Định lượng H2O2 trong dịch lên men:
Nguyên tắc: Trong mơi trường acid KI sẽ chuyển thành HI, khi cĩ sự
hiện diện H2O2 thì H2O2 sẽ oxy hĩa HI thành iode tự do làm dung dịch chuyển sang màu vàng. Sử dụng sodium thiosulfate chuẩn lượng iode tạo thành với chỉ thị là hồ tinh bột 0.1%.
Tính tốn lượng H2O2: 1ml sodium sulfate 0.05M tương đương với 1ml H2O2 25mM.
Tiến hành:
10 ml dịch nuơi cấy + 10ml H2SO4 1M + 2ml KI 5% + 1ml molybdenic acid
Chuẩn Iode tạo thành bằng sodium thiosulfate 3 giọt chỉ thị hồ tinh bột 0.1% đến khi mất màu xanh.
Định lượng acid lactic :
Nguyên tắc: Dùng dung dịch kiềm (NaOH hoặc KOH) để trung hịa
lượng acid trong dịch lên men.
Tiến hành: Lấy 10 ml dịch lên men cho vào bình định mức 250ml và định
mức đủ 250 ml, lấy 20ml nước cất cho vào bình tam giác 100ml và cho nước cất đủ 50 ml, thêm 5 giọt thuốc thử phenolphtalein. Chuẩn độ bằng NaOH 0.1N đến khi dung dịch chuyển sang màu hồng nhạt.
Hàm lượng acid = (g/l) n : số ml NaOH 0.1N dùng trung hịa acid
250: dung tích bình định mức (ml) 10: thể tích mẫu nguyên (ml)
20: thể tích mẫu đã pha lỗng mang chuẩn độ(ml)
Để xác định khả năng ức chế của bacteriocins sinh ra trong mơi tường MRS
và dịch chiết dứa tối ưu đối với E. coli sau khi định lượng H2O2 và acid tiến hành
như sau:
Dịch nuơi cấy E. coli nuơi cấy tăng sinh qua 21 giờ, pha lỗng 10-2
Lấy 1ml
Mơi trường MRS hoặc mơi trường dịch chiết dứa tối ưu bổ sung lượng H2O2 và acid tương ứng với mơi trường MRS hoặc dịch chiết dứa sau khi lên men
Lấy 1ml
Cho vào 8ml MT BHI
Ủ hiếu khí 21h, 370C
Đo độ đục 600nm
Oáng đối chứng là mơi trường BHI khơng cấy E. coli