M: Hỗn hợp chitooligosaccharide chuẩn.
PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5 1 Kết luận
5. 1. Kết luận
Dựa trên những kết quả nghiên cứu thu ựược, chúng tôi ựi ựến những kết luận sau:
- Mức ựộ biểu hiện của 02 chủng Ẹcoli trên là rất cao, ựược thể hiện qua kết quả ựiện di SDS-PAGE và hoạt tắnh.
- Tinh sạch enzyme endochitinase và β-hexosaminidase bằng muối (NH4)2SO4 lần lượt là 50% và 60% bão hòa cho hoạt tắnh riêng cao tương ựương với tinh sạch bằng sắc ký ái lực, tuy nhiên hiệu suất thu hồi thấp.
- đặc tắnh của các enzyme trong ựệm NaH2PO4 50 mM như sau:
+ Endochitinase: Nhiệt ựộ tối thắch 50 0C, thời gian bán hủy 9 ngày ở pH 6; pH tối thắch 7,5, thời gian bán hủy 16 ngày ở pH 7 Ờ pH 8.
+ β-hexosaminidase: Nhiệt ựộ tối thắch 37 0C, thời gian bán hủy 9 giờ ở pH 6; pH tối thắch 6, thời gian bán hủy 16 giờ ở pH 7- pH 8.
- Sản phẩm chắnh của quá trình phân giải colloidal chitin của endochitinase là (GlcNAc)2 ngoài ra còn có GlcNAc, (GlcNAc)3; β-hexosaminidase có thể thủy phân sản phẩm phân giải colloidal chitin của endochitinase là (GlcNAc)2 và (GlcNAc)3.
- đề xuất quy trình sản xuất GlcNAc: Nguyên liệu colloidal chitin là 20% trong ựệm NaH2PO4 50 mM, pH 6, ựiều kiện thủy phân của endochitinase ở 50 0C và β-hexosaminidase ở 37 0C.
5.2. Kiến nghị
Do thời gian thực tập, cũng như ựiều kiện phòng thắ nghiệm còn hạn chế, chúng tôi ựề xuất một số vấn ựề như sau:
- Sử dụng ethanol ựể tinh sạch endochitinase và β-hexosaminidase, so sánh với tinh sạch bằng sắc ký ái lực và muối (NH4)2SO4.
- Tối ưu hóa quy trình sản xuất GlcNAc (thời gian thủy phân, nồng ựộ enzyme thắch hợp), phân tắch sản phẩm GlcNAc và hiệu suất thu hồi bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC.
- Nghiên cứu phương pháp thu nhận và làm sạch GlcNAc ựạt ựộ tinh khiết cao nhất.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 53