- Dựa trên các kết quả ựạt ựược chúng tôi bước ựầu ựề xuất quy trình sản xuất GlcNAc sử dụng hai enzyme tái tổ hợp endochitinase và βhexosaminidasẹ
PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.3.2. Xác ựịnh nhiệt ựộ tối ưu và ựộ bền nhiệt của β-hexosaminidase
4.3.2.1. Nhiệt ựộ tối ưu của β-hexosaminidase
Kết quả xác ựịnh nhiệt ựộ tối thắch của β-hexosaminidase ựược thể hiện trong hình 4.7.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 41
Hình 4.7: Ảnh hưởng của nhiệt ựộ ựến hoạt tắnh của β-hexosaminidase
Qua hình 4.7 nhận thấy hoạt tắnh của β-hexosaminidase tăng nhanh trong khoảng nhiệt ựộ 25-37 oC, khi nhiệt ựộ tiếp tục tăng lên trên 37 0C thì hoạt tắnh bắt ựầu giảm. đồng thời ở các khoảng nhiệt ựộ trước và sau 37oC hoạt tắnh β- hexosaminidase ựều giảm nên có thể kết luận 37oC là nhiệt ựộ tối thắch cho hoạt ựộng của enzyme, không nên ựể enzyme phản ứng trong ựiều kiện khác ựể tránh ảnh hưởng ựến tốc ựộ thủy phân và sự thu nhận GlcNAc.
Nghiên cứu của Nguyễn và cộng sự (2012), β-hexosaminidase tái tổ hợp của chủng Lactococcus lactis ssp. lactis IL1403 có nhiệt ựộ tối ưu cũng là 37 0C trong ựiều kiện thắ nghiệm sử dụng ựệm citrate phosphat 50 mM, pH 6 [32].
4.3.2.2. độ bền nhiệt của β-hexosaminidase
Tiến hành khảo sát ựộ bền hoạt tắnh β-hexosaminidase ở nhiệt ựộ 30oC và 37oC. Kết quả xác ựịnh ựộ bền nhiệt ựược thể hiện trong hình 4.8.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 42
Hình 4.8: đồ thị xác ựịnh ựộ bền nhiệt của β-hexosaminidase ở 30oC và 37oC
Từ hình 4.8 nhận thấy β-hexosaminidase kém bền hơn so với endochitinasẹ Ở nhiệt ựộ 30 0C, hoạt tắnh của enzyme còn lại là 57,383% sau 30 giờ. Như vậy chu kì bán hủy (t50) của β-hexosaminidase ở tại 30oC là khoảng 35 giờ. Chu kỳ bán hủy của β-hexosaminidase tại 37oC khoảng 17 giờ thấp hơn nghiên cứu của Nguyễn và cộng sự (2012) (có thời gian bán hủy ở 37oC là 52 giờ). Nguyên nhân có thể là enzyme này không bền trong ựệm sodium phosphat 50 mM, pH 6 ở nhiệt ựộ 37 0C. Vì vậy khi muốn ứng dụng ựệm sodium phosphat cho cả hai enzyme endochitinase và β-hexosaminidase trong quá trình sản xuất N-acetyl-D-glucosamine nên chọn nhiệt ựộ 37 0C cho β-hexosaminidasẹ