- Dựa trên các kết quả ựạt ựược chúng tôi bước ựầu ựề xuất quy trình sản xuất GlcNAc sử dụng hai enzyme tái tổ hợp endochitinase và βhexosaminidasẹ
PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.3.1. Xác ựịnh nhiệt ựộ tối ưu và ựộ bền nhiệt của endochitinase
Nhiệt ựộ là yếu tố quan trọng nhất ảnh hưởng ựối với hoạt tắnh của enzymẹ Vận tốc phản ứng do enzyme xúc tác chỉ tăng theo nhiệt ựộ trong một giới hạn xác ựịnh, mà ở ựó các phân tử enzyme vẫn còn bền chưa bị biến tắnh. Mỗi enzyme ựều có một khoảng nhiệt ựộ tối ưu (hay nhiệt ựộ tối thắch) riêng, nhiệt ựộ ứng với hoạt tắnh cao nhất của enzyme ựược gọi là nhiệt ựộ tối thắch (optimum) kắ hiệu là: topt. Khi chưa ựạt ựến nhiệt ựộ tối ưu thì sự gia tăng nhiệt ựộ sẽ làm tăng tốc ựộ phản ứng của enzymẹ Tuy nhiên, khi ựã qua nhiệt ựộ tối ưu sự gia tăng nhiệt ựộ sẽ làm giảm tốc ựộ phản ứng, và có thể enzyme bị mất hoàn toàn hoạt tắnh [48].
4.3.1.1. Nhiệt ựộ tối ưu của endochitinase
Kết quả xác ựịnh nhiệt ựộ tối thắch của endochitinase ựược thể hiện trong hình 4.5.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 39
Hình 4.5: đồ thị ảnh hưởng của nhiệt ựộ ựến hoạt tắnh endochitinase
Qua ựồ thị 4.5 nhận thấy từ 30oC ựến 50oC hoạt tắnh của enzyme tăng dần, ựến 50oC hoạt tắnh của enzyme ựạt cao nhất và khi tiếp tục tăng nhiệt ựộ phản ứng lên 55oC thì hoạt tắnh của enzyme bắt ựầu giảm. Tuy nhiên, ở nhiệt ựộ phản ứng 45oC và 55oC kết quả xác ựịnh hoạt tắnh enzyme khác không ựáng kể so với hoạt tắnh của enzyme ở 50oC, như vậy có thể kết luận là khoảng nhiệt ựộ hoạt ựộng tối thắch của endochitinase là từ 45 Ờ 55oC. Ở nhiệt ựộ nhỏ hơn 37oC và lớn hơn 60oC hoạt tắnh của enzyme giảm mạnh so với khoảng nhiệt ựộ tối thắch (ựến 70oC chỉ ựạt 6.518%), vì vậy trong sản xuất không nên ựặt phản ứng thủy phân colloidal chitin bởi endochitinase trong ựiều kiện nhiệt ựộ này vì như vậy tốc ựộ phản ứng chậm hơn ảnh hưởng ựến hiệu suất thủy phân.
4.3.1.2. độ bền nhiệt của endochitinase
Tiến hành khảo sát ựộ bền nhiệt của endochitinase ở 37 0C và 50 0C ở ựiều kiện pH 6. Kết quả xác ựịnh ựộ bền nhiệt ựược thể hiện trong hình 4.6.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 40
Hình 4.6: độ bền nhiệt của endochitinase ở 37oC và 50oC
Từ hình 4.6 nhận thấy endochitinase tinh sạch bền ở nhiệt ựộ 37 0C và 50 0C trong thời gian dàị Hoạt tắnh của enzyme vẫn còn lại 60,931 % sau 14 ngày ở 37 0C và 51,204 % ở 50 0C sau 8 ngày ở 50 0C so với thời ựiểm t = 0. Như vậy thời gian bán hủy (t50) của endochitinase tại 37 0C là khoảng 15 ngày của 50 0C khoảng 8 ngàỵ Nghiên cứu của Nguyễn và cộng sự (2012) cũng cho thấy endochitinase tái tổ hợp của chủng Bacillus lichenifomis DSM 13 biểu hiện trong Lactobacillus plantarum có thời gian bán hủy ở ở 37 0C là 14 ngày và ở 50 0C là 7 ngày [32].