Cho khoảng 5 g bột rau đắng vào bình nón, thêm 30ml H2SO4 1N, đun nóng trên nồi cách thủy 15 phút. Để nguội, lọc vào bình gạn. Kiềm hóa bằng NH4OH đến khoảng pH = 9- 10. Lắc với 20 ml chloroform. Sau đó dịch chiết CHCl3được cô cách thủy tới khi còn lại cắn. Hòa tan cắn với 3 ml H2SO4 1N, cho vào 3 ống nghiệm, mỗi ống 1 ml dịch chiết. Ống 1: Nhỏ 2-3 giọt TT Mayer
Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét. Ống 2: Nhỏ 2-3 T Dragendorff
Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét. Ống 3: Nhỏ 2-3 giọt TT Bouchardat Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét.
3.2.1.4. Định tính flavonoid
Cho 5 g bột rau đắng vào bình nón, thêm 30 ml cồn 900,đung cách thủy 10 phút, lọc nóng qua giấy lọc. Dịch lọc đem làm phản ứng định tính:
Phản ứng với kiềm:
Nhỏ 2 giọt dịch lọc lên miếng giấy lọc, để khô. Sau đó hơ lên bình chứa NH4OH đặc Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét.
Trang 39 Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét.
Phản ứng với cyanidin:
Lấy 2ml dịch lọc vào ống nghiệm, thêm một ít bột Mg kim loại. Nhỏ từ từ 10 giọt HCl đậm đặc. Để yên trong vòng vài phút
Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét
-phản ứng với dung dịch FeCl3 5%: lấy 2 ml dịch lọc, thêm 3-5 giọt FeCl3 5%, lắc. Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét.
Phản ứng diazo: Lấy 2ml dịch lọc, thêm 1 ml dung dịch NaOH 10%. Nhỏ vài giọt thuốc thử diazo mới pha. Lắc đều. Sau đó đung nóng trên nồi cách thủy trong vài phút.
Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét.
3.2.1.5. Định tính Saponin:
Hiện tượng tạo bọt: cho vào ống nghiệm 1 g bột rau đắng, thêm 5ml nước, đun sôi nhẹ, lọc nóng. Dịch lộc vào ống nghiệm, thêm 10 ml nước. Lắc mạnh trong vòng 5 phút theo chiều dọc của ống nghiệm. Để yên trong vòng 15 phút
Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét. Phản ứng Salkowski:
Lấy 2g bột rauu đắng vào ống nghiệm, thêm 10 ml nước cất, đun nóng khoảng 800C trong 10 phút, lọc nóng, thu được dịch chiết. Bốc hơi dịch chiết tới cắn. Thêm 1 ml chloroform, lắc cho tan cắn. Thêm 1 ml acid sulfuric đặc, lắc đều
Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét.
3.2.1.6. Định tính anthranoid
Lấy 5g mẫu, thêm 30ml nước cất, đun sôi cách thủy 15 phút. Lọc qua giấy lọc, được dịch chiết
Phản ứng Borntraeger:
- Dạng glycosid:
Lấy 1ml dịch lọc, thêm 1 ml NaOH 10%. Lắc mạnh - Dạng tự do:
+ Lấy 10 ml dịch lọc vào bình gạn, thêm 15 ml chlorofrôm. Gạn lấy phần dịch chloroform (dịch chiết).
Trang 40 Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét.
Vi thăng hoa:
Cho 1 g bột rau đắng vào nắp nhôm. Đặt lên miệng nắp nhôm một lam kính, trên lam kính có để một miếng bông tầm nước lạnh. Đốt nắp nhôm trên ngọn lửa đèn cồn đèn cồn. Sau 5 -10 phút, lấy lam kính ra để nguội. Soi dưới kinh hiển vi.
Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét
3.2.1.7. Định tính glycosid tim
Cho 10 g bột rau đắng vào bình nón dung tích 100ml, thêm 50ml cồn 250, lắc đều để qua 24h. Gạn lấy dịch chiết, loại tạp bằng Pb(CH3COO)2 30%. Khuấy đều, lọc. Lấy một ít dịch lộc đầu vào ống nghiệm nhỏ, thêm tiếp dung dịch Pb(CH3COO)2 30%. Thử lại như trên đến khi không còn kết tủa. Gạn lấy dịch lọc vào bình gạn dung tích 100 ml, chiết 2 lần mỗi lần với 10 ml hỗn hợp CHCl3: EtOH (4:1). Lấy phần dịch chiết CHCl3 và EtOH vào cốc có mỏ đã sấy khô, chia vào 4 ống nghiệm nhỏ, bốc hơi cách thủy tới khô để làm phản ứng (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Phản ứng Liberman:
Ống 1: Thêm 1 ml anhydrid acetic, lắc đêfu cho đến khi tan hết cắn. Đặt nghiêng ống nghiệm 450, thêm từ từ theo thành ống nghiệm 0,5 ml dung dịch H2SO4 để dịch lỏng trong ống nghiệm phân thành 2 lớp. Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét.
Phản ứn Baljet:
Ống 2: Thêm 0,5 ml ethanol 900 lắc. Nhỏ vài giọt thuốc thử Baljet mới pha (gồm 1 phần dung dịch acid piric 1 % và 9 phần dung dịch NaOH 10%). Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét.
Phản ứng Legal :
Ống 3: Thêm 0,5 ml ethanol 900, lắc. Nhỏ 5 giọt thuốc thử natrinitroprussiat 1% và 2 giọt dung dịch NaOH 10%. Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét.
Phản ứng Keller -kiliani:
Ống 4: Thêm 0,5 ml Etnol 900, lắc. Thêm 5 giọt FeCl3 5% trong acid acetic, lắc. Nghiêng ống 450, cho 0,5 ml H2SO4 (tránh xáo trộn). Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét.
Trang 41
3.2.1.8. Định tính coumarin
Cho 5 g bột rau đắng vào bình nón 100 ml, thêm 30 ml cồn 900. Đung cách thủy sôi 15 phút. Lọc được dịch chiết
Phản ứng mởđóng vòng lacton:
Cho vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 1 ml dịch chiết:
Ống 1: Thêm 0,5 ml dung dịch NaOH 10%. Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét Ống 2: Để nguyên. Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét.
Đung cả hai ống nghiệm đến sôi, để nguội. Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét. Thêm vào cả hai ống nghiệm, mỗi cống 2 ml nước cất. Lắc đều, Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét.
Thêm vào ống 1 vài giọt HCl đặc, Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét.
Phản ứng diazo hóa:
Cho vào ống nghiệm 1 ml dịch chiết, thêm 2 ml dung dịch NaOH 10%. Đun cách thủy sôi 5 phút rồi để nguội. Thêm vài giọt thuốc thử diazo mới pha. Quan sát hiện tượng ghi kết quả, nhận xét.
Quan sát huỳnh quang dưới ánh sáng tử ngoại khi cho tác dụng với dung dịch kiềm. Nhỏ vài giọt dịch lọc lên lớp giấy lọc, nhỏ chồng tiếp vài giọt dung dịch NaOH 10% sấy nhẹ. Che một phần diện tích vết chất bằng 1 đồng kim loại, đặt dưới ánh sáng tử ngoại 366 nm trong vòng vài phút. Bỏ đồng tiền kim loại, tiếp tục quan sát sau vài phút. Quan sát hiện tượng và ghi kết quả.