% chỉ thị phenolphthalein
Mẫu pha lỗng sao cho OD khơng vượt đường chuẩn
2 ml DNS + 1ml mẫu pha lỗng, đun sơi 15 phút
Để nguội đo OD 540 nm
Dựa vào đường chuẩn glucose xác định hàm lượng đừơng tổng giảm theo thời gian.