- Dựa trên các kết quả ựạt ựược chúng tôi bước ựầu ựề xuất quy trình sản xuất GlcNAc sử dụng hai enzyme tái tổ hợp endochitinase và βhexosaminidasẹ
3.3.9.Xác ựịnh nhiệt ựộ tối thắch và ựộ bền nhiệt của endochitinase và β hexosaminidase
định nghĩa ựơn vị hoạt tắnh của β-hexosaminidase và công thức tắnh hoạt tắnh ựược mô tả tương tự như mục 3.3.6.3. Thay vì ựo OD ở bước sóng 540nm chúng tôi sử dụng bước sóng 400nm [33].
3.3.8. Phương pháp xác ựịnh hàm lượng protein bằng phương pháp Bradford
3.3.8.1. Nguyên tắc
Dựa vào sự thay ựổi màu xảy ra khi CBB GỜ250 liên kết với protein trong dung dịch acid. Dạng proton hoá của thuốc nhuộm CBB G-250 có màu da cam ựỏ. Thuốc nhuộm liên kết chặt chẽ với các protein tương tác với nhóm kị nước và các nhóm mang ựiện tắch dương trên phân tử protein. Trong môi trường của các gốc mang ựiện tắch dương, sự proton hoá không xảy ra và có màu xanh xuất hiện.
3.3.8.2. Xác ựịnh nồng ựộ protein theo phương pháp Braford
Việc xác ựịnh nồng ựộ protein của mẫu thắ nghiệm ựược thực hiện như sau: . Ống ựối chứng: 1ml dung dịch ựệm, thêm 5ml dung dịch thuốc nhuộm protein, trộn ựềụ
Ống thắ nghiệm: 1ml dung dịch protein ựã pha loãng ở tỉ lệ thắch hợp, thêm 5ml dung dịch thuốc nhuộm protein, trộn ựềụ
đo màu ở bước sóng 595(nm) cho ựến khi thu ựược kết quả nằm trong khoảng của ựường chuẩn protein.
3.3.9. Xác ựịnh nhiệt ựộ tối thắch và ựộ bền nhiệt của endochitinase và β-hexosaminidase hexosaminidase
Xác ựịnh nhiệt ựộ tối thắch và ựộ bền nhiệt của enzyme theo phương pháp của Nguyễn và cộng sự (2012).
3.3.9.1. Xác ựịnh nhiệt ựộ tối thắch của endochitinase và β-hexosaminidase
- Xác ựịnh nhiệt ựộ tối thắch của endochitinase bằng cách cho enzyme này tác dụng với cơ chất colloidal chitin 2% pha trong ựệm NaH2PO4, pH 6 ở các ựiều kiện nhiệt ựộ khác nhau (30 0C, 37 0C, 45 0C, 50 0C, 55 0C, 60 0C, 70 0C) rồi xác ựịnh hoạt ựộ của endochitinasẹ
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 30