- Dựa trên các kết quả ựạt ựược chúng tôi bước ựầu ựề xuất quy trình sản xuất GlcNAc sử dụng hai enzyme tái tổ hợp endochitinase và βhexosaminidasẹ
PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1.2. Xác ựịnh mức ựộ biểu hiện của gene mã hóa cho endochitinase và β hexosaminidase
hóa cho endochitinase và β-hexosaminidase
4.1.1. Nuôi cấy chủng Ẹcoli tái tổ hợp thu sinh khối
Sau 16 giờ nuôi cấy chủng vi khuẩn Ẹcoli tái tổ hợp ở 25oC, lắc 150 rpm. Sinh khối tế bào thu ựược từ 1 lắt môi trường nuôi cấy là: 10,798 ổ 0,791 gam ựối với chủng Ẹcoli chứa gene mã hóa cho endochitinase từ Bacillus lichenifomis
DSM13 và 9,444 ổ 0,548 gam ựối với chủng Ẹcoli chứa gene mã hóa cho β- hexosaminidase từ Lactococcus lactis ssp. lactis IL1403. Sinh khối tế bào ựược phá vỡ, thu dịch enzyme dùng cho nội dung nghiên cứu tiếp theọ
4.1.2. Xác ựịnh mức ựộ biểu hiện của gene mã hóa cho endochitinase và β-hexosaminidase hexosaminidase
Mức ựộ biểu hiện của gene mã hóa cho endochitinase và β-hexosaminidase từ chủng Ẹcoli tái tổ hợp ựược biểu hiện ở kết quả chạy ựiện di hình 4.1 và 4.2 như sau:
Hình 4.1: định tắnh khả năng biểu hiện endochitinase của vi khuẩn Ẹcoli tái tổ hợp bằng ựiện di SDS-PAGE
(Giếng 1: Protein thô của Ẹcoli không bổ sung IPTG vào môi trường nuôi cấỵ Giếng 2: Protein thô của Ẹcoli bổ sung IPTG vào môi trường nuôi cấỵ Giếng 3: Protein chuẩn (Precision Plus Protein standard, Biorad)
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 33
Hình 4.2: định tắnh khả năng biểu hiện β-hexosaminidase của vi khuẩn Ẹcoli tái tổ hợp bằng ựiện di SDS-PAG
(Giếng 1: Protein thô của Ẹcoli bổ sung IPTG vào môi trường nuôi cấỵ Giếng 2: Protein chuẩn (Precision Plus Protein standard, Biorad). Giếng 3 Protein thô của Ẹcoli không bổ sung IPTG vào môi trường nuôi cấỵ
Từ kết quả hình 4.1 và 4.2 có thể thấy vạch băng protein của hai enzyme endochitinase và β-hexosaminidase lần lượt khoảng 67 kDa và 37kDa, ựậm hơn nhiều so với protein ngoại laị điều ựó có thể khẳng ựịnh rằng mức ựộ biểu hiện gene mã hóa cho endochitinase và β-hexosaminidase ở hai chủng Ẹcoli tái tổ hợp là rất caọ Dịch nuôi cấy có thể sử dụng ựể tinh sạch enzyme cho các nghiên cứu tiếp theọ