E + S[ES]E + P
Trong enzyme học, người ta khơngđịnh lượng enzyme một cách trực tiếp mà thường xác
định gián tiếp thơng qua xácđịnh mức độ hoạt động (hoạt tính) của enzyme đĩ. Về nguyên tắc, cĩ thể chia ra 3 nhĩm phương pháp sau:
Đo lượng cơ chất bị mấtđi hay lượng sản phẩmđược tạo thành trong một thời gian nhất
định ứng với một nồngđộ enzyme xácđịnh.
Đo thời gian cần thiếtđể thuđược một lượng biến thiên nhất định của cơ chất hay sản phẩm ứng với một nồngđộ enzyme nhấtđịnh.
Chọn nồngđộ enzyme như thế nào để trong một thời gian nhất định thu được sự biến thiên nhấtđịnh về cơ chất hay sản phẩm.
Bảng 1.6:Các phương pháp để xác định hoạt tính enzyme
Nhĩm Các thơng số cốđịnh Các thơng số thayđổi
1 Thời gian
Nồngđộ E Lượng S hay P
2 Lượng S mấtđi (hay lượng P tạo thành)
Nồngđộ E Thời gian
3 Thời gian
Lượng S mấtđi (hay lượng P tạo thành) Nồngđộ E
Để dễ dàng cho việc nghiên cứu, người tađãđưa ra các khái niệm: [2]
Đơn vị enzyme quốc tế (International Units): là lượng enzyme cĩ khả năng xúc tác làm chuyển hĩađược một µmol cơ chất sau một phút ởđiều kiện tiêu chuẩn.
Katal (Kat): là lượng enzyme cĩ khả năng xúc tác làm chuyển hĩađược 1 mol cơ chất sau một giây ởđiều kiện tiêu chuẩn.
Hoạt tính riêng của chế phẩm (specific activity): bằng số lượng đơn vị hoạt độ cĩ trong 1đơn vị thể tích protein (đối với chế phẩm lỏng) hoặc trong 1 đơn vị khối lượng protein (đối với chế phẩm rắn).
Hoạt tính riêng của chế phẩm enzyme nĩi lên mức độ tinh khiết của chế phẩm enzyme. Trong quá trình tinh chế, hoạt tính riêng sẽ tăng lênđáng kể.
Hoạt tính tồn phần của chế phẩm enzyme (total activity): là tổng sốđơn vị hoạtđộ cĩ trong chế phẩm.
Trong quá trình tinh chế, hoạt tính tồn phần của chế phẩm sẽ bị giảm. đĩ là sự thất thốt trong quá trình xử lý.
Đối với enzyme urease, các sản phẩm tạo thành sau phản ứng là CO2, NH3đều cĩ thể
định lượng một cách dễ dàng. Chính vì vậy mà nhĩm phương pháp đầu tiên được áp dụng trong việc xácđịnh hoạt tính urease.